живая туляремийная вакцина nik-sp. francisella tularensis. Туляремийная вакцина живая

способ получения концентрата микробных клеток для получения живой туляремийной вакцины - патент РФ 2528878

Изобретение относится к технологии производства медицинских иммунобиологических препаратов и может быть использовано в практике производства туляремийной живой вакцины. Изобретение представляет собой способ получения концентрата микробных клеток для получения живой туляремийной вакцины, характеризующийся тем, что туляремийный микроб выращивают при температуре 37°C в течение 20±2 часов на питательной среде, содержащей, г/л: сухой ферментативный гидролизат фибрина, приготовленный из отхода сывороточно-вакцинного производства 50-55, глюкозу 10, пантотенат кальция 0,05, с последующим концентрированием микробной массы путем микрофильтрации культуры туляремийного микроба через мембраны с размером пор 0,2 мкм в режиме тангенциального потока жидкости. Изобретение направлено на получение концентрата микробных клеток туляремийного микроба, пригодного для получения живой туляремийной вакцины. 1 пр.

Изобретение относится к технологии производства медицинских иммунобиологических препаратов и может быть использовано в практике производства туляремийной живой вакцины.

В настоящее время иммунизация является самым надежным способом профилактики туляремии. В 2011 году в Российской Федерации против туляремии вакцинировано 317953 человека и ревакцинировано 1294433 человека (О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации в 2011 году: Государственный доклад. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2012. - 316 с.).

Туляремийная живая сухая вакцина в 2011 году Приказом Министерства здравоохранения и социального развития РФ ( № 51н от 31 января 2011 г.) включена в Национальный календарь профилактических прививок по эпидемическим показаниям, предусматривающим проведение вакцинации для населения, проживающего на энзоотичных по туляремии территориях, а также прибывших на эти территории лиц, выполняющих ряд работ.

Основным компонентом вакцины туляремийной живой сухой являются клетки туляремийного микроба вакцинного штамма 15 НИИЭГ.

Известен способ получения препарата для активной иммунизации против туляремии (Патент на изобретение № 2221591, МПК A61K 39/40, 20.01.2004 г.), в соответствии с которым вирулентные и вакцинные штаммы Francisella tularensis выращивают в жидкой питательной среде, с последующей инактивацией биомассы фенолом в концентрации 0,5-2% и отделением низкомолекулярных примесей. Клетки отделяли путем центрифугирования при 10000 g в течение 30 минут, затем ресуспендировали в стерильном фосфатно-солевом буферном растворе и подвергали обработке на ультразвуковом дезинтеграторе при 0°C. Дезинтеграт клеток центрифугировали при 12000 g в течение 30 минут, полученный супернатант - при 100000 g. После удаления супернатанта осадок препарата для активной иммунизации ресуспендировали в деионизованной воде и трижды переосаждали путем центрифугирования при 100000 g с последующим ресуспендированием в деионизованной воде. Очищенный препарат лиофилизовали. Способ предназначен для получения препарата для активной иммунизации против туляремии. Препарат, полученный по данному способу, обеспечивает защиту высокочувствительных животных при заражении высоковирулентными штаммами F. tularensis как при парентеральном, так и при пероральном способе иммунизации. Однако в связи с тем, что для получения целевого продукта клетки подвергают лизису фенолом и разрушают ультразвуковым воздействием, то описанный способ не пригоден для получения живой туляремийной вакцины.

Известен способ получения биомассы туляремийного микроба (Патент на изобретение № 2451743, МПК C12N 1/20, 27.05.2012 г.), согласно которому предварительно подготовленный посевной материал туляремийного микроба культивируют при pH 6,8-7,0, температуре 37°C в течение 18±2 ч на жидкой питательной среде, содержащей, г/л: панкреатический гидролизат рыбокостной муки 20,5, стимулятор роста гемофильных организмов 5, экстракт пекарских дрожжей 2,3, сульфат магния 1,0, сульфит натрия 0,7, дигидрофосфат калия 1, цистеин 0,5. При культивировании туляремийного микроба в среду добавляют глюкозовитаминную добавку в количестве 2 мл на 100 мл среды (1,23 г/л). Затем культуральную жидкость освобождают от клеточной массы центрифугированием при 9000 об/мин в течение 20 мин или на сепараторе АСГ-3М при том же режиме. С полученного концентрата клеток получают антигены гидродинамическим смывом с последующим поэтапным осаждением с постепенным понижением pH (от 7,0 до 4,3) для освобождения от балластных веществ. На последнем этапе переосаждение повторяют 2-3 раза для окончательной очистки препарата. Технология позволяет получать большие объемы (для производственных целей) биомассы туляремийного микроба. Однако этапы отделения клеточной массы (получения клеточного концентрата) направлены на разрушение клеток. Концентрат, полученный по данному способу, пригоден для получения антигенных компонентов при создании диагностических препаратов против возбудителя туляремии и не может использоваться в качестве промежуточного компонента для дальнейшего приготовления живой туляремийной вакцины.

Кроме того, технология получения концентрата микробных клеток, получаемого по данному способу, не предусматривает асептического ведения процесса, что может привести к контаминации посторонней микрофлорой и, следовательно, выбраковке данного полупродукта для получения туляремийной живой вакцины, так как одним из требований является отсутствие посторонней микрофоры в культуре туляремийного микроба на всех технологических этапах приготовления живой вакцины.

Техническим результатом является получение концентрата микробных клеток туляремийного микроба, пригодного для получения живой туляремийной вакцины.

Технический результат достигается тем, что туляремийный микроб выращивают методом глубинного культивирования при температуре 37°C в течение 20±2 часов на жидкой питательной среде pH 7,2, содержащей, г/л: сухой ферментативный гидролизат фибрина, приготовленный из отхода сывороточно-вакцинного производства 50-55, глюкозу 10, пантотенат кальция 0,05, с последующим концентрированием микробной массы путем микрофильтрации культуры туляремийного микроба через мембраны с размером пор 0,2 мкм в режиме тангенциального потока жидкости.

Для достижения технического результата разработана жидкая питательная среда, подобран режим выращивания туляремийного микроба и подобраны характеристики пористых мембран, обеспечивающих процесс концентрирования туляремийного микроба.

Возможность использования микрофильтрационного концентрирования микробных клеток туляремии установлена нами экспериментальным путем и неизвестна из доступных источников информации.

Фильтрация в проточном (тангенциальном) потоке является разделительным методом, в котором поток жидкости направляется вдоль мембраны, омывая ее поверхность. Такой смывающий эффект позволяет постоянно удалять отложения, предотвращая их скапливание и образование слоя на поверхности фильтра, которое известно под названием концентрационной поляризации, уменьшающей скорость фильтрации. Материал, меньше номинального размера пор микрофильтрационной мембраны, проходит через нее в линию фильтрата. Материал, превышающей размера пор микрофильтрационной мембраны, «отбрасывается» мембранной и концентрируется в отдельную емкость. Потери продукта за счет незначительного «мертвого» объема мембраны минимальны и сводятся к нулю путем промывки мембранного модуля жидкостью в количестве, соответствующем «мертвому» объему мембраны.

Неоспоримым преимуществами тангенциальной фильтрации являются:

концентрирование и очистка происходят без изменения агрегатного состояния и фазовых превращений;

перерабатываемый продукт не подвергается тепловым и химическим воздействиям;

механическое и гидродинамическое воздействие на биологический материал незначительно;

легко обеспечивается герметичность и асептические условия;

аппаратурное оформление просто по конструкции, компактно, отсутствуют движущиеся детали;

процесс не обладает высокой энергоемкостью.

Возможность осуществления заявляемого изобретения подтверждается следующим примером.

Пример. Получение концентрата микробных клеток.

Для выращивания туляремийного микроба подготовили питательную среду с основой из ферментативного гидролизата фибрина. Для этих целей бульон варят в реакторе: под вакуумом закачивают воду очищенную (дистиллированную воду) согласно расчета, прибавляя 10% на ее выкипание, добавляют 50-55 г/л сухого ферментативного гидролизата фибрина в количестве, обеспечивающем содержание в среде не менее 0,32% аминного азота. Затем вносят глюкозу до концентрации 1%. Все перемешивают и устанавливают в среде pH (7,2±0,2) при помощи 20% раствора натрия гидроокиси и кипятят в течение 30 мин. Бульон фильтруют через фильтр Сальникова при температуре (75±5)°C под давлением (2,5±0,5) МПа. Жидкую среду из ферментативного гидролизата фибрина стерилизуют в паровом стерилизаторе водяным насыщенным паром при (110+2)°C в течение 30 мин, давлении (0,05+0,02) МПа. Перед внесением инокулята посевной культуры в стерильную среду добавляют стерильный раствор пантотената кальция в концентрации 0,005% (0,05 г/л). Приготовление жидкого ферментативного гидролизата фибрина приведено в патенте RU 2425866. Для получения в сухой форме ферментативный гидролизат фибрина концентрировали в 6-7 раз методом выпаривания на установке вакуум-выпарной УВВ-50 и высушивали конвекционным способом на сушильной установке распылительного типа КЯУЛ 101325.002 в «псевдокипящем слое».

Культуру F. tularensis вакцинного штамма 15 НИИЭГ выращивают методом глубинного культивирования на подготовленной жидкой питательной среде при температуре 37°C в течение 20±2 ч часов. После окончания процесса культивирования нативная культура F. tularensis вакцинного штамма 15 НИИЭГ имеет следующие характеристики: pH 7,0±0,1, концентрация микробных клеток 35±0,5 млрд. кл. мл-1 (по отраслевому стандартному образцу мутности - ОСО мутности 42-28-85-П (10 ME) ФГБУ НЦЭСМП Минздравсоцразвития России, эквивалентной концентрации 5 млрд. кл. мл-1), коэффициент жизнеспособности - 62±0,5%, посторонняя микрофлора отсутствует. Далее полученную микробную суспензию F. tularensis подвергают тангенциальной микрофильтрации на ультра-микрофильтрационной установке «Вива-флоу» через мембраны с размером пор 0,2 мкм до сокращения объема микробного осадка в четыре раза. При необходимости добавляют в концентрат стерильный физиологический раствор до восстановления исходного объема нативной культуры и процесс концентрирования повторяют. Полученный концентрат микробных клеток имел следующие характеристики: pH 7,2±0,1, концентрация микробных клеток 135±1,0 млрд. кл. мл-1 (по отраслевому стандарту мутности ФГБУ НЦЭСМП), коэффициент жизнеспособности - 60±0,1%, посторонняя микрофлора отсутствует. Контроль специфической стерильности фильтрата свидетельствовал об отсутствии в нем туляремийного микроба, что говорит о правильном подборе размера пор мембран.

В полученном концентрате не происходит ухудшения характеристик (в сравнении с нативной культурой F. tularensis вакцинного штамма 15 НИИЭГ после ее глубинного культивирования). В частности, pH и коэффициент жизнеспособности остаются на прежнем уровне и не происходит контаминации посторонней микрофлорой. Основываясь на этом, можно утверждать, что полученный концентрат пригоден для получения живой туляремийной вакцины.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения концентрата микробных клеток для получения живой туляремийной вакцины, характеризующийся тем, что туляремийный микроб выращивают при температуре 37°C в течение 20±2 часов на питательной среде pH 7,2, содержащей, г/л: сухой ферментативный гидролизат фибрина, приготовленный из отхода сывороточно-вакцинного производства 50-55, глюкозу 10, пантотенат кальция 0,05, с последующим концентрированием микробной массы путем микрофильтрации культуры туляремийного микроба через мембраны с размером пор 0,2 мкм в режиме тангенциального потока жидкости.

www.freepatent.ru

Лечение и профилактика туляремии. Вакцина и прививка

Туляремия относится к особо опасным инфекциям. Заболевание входит в группу острых зоонозных инфекций, имеющих природную очаговость. Лечение туляремии не представляет особых трудностей. Применение антибиотиков при лечении практически свело к нулю летальность от данного заболевания. Возбудители туляремии (Francisella tularensis) высокочувствительны к антибиотикам группы аминогликозидов и тетрациклина. Нагноившиеся лимфоузлы вскрываются хирургическим путем.

Профилактика туляремии подразделяется на специфическую и неспецифическую. Прививка от туляремии защищает от заболевания сроком на 5 — 7 лет. Мероприятия по эпидемическому надзору за заболеванием направлены на предупреждение заноса и распространение инфекции. Своевременно выявленные природные очаги заболевания среди животных, проведение дератизационных и дезинсекционных мероприятий предупреждают распространение заболевания среди грызунов и передачу заболевания человеку.

Туляремия является высокозаразным заболеванием. Она входит в перечень особо опасных инфекций, подлежащих региональному (национальному) надзору. Естественная восприимчивость человека к заболеванию достигает 100%.

Рис. 1. В природе РФ бактерии туляремии чаще всего поражают зайцев, кроликов, хомяков, водяных крыс и мышей полевок. Заболевание у них протекает бурно и всегда заканчивается смертью.

Лечение туляремии

Антибактериальные препараты при лечении туляремии

Этиотпропная терапия предполагает воздействие на возбудителей туляремии. Хороший эффект в отношении Francisella tularensis оказывают антибиотики группы аминогликозидов (стрептомицин, гентамицин, канамицин) и тетрациклины (доксициклин). При аллергии на антибактериальные препараты данных групп рекомендовано применение цефалоспоринов III поколения, рифампицин и хлорамфеникол. Параллельно с назначением антибиотиков проводится профилактика развития дисбактериоза.

Патогенетическая терапия при лечении туляремии

Патогенетическая терапия при лечении заболевания направлена на борьбу с интоксикацией, гиповитаминозом, аллергизацией организма, на поддержание нормальной работы сердечно-сосудистой системы.

Местное лечение туляремии

При лечении кожных язв используются повязки с антисептиками. Показано физиолечение в виде кварца, лазерного облучения и диатермии. Нагноившиеся бубоны вскрываются хирургическим путем.

В палате у больного необходимо проводить текущую дезинфекцию с использованием современных дезинфицирующих средств.

Больной туляремией опасности для окружающих не представляет.

Рис. 2. Контактный (контакт с больными животными и их биологическим материалом), алиментарный (употребление зараженной пищи и воды), трансмиссивный (укусы инфицированных кровососущих) и аэрогенный (вдыхание инфицированной пыли) — пути передачи инфекции.

Профилактика туляремии

Профилактика туляремии подразделяется на специфическую и неспецифическую.

• Специфическая профилактика туляремии заключается в применении туляремийной вакцины.
• Неспецифическая профилактика включает в себя комплекс мер, направленных на проведение контроля над природными очагами, выявление вспышек заболевания среди животных и проведение мероприятий по уничтожению грызунов и насекомых.

Эпидемиологический надзор

Эпидемиологический надзор является одним из методов профилактики туляремии. Он включает в себя непрерывный мониторинг за заболеваемостью туляремией людей и животных, за циркуляцией возбудителей среди кровососущих членистоногих и животных, систематическое наблюдение за иммунным статусом человека. Полученные результаты используются при планировании и осуществлении комплекса противоэпидемических и профилактических мероприятий.

Рис. 3. Первичный лимфоузел при заболевании имеет большие размеры — от грецкого ореха до 10 см в диаметре. Чаще всего увеличиваются бедренные, паховые, локтевые и подмышечные лимфоузлы.

Неспецифическая профилактика туляремии

Нейтрализация источников патогенных бактерий

Нейтрализация источников патогенных бактерий включает в себя проведение мероприятий по уничтожению грызунов (дератизация) и насекомых (дезинсекция).

Механическая дератизация проводится в жилищах человека, постройках хозяйственного назначения и в хранилищах зерновых. В постройках выявляются и заделываются места проникновения грызунов. Дератизация в полях не проводится.

Рис. 4. Нейтрализация источников патогенных бактерий включает в себя проведение мероприятий по уничтожению грызунов (дератизация) и насекомых (дезинсекция).

Нейтрализация факторов передачи инфекции

Переносят инфекцию комары, слепни и иксодовые и гамазовые клещи. Правильное применение мер индивидуальной защиты — основа профилактики заболеваний, вызванных укусами клещей — клещевого боррелиоза, клещевого энцефалита и туляремии.

Рис. 5. Защитная одежда предотвращает от заползания клещей на кожные покровы человека и укусы грызунов.

Рис. 6. Эффект отпугивания клещей при правильном использовании репеллентов и акарицидных средств достигает 95%.

Как уберечься от туляремии

• Главными источниками возбудителей заболевания являются грызуны и зайцеобразные. Чем больше численность грызунов, тем выше заболеваемость туляремией в их популяции. Для рыбаков опасность представляют водяные крысы. При работе в местах обитания больных животных носить специальную одежду.
• Для избежания заражения рекомендовано хранить продукты питания в герметических контейнерах, а воду — в закрытых емкостях. Употреблять только кипяченую воду.
• Категорически запрещено употреблять в пищу продукты со следами грызунов.
• При снятии шкурок с зайцев и ондатр необходимо пользоваться латексными перчатками. После разделки шкурок необходимо тщательно мыть и дезинфицировать руки.
• Для профилактики проникновения патогенных бактерий через рот следует плавать в открытых водоемах, где купание разрешено.

Профилактические мероприятия в очаге туляремии

При появлении больных проводится эпидемическое расследование (определяются пути заражения и передачи инфекции). Вопросы госпитализации и сроки лечения больного решается в индивидуальном порядке.

Больной туляремией опасности для окружающих не представляет

Обеззараживанию подлежат только вещи больного, загрязненные его выделениями. Прием антибиотиков используется в качестве мер экстренной профилактики. Назначается Рифампицин, Доксициклин или Тетрациклин.

Рис. 7. Прием антибиотиков рифампицина и доксициклина используется в качестве мер экстренной профилактики.

Вакцинация и прививка от туляремии

• Для прививки от заболевания используется живая ослабленная сухая туляремийная вакцина Эльберта-Гайского.
• Вакцинации подлежат лица с высоким риском заражения: рыбаки, охотники, промысловики, заготовители, сельскохозяйственные рабочие, строители, рабочие, выполняющие гидромелиоративные, дератизационные и дезинсекционные виды работ, геологи, рабочие лесозаготовок и расчистке мест отдыха, лица, чья работа связана с живыми культурами возбудителей туляремии.
• Прививка от туляремии проводится после предварительного обследования человека на предмет установления аллергии на компоненты вакцины.
• Прививка от туляремии способствует созданию прочного иммунитета до 5 — 7 лет, после чего проводится ревакцинация.
• Вакцина вводится внутрикожно или накожно (методом насечек) однократно.
• При накожной прививке проявления могут быть в виде небольшой красноты вдоль насечек в течение 2-х дней (отрицательный результат), до гиперемии и отека с 5-10 дня и появления везикул (положительный результат). Через 10 — 15 дней на месте насечек образуется корочка, после ее отпадания образуется рубчик.
• При внутрикожном введении вакцины от туляремии в течение 9 суток развивается местная реакция — гиперемия и инфильтрат до 4 см в диаметре. Увеличение лимфатических узлов и общая реакция возникают в единичных случаях.

Рис. 8. Для прививки от заболевания используется живая ослабленная сухая туляремийная вакцина Эльберта-Гайского

Рис. 9. Прививка от туляремии проводится медицинским персоналом. Вакцина вводится внутрикожно или накожно в среднюю треть плеча.

Рис. 10. Прививка разрешена детям с 7-и летнего возраста, проживающих в эндемичных регионах по туляремии. Повторная ревакцинация проводится через пять лет после оценки состояния иммунитета путем применения серологических проб.

Противопоказания к вакцинации

Лица, которые ранее переболели туляремией или имеют положительные серологические или кожно-аллергические реакции на туляремию к прививке не допускаются.

• Больные с острыми инфекционными заболеваниями и хроническими заболеваниями в стадии обострения допускаются к прививке через 1 месяц после ремиссии (выздоровления).
• Противопоказаниями к прививке являются первичные и вторичные иммунодефициты.
• Лица в период лечения стероидами, химиотерапии и рентгенотерапии к прививкам не допускаются. Вакцинацию у них разрешено проводить не ранее полугода после окончания лечения.
• Противопоказаниями к прививке являются злокачественные новообразования, распространенные рецидивирующие заболевания кожи, аллергические заболевания, системные заболевания соединительной ткани.
• Противопоказаниями к вакцинации является беременность и период лактации.

microbak.ru

«вакцина туляремийная живая сухая»

Вакцина туляремийная представляет собой лиофилизированную культуру живых микробов туляремийного вакцинного штамма 15 НИИЭГ, имеет вид пористой массы желтовато-белого цвета.

Иммунологические свойства. Вакцина туляремийная через 20-30 дней после прививки обеспечивает развитие иммунитета продолжительностью до 5 лет.

Назначение. Профилактика туляремии с 7-летнего возраста (с 14 лет в очагах полевого типа). Прививкам подлежит население, проживающее на энзоотичных по туляремии территориях, а также прибывшие на эти территории лица, выполняющие следующие работы: сельскохозяйственные, гидромелиоративные, строительные, другие работы по выемке и перемещению грунта, заготовительные, промысловые, геологические, изыскательные, экспедиционные, дератизационные и дезинсекционные; по лесозаготовке, расчистке и благоустройству леса, зон оздоровления и отдыха населения.

^

Перед каждой прививкой у вакцинируемого в обязательном порядке определяют наличие специфического иммунитета с помощью одной из серологических или кожноаллергических реакций. Прививкам подлежат лица с отрицательной реакцией.

Вакцинацию проводят однократно накожно или внутрикожно. Одна доза при накожном введении составляет 2 капли и содержит 2108 микробных клеток, при внутрикожном ведении 0,1 мл и содержит 107 микробных клеток. Ревакцинацию проводят по показаниям через 5 лет той же дозой.

Допускается одновременная накожная вакцинация взрослых лиц живыми вакцинами против туляремии, бруцеллёза и чумы (на разных участках тела).

Не подлежит применению вакцина, целостность упаковки которой повреждена, с изменёнными физическими свойствами (посторонние примеси, нерастворяющиеся хлопья), с истёкшим сроком годности, при нарушении режима хранения.

Вскрытие ампул и процедуру введения препарата осуществляют при строгом соблюдении правил асептики и антисептики. Разведённая вакцина, сохраняемая с соблюдением правил асептики, может быть использована в течение 2 часов. Неиспользованную вакцину уничтожают кипячением в течение 30 минут.

Проведённую прививку регистрируют в установленных учётных формах с указанием наименования препарата, даты прививки, дозы, названия предприятия-изготовителя препарата, номера серии, реакции на прививку.

^

Сухую вакцину разводят водой для инъекций, находящейся в комплекте с препаратом, в объёме, который указан на этикетке ампулы. Ампулу встряхивают в течение 3 минут до образования гомогенной взвеси.

Прививку проводят на наружной поверхности средней трети плеча. Кожу перед прививкой обрабатывают спиртом или смесью спирта с эфиром, применение других дезинфицирующих средств не допускается. После испарения спирта и эфира на обработанный участок кожи стерильной глазной пипеткой наносят по одной капле разведённой вакцины в двух местах на расстоянии 30-40 мм друг от друга. Кожу плеча слегка натягивают и стерильным скарификатором (оспопрививательным пером) через каждую нанесённую каплю вакцины делают по 2 параллельные насечки длиной 10 мм. Насечки не должны кровоточить, кровь должна выступать только в виде мелких росинок. Плоской стороной оспопрививательного пера вакцину втирают в насечки в течение 30 секунд и дают подсохнуть 5-10 минут.

^

Для внутрикожного безыгольного введения вакцину разводят так же, как для накожного применения. Затем стерильным шприцом 1 мл переносят в стерильный флакон для инъектора, куда добавляют 19 мл 0, 9%-го раствора натрия хлорида для инъекций. 20 мл полученной взвеси содержит 200 доз вакцины для внутрикожного введения. Место инъекции вакцины предварительно обрабатывают спиртом или смесью спирта с эфиром. Вакцину вводят внутрикожно в объёме 0, 1 мл в наружную поверхность средней трети плеча согласно инструкции по применению инъектора БИ-ЗМ с противоинфекционным протектором ППИ-2 при режиме, рассчитанном на внутрикожное введение.

^

Местная реакция при накожной прививке должна развиться у всех привитых. На месте насечек с 4-5 дня, а у некоторых вакцинированных в более поздние сроки (до 10 дня) развивается гиперемия и отёк диаметром до 15 мм. По ходу насечек могут появиться везикулы размером с просяное зерно. С 10-15 дня на месте прививки образуется корочка, местные явления стихают, после отделения корочки на коже остаётся рубчик. Иногда может наблюдаться небольшое кратковременное увеличение и болезненность регионарных лимфатических узлов. При отрицательном результате вдоль насечек отмечается только небольшая краснота в течение 1-2 дней.

При внутрикожном способе введения местная реакция продолжительностью до 9 суток характеризуется умеренно выраженной гиперемией и инфильтратом кожи диаметром до 40 мм, редко увеличением регионарных лимфатических узлов. Общая реакция возникает в единичных случаях с 3-4 дня и выражается недомоганием, головной болью, реже кратковременным повышением температуры до 38°С. Эти явления исчезают через 2-3 суток. Крайне редко у привитых на третьей-четвёртой неделе после вакцинации появляются общая и местная реакция аллергического характера.

У лиц, ранее болевших туляремией или ревакцинированных, общая и местная реакция на прививку развивается более бурно. Угасание прививочных реакций при этом идёт быстрее, чем у первично вакцинированных.

Прививаемость вакцины при накожном введении проверяют через 5-7 суток, а в случае отсутствия кожной реакции повторно на 12-15 день. Оценку результатов внутрикожной вакцинации проводят через 4-5 суток после прививки. Положительной реакцией считают наличие гиперемии и инфильтрата диаметром не менее 5 мм. Лица с отсутствием положительного результата прививки подлежат повторной вакцинации через 30 дней после определения наличия специфического иммунитета.

Учитывая возможность развития анафилактического шока у отдельных высокочувствительных лиц, вакцинированный должен находиться под медицинским наблюдением не менее 30 минут. Места проведения прививок должны быть обеспечены средствами противошоковой терапии.

Противопоказания

• Переболевание туляремией. Положительная серологическая или кожно-аллергическая реакция на туляремию.
• Острые инфекционные и неинфекционные заболевания, хронические заболевания в стадии обострения - прививки проводят не ранее, чем через 1 месяц после выздоровления (ремиссии).
• Первичные и вторичные иммунодефициты. При лечении стероидами, антиметаболитами, химио- и рентгенотерапии прививки проводят не ранее, чем через 6 месяцев после окончания лечения.
• Системные заболевания соединительной ткани.
• Злокачественные новообразования и злокачественные болезни крови.
• Распространённые рецидивирующие заболевания кожи.
• Аллергические заболевания (бронхиальная астма, анафилактический шок, отек Квинке в анамнезе).
• Беременность и период лактации.

Меры предосторожности. Категорически запрещается вакцину, разведённую для накожного применения, вводить внутривенно.

Форма выпуска. Выпускается в комплекте. Комплект состоит из 1 ампулы вакцины и 1 или 2 ампул воды для инъекций. Упаковка содержит 3 или 5 комплектов.

Условия хранения и транспортировки: вакцину хранят и транспортируют в соответствии с СП 3. 3. 2. 028-95 при температуре не выше 8°С.

medznate.ru

живая туляремийная вакцина nik-sp. francisella tularensis - патент РФ 2308969

Изобретение относится к области создания препаратов микробиологического происхождения и может найти применение в здравоохранении, медицине и ветеринарии. Сущность способа: вакцинный штамм Nik-sp. F. tularensis получают путем селекции микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы штамма 15 НИИЭГ Francisella tularensis. Штамм представляет собой S-форму с максимальной иммунизирующей дозой для лабораторных животных при подкожном введении от 1×10 4 до 1×108 микробных клеток и способен защищать их от инфицирования Francisella tularensis subsp. tularensis 503. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311. Низкая реактогенность, высокая стабильность, возможность использования стандартных сред и технологий для культивирования, хранения и приготовления позволяют использовать его в качестве живой туляремийной вакцины взамен существующей 15 НИИЭГ F. tularensis, 2 табл.

(56) (продолжение):

2221591 C1 (ЖЕМЧУГОВ В.Е.) 01.27.2003. ELLIS S. et al. Tularemia, Clin. Microbiol. Rev., 2003, vol.15, №4, pp.631-646.

Изобретение относится к области создания препарата микробиологического происхождения и может найти применение в здравоохранении, медицине и ветеринарии.

Известен вакцинный штамм 75 НИИЭГ F. tularensis и его прототип - LVS F. tularensis, используемый на Западе, в США и Канаде против возбудителя туляремии голарктической разновидности - Francisella tularensis subsp. tularensis, в частности F. tularensis subsp. tularensis 503.

Вакцинный штамм 75 НИИЭГ F. tularensis получен путем аттенуации (адаптации) вирулентного штамма F. tularensis subsp. tularensis 503 в 1932-36 гг. Б.Я.Эльбертом и Н.А.Гайским. Показав эффективность вакцинного штамма на лабораторных животных, Н.А.Гайский в 1941-42 гг. проверил созданную им подкожную туляремийную вакцину в очагах инфекции. В 1945 г. Б.Я.Эльберт предложил накожный метод вакцинации, что упростило проведение прививок. С 1949 г. была введена массовая противотуляремийная вакцинация сельского населения в неблагополучных по туляремии районах, приведшая к резкому снижению заболеваемости. В начале 50-х годов вакцинный штамм 75 НИИЭГ F. tularensis был передан в США, после чего через несколько лет появился его прототип LVS F. tularensis, который по своим биологическим, биохимическим, культурально-морфологическим и другим свойствам не отличается от штамма 75 НИИЭГ F. tularensis.

Живая туляремийная вакцина 75 НИИЭГ F. tularensis считается одной из лучших в мире бактериальных вакцин, однако имеет ряд недостатков:

1. Использование в постоянной практике живой туляремийной вакцины 75 НИИЭГ F. tularensis и ее прототипа LVS F. tularensis более 50-ти лет привело не только к изменению свойств первоначально полученной вакцины, но и в значительной степени увеличило риск утраты вакцинного штамма.

2. Высокая остаточная вирулентность туляремийной вакцины на лабораторных животных (Значение LD50 для мышей линии Balb/c составляет 1×103 микробных клеток на животное) прямо связана с высоким процентом осложнений, возникающих при массовой иммунизации населения.

3. При выращивании туляремийного вакцинного штамма на питательных средах популяция получаемых бактерий способна к диссоциации в авирулентную для лабораторных животных и не формирующую защитного иммунитета R-форму F. tularensis (Западный прототип - LVSR F. tularensis). При высоком проценте бактерий R-формы F. tularensis в популяции живой туляремийной вакцины последняя непригодна к использованию, так как не способна формировать у человека длительный напряженный иммунитет против вирулентных штаммов туляремии.

В качестве наиболее близкого аналога данного изобретения предлагается живая туляремийная вакцина на основе штамма 15 НИИЭГ F. tularensis (Олсуфьев Н.Г. Туляремия. Иммунология // Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. - М., 1966. - Т.VII. - С.196-199). Данная вакцина выбрана в качестве прототипа, потому что она имеет то же назначение, что и заявляемое изобретение, а штамм 75 НИИЭГ F. tularensis используется в заявленном изобретении для получения вакцинного штамма

Технический результат изобретения заключается в получении микробиологическим способом селекционного мутанта R-формы F. tularensis, лишенного вышеперечисленных недостатков, а именно штамма Nik-sp. F. tularensis Nik-sp. Francisella tularensis, который является селекционным мутантом, полученным микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы F. tularensis.

Для решения поставленной задачи предложена живая туляремийная вакцина, отличающаяся тем, что она включает штамм Francisella tularensis Nik-sp., депонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311, полученный путем селекции микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы штамма 15 НИИЭГ Francisella tularensis, представляющий собой S-форму с максимальной иммунизирующей дозой для лабораторных животных при подкожном введении от 1×10 4 до 1×108 микробных клеток и способный защищать их от инфицирования Francisella tularensis subsp. tularensis 503.

До настоящего времени во всем мире принято считать, что при последовательных пересевах живой туляремийной вакцины 15 НИИЭГ F. tularensis (или ее прототипа - LVS F. tularensis) возникающая в популяции диссоциация является естественной (природной) и носит необратимый характер. То есть возникшие в процессе диссоциации туляремийной вакцины бактерии R-формы F. tularensis, утратив остаточную вирулентность для лабораторных животных, способность формировать напряженный Т- и В-клеточный иммунитет, а также ряд других важных свойств (например, способность длительное время сохраняться и частично размножаться в организме чувствительных к туляремии лабораторных животных), являются стойкими природными мутантами. Эти мутантные бактерии ни при каких обстоятельствах не способны вновь полностью или частично восстанавливать свойства туляремийной вакцины, поэтому в разных лабораториях мира выделенную и охарактеризованную чистую линию бактерий R-формы F. tularensis считают «консервативной», «тупиковой» и так далее.

Показано, что данное представление о R-форме F. tularensis является ошибочным. При частых последовательных пересевах популяции бактерий R-формы F. tularensis на питательных средах с изменением рН среды и ряда других параметров с низкой частотой возникают ее «мутантные» формы, которые частично восстанавливают свойства живой туляремийной вакцины 15 НИИЭГ F. tularensis. Чистая линия бактерий, возникшая в результате мутации бактерий R-формы F. tularensis, получила аббревиатуру Nik-sp. Francisella tularensis.

Заключение о видовой принадлежности штамма Nik-sp. с помощью анализа 16S РНК получено в ВКПМ ФГУП ГосНИИГенетика.

Анализ последовательностей 16S рРНК показал, что исследуемый штамм, заявленный как Nik-sp., принадлежит к виду бактерий Francisella tularensis, причем со штаммами Francisella tularensis subsp. holarctica и Francisella tularensis var. tularemia гомология составляет 97%.

Основные свойства штамма Nik-sp. F. tularensis:

Культурально-морфологические. Бактерии представляют собой мелкие кокковидные и палочковидные клетки размерами 0,2-0,7 мкм, неподвижны, грамотрицательны, образуют капсулу. Бактерии Nik-sp. обладают полиморфизмом. Штамм Nik-sp. аэроб, не растет на простых средах, ауксотроф, культивируется при +37°С в средах, богатых витаминами. Посев культуры на питательные среды выдерживают в термостате от двух до семи суток. Штамм Nik-sp. можно выращивать на средах с мозговой, селезеночной, печеночной тканями, экстрактами сердца, гемоглобином или черным альбумином. На плотных питательных средах бактерии Nik-sp. F. tularensis после высева из внутренних органов чувствительных лабораторных животных методом мазков-отпечатков находятся в S-форме и образуют колонии серо-белого цвета. Белый цвет колоний усиливается, если чашки с посевом выдержать 2-3-е суток в холодильнике (+4°С). При пассировании на лабораторных животных с последующим выделением культуры из внутренних органов колонии штамма Nik-sp. F. tularensis приобретают белый цвет и становятся практически неотличимы от колоний вакцинного штамма 15 НИИЭГ F. tularensis.

Стабильность популяции. При пересевах на плотных питательных средах культура Nik-sp. очень стабильна и практически не диссоциирует в другие формы. При частых пересевах (более 20 раз), а также после длительного хранения в лиофильно высушенном состоянии возможно появление мутантов R-формы F. tularensis, с частотой 10 -7-10-8.

Биохимические. Клетки штамма Nik-sp. F. tularensis расщепляют белки с выделением сероводорода, на среде Даунса ферментируют глюкозу и мальтозу, не ферментируют глицерин, сахарозу и лактозу, непостоянно ферментируют декстрозу и фруктозу. Нечувствительны к эритромицину, олеандомицину, полимиксину, пенициллину, стрептомицину, не обладает цитруллинуреидазной активностью. Все биохимические свойства селекционного мутанта до конца не изучены.

Иммунохимические и серологические. Штамм Nik-sp. F. tularensis легко агглютинирует с коммерческой лошадиной сывороткой по типу агглютинации вакцинного штамма 15 НИИЭГ F. tularensis, а в реакциях иммунодиффузии (РИД) и иммуноэлектрофореза с коммерческой сывороткой формирует линии преципитации, характерные для антигенов вакцинного штамма. Экспериментальные сыворотки, полученные против штамма Nik-sp. F. Tularensis, бедны специфическими антителами в сравнении с коммерческой и экспериментальной кроличьей сыворотками, полученными против штамма 75 НИИЭГ F. tularensis.

Отношение к фагам данного вида. Штамм Nik-sp. F. tularensis, как и все семейство Francisella, собственных фагов не имеет.

Генетические особенности. Клетки штамма Nik-sp. F. tularensis обладают природной устойчивостью к пенициллинам, полимиксинам, макролидам. Для удобства работы с селекционным мутантом Nik-sp. он маркирован хромосомной устойчивостью к стрептомицину (SmR).

Продуктивность. Селекционный мутант Nik-sp. F. tularensis является продуцентом фактора вирулентности гликопротеиновой природы F. tularensis subsp. tularensis 503, который локализован во внешней мембране клетки и капсульном веществе. Данный комплекс способен формировать у лабораторных животных длительный напряженный В- и Т-клеточный иммунитет против F. tularensis subsp. tularensis 503.

Патогенность для лабораторных животных. Штамм Nik-sp. F. tularensis обладает низкой остаточной вирулентностью для беспородных мышей и хомяков в сравнении с вакцинным штаммом 75 НИИЭГ F. tularensis (Согласно «Заключения по проверке лиофильно высушенной культуры Nik. F. tularensis на остаточную вирулентность», проведенную в НИЦ Токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов, значение LD50 для линейных мышей Balb/c составило 5,6×105 микробных клеток на мышь, значение LD50 для золотистых хомяков составило 9,2×10 микробных клеток на мышь). Штамм Nik-sp. F. tularensis авирулентен для морских свинок и кроликов (значение LD50>1×l09 микробных клеток на животное). Заметно сниженная остаточная вирулентность вакцинного штамма Nik-sp. F. tularensis дает основание полагать, что его реактогенность при массовой иммунизации населения будет также снижена, что является безусловным преимуществом перед существующей вакциной 75 НИИЭГ F. tularensis.

Протективные (защитные) свойства. Как показали исследования, при сниженной остаточной вирулентности бактерии Nik-sp. F. tularensis обладают высокой способностью длительное время (более 10 дней) не только сохраняться, но и частично размножаться в чувствительных лабораторных животных, формируя напряженный преимущественно Т-клеточный иммунитет.

Другие свойства. Штамм Nik-sp. F. tularensis в высокой степени чувствителен к бактерицидному действию сыворотки крови и не способен к росту при +42°С.

Условия и состав сред для хранения и поддержания селекционного мутанта. Музейная культура штамма Nik-sp. F. tularensis хранится при температуре +4°С на косяках среды МакКоя до 6 месяцев, в лиофильно высушенном состоянии до 5 лет.

Среда для культивирования. Штамм Nik-sp. F. tularensis культивируется на плотной среде с черным альбумином и жидкой среде Шерера.

Технологические особенности при культивировании. - Технологических особенностей при культивировании штамма Nik-sp. F. tularensis в сравнении с вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis нет.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Изучение остаточной вирулентности селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis.

На плотные питательные среды с гидролизованным гемоглобином (Состав среды: сердечно-мозговой агар, гемоглобин, цистеин, глюкоза) или FT-агар (Производство ФГУП ГНЦ ПМ, Оболенск, Россия)) петлей делают высев культуры Nik-sp. F. tularensis и инкубируют в термостате при +37°С в течение двух суток. Двухсуточную культуру Nik-sp. F. tularensis смывают физиологическим раствором и готовят суспензию бактерий в концентрации 5×10 9 микробных клеток (м.к.) в одном миллилитре. (По оптическому стандарту мутности). Далее готовят серию последовательных разведении суспензии бактерий из расчета, чтобы в 0,2 мл раствора на каждое животное (мыши линии Balb/c или золотистые хомяки) попало от 10 до 108 м.к. Для морских свинок подобные концентрации бактерий готовят в 0,5 мл раствора. Как правило, в каждой группе должно быть не менее 4 мышей или золотистых хомяков, морских свинок не менее двух. При заражении животных параллельно проводят определение количества живых микробных клеток методом высева разведении на питательные среды для получения единичных колоний.

Для каждого вида животных в качестве контроля используют группу, которая не подвергалась заражению. Заражение проводят подкожно в паховую область задней лапки.

Срок наблюдения за экспериментальными и контрольными группами животных составил 35 дней.

В течение всего периода наблюдения был отмечен падеж животных (мышей линии Balb/c в экспериментальных группах от доз 2×108, 2×10 7 и 2×106 м.к.).

В контрольных группах падежа не отмечено. Со второй недели наблюдения из групп линейных мышей и золотистых хомяков часть животных выводили из эксперимента и изучали персистенцию бактерий Nik-sp. F. tularensis (способность бактерий длительное время сохраняться и размножаться в животном), а также возможное поражение паренхиматозных органов (легкие, печень, почки, селезенка) путем выделения бактерий на плотных питательных средах методом мазков отпечатков, приготовления суспензии из паренхиматозных органов, приготовления гистологических препаратов.

По окончании эксперимента все животные (включая контроль) подвергались вскрытию и изучению паренхиматозных органов на возможное наличие бактерий Nik-sp. F. tularensis и поражение паренхиматозных органов.

В результате проведенных исследований установлено наличие остаточной вирулентности (патогенности) штамма Nik-sp. F. tularensis для мышей Balb/c и золотистых хомяков. Значение LD50 для линейных мышей Balb/c составило 5,6×105 м.к. на мышь. Значение LD50 для золотистых хомяков составило 9,2×10 6 м.к. на хомяка. Для морских свинок штамм Nik-sp. F. tularensis оказался авирулентным во всех проверяемых дозах.

Специфичность развития заболевания животных двух видов была подтверждена наличием роста культуры Nik-sp. F. tularensis из мазков отпечатков паренхиматозных органов на питательных средах в проверяемые сроки от двух до пяти недель.

Пример 2. Изучение персистенции селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis и формирование у животных Т-клеточного иммунитета.

Выращивание культуры Nik-sp. F. tularensis и приготовление рабочих разведении проводили, как описано в Примере 1. Мышей Balb/c инфицировали подкожно в паховую область задней лапки суспензией бактерий в концентрациях, близких к значению LD50 - 1×105 и 1×106 м.к. на животное. К началу второй недели (8-й - 9-й день) и далее животных выводили из эксперимента путем эвтаназии и определяли способность бактерий длительное время сохраняться и размножаться в животном путем выделения их на плотных питательных средах методом мазков отпечатков, получения и высева суспензии из паренхиматозных органов. Визуально исследовали возможные изменения паренхиматозных органов (легкие, печень, почки, селезенка), изучали приготовленные из паренхиматозных органов гистологические препараты.

В результате проведенных исследований установлено, что при инфицировании мышей дозой клеток 1×106 м.к. на животное с помощью мазков отпечатков и высева суспензии паренхиматозных органов на 10-й день после инфицирования выделяли единичные колонии Nik-sp. F. tularensis из печени, почки и селезенки. На 14-й день после инфицирования мышей дозой клеток 1×106 м.к. на животное культура Nik-sp. F. tularensis из паренхиматозных органов не выделяется. Визуальное изучение внутренних органов показало увеличение размеров селезенки мышей в среднем в 1,5 раза, что косвенно говорит о наличии в ней пролиферативных процессов, направленных на формирование специфического Т-клеточного иммунитета. Наличие пролиферативных процессов в селезенке подтверждается при исследовании гистологических препаратов. Визуальное и гистологическое изучение печени, легких и почки не показало серьезных поражений этих органов.

Пример 3. Изучение биологической активности бактерий вакцинного кандидата Nik-sp. F. tularensis определяется по двум критериям:

1. Остаточная вирулентность для чувствительных к туляремии животных (мыши, золотистые хомяки, морские свинки).

Для этих животных одна микробная клетка (бактерия) возбудителя туляремии вызывает их гибель.

Вакцинный кандидат Nik-sp. F. tularensis способен убивать мышей в дозе 5,6×105 микробных клеток на животное, золотистых хомяков - 9,2×10 6 микробных клеток на животное. Для морских свинок доза в 2×108 микробных клеток на животное не вызывала гибели, что указывает на авирулентность данных бактерий по отношению к морским свинкам. Это очень важно потому, что именно морская свинка считается моделью, адекватной для человека.

2. Способность к персистенции (сохранению и некоторому размножению бактерий в организме чувствительных животных).

Этот показатель определяется следующим образом. Лабораторным животным вводится доза бактерий ниже той, которая способна вызвать их гибель. Затем через определенное время (как правило, на 7-й, 14-й и 21 день) животных эвтанизируют (умерщвляют) и из их внутренних органов выделяют введенные бактерии. Если изучаемый штамм (например, Nik-sp. F. tularensis) обладает вакцинными свойствами, то он будет выделяться из лабораторных животных до 14-18 дня после иммунизации, но не больше. Этого времени вполне достаточно, чтобы сформировался защитный клеточный иммунитет.

Таким образом, при определении защитных свойств вакцинного кандидата Nik-sp. F. tularensis для каждого вида животных определяется своя доза иммунизации, которая всегда должна быть ниже дозы остаточной вирулентности.

Для мышей максимальная доза может составлять 1×104 микробных клеток на животное, для золотистых хомяков - 1×10 микробных клеток на животное, для морских свинок - 1×10 микробных клеток на животное.

Время, необходимое для формирования защитного иммунитета, после которого возможна проверка вакцинных свойств штамма, должна составлять не менее четырех недель. После четырех недель возможно заражение иммунных животных вирулентным штаммом.

Для существующего вакцинного штамма 15 НИИЭГ F. tularensis, имеющего более высокую остаточную вирулентность, максимальные иммунизирующие дозы для лабораторных животных значительно снижены: для мышей и золотистых хомяков они составляют не более 100 микробных клеток на животное (1×102 м.к. на животное), для морских свинок - 1×106 м.к. на животное.

Сроки, необходимые для формирования защитного иммунитета, также составляют не менее четырех недель после иммунизации.

Для более ясного понимания постановки экспериментов по определению защитного эффекта штамма Nik-sp. F. tularensis в Таблицу из Примера 3 можно ввести дополнительную графу и тогда она будет выглядеть следующим образом.

Пример 4. Изучение протективных (защитных) свойств штамма Nik-sp. F. tularensis.

Как описано в Примере 1, штаммы Nik-sp. F. tularensis и 15 НИИЭГ F. tularensis выращивали в течение 4-х суток и готовили рабочие концентрации суспензий бактерий 2×108 м.к. в объеме 0,5 мл. Иммунизацию морских свинок каждой вакциной проводили подкожно в паховую область задней лапки. При иммунизации животных параллельно проводили определение количества живых микробных клеток методом высева разведении до единичных колоний на питательные среды. Заражение животных суспензией бактерий вирулентного туляремийного штамма F. tularensis subsp. tularensis 503 проводили ипсилатерально в другую заднюю лапку через 21 день после иммунизации. Культуру выращивали в течение 2-х суток на плотной питательной среде и готовили рабочие концентрации растворов, как описано в примере 1. При заражении животных параллельно проводили определение живых микробных клеток методом высева до единичных колоний на питательные среды. Срок наблюдения за морскими свинками составил 30 дней. Контрольная (неиммунизированная) группа морских свинок представлена 15 животными. Результаты эксперимента представлены в Таблице 2.

Срок наблюдения за морскими свинками - 30 суток, n - количество животных в группе; л - летальность животных. В числителе - количество погибших, в знаменателе - количество инфицированных животных;

Т - время гибели животных (в сутках) в течение всего срока наблюдения.

Как видно из представленной таблицы 2, все неиммунизированные (контроль) морские свинки погибли. Срок гибели животных от десяти бактерий вирулентного штамма F. tularensis subsp. tularensis 503 составил в среднем 10 дней. Все морские свинки, предварительно иммунизированные живой туляремийной вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis и штаммом Nik-sp. F. tularensis, остались живы при заражении их 1×10 3 м.к. на животное в течение всего срока наблюдения.

Таким образом, можно считать, что защитный (протективный) эффект обоих штаммов составляет 1000 DCL (1000 безусловно смертельных доз), что является очень хорошим показателем напряженности специфического иммунитета.

Культурально-морфологические, биологические и другие характеристики селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis как новой живой туляремийной вакцины до настоящего времени в литературе не опубликованы.

Как показал комплекс проведенных исследований, селекционный мутант Nik-sp. F. tularensis, полученный из чистой линии бактерий R-формы F. tularensis, только частично восстановил свойства живой туляремийной вакцины 75 НИИЭГ F. tularensis.

Штамм Nik-sp. F. tularensis способен достаточно длительное время сохраняться и размножаться внутри клеток макроорганизма. Этого времени вполне достаточно для формирования напряженного, прежде всего Т-клеточного иммунитета, способного в дальнейшем защитить человека или животное от возбудителя туляремии.

Другого качества живой туляремийной вакцины 75 НИИЭГ F. tularensis - способности сохраняться и размножаться в крови в лабораторных животных, вызывая их быструю гибель, а у людей высокий процент осложнений, - у штамма Nik-sp. F. tularensis нет.

Таким образом, штамм Nik-sp. F. tularensis имеет значительное преимущество перед уже существующей живой вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis, которое дополняется его высокой стабильностью при выращивании на плотных и жидких питательных средах и использованием уже известных традиционных технологий хранения, культивирования и применения вакцины.

Очевидный низкий процент реактогенности вакцинного штамма Nik-sp. F. tularensis при иммунизации населения, его высокая стабильность, использование стандартных сред и технологий для культивирования хранения и приготовления открывает следующие возможности:

1. Для здравоохранения и медицины - использование в качестве живой туляремийной вакцины Nik-sp. F. tularensis взамен существующей 15 НИИЭГ F. tularensis (или ее западного прототипа LVS F. tularensis} или сохранение ее как вакцины резерва. На основе штамма Nik-sp. F. tularensis разработка новых высокоэффективных биологических вакцин, высокоспецифичных диагностикумов, лечебных сывороток, а также иммуномодуляторов.

2. Для ветеринарии - использование в качестве живой туляремийной вакцины Nik-sp. F. tularensis для иммунизации животных особо ценных и редких пород (при их разведении), а также животных в заповедниках, зоопарках и т.д.

Вакцина 15 НИИЭГ F. tularensis (или ее западный прототип LVS F. tularensis) не могут использоваться для этих целей в силу их высокой остаточной вирулентности для большинства диких животных.

Учитывая свойства селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis, данный микроорганизм 29.11.05 года депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311.

Источники информации

1. Olsufjev, N.G. (1975) Taxonomy, Microbiology and Laboratory Diagnosis of Tularemia Pathogen, pp.192. Medicine, Moscow.

2. Eigelsbach, H.T. and Downs, C.M. (1961) Prophylactic effectiveness of live and killed tularemia vaccines. I. Production of vaccine and evaluation in the white mouse and guinea pig. J. Immunol. 87, 415-425.

3. Cherwonogradzky, J.W., Knodel, M.H. and Spence, M.R. (1994) Increased encapsulation and virulence of Francisella tularensis live vaccine stain (LVS) by subculturing on synthetic medium. Vaccine 12, 773-775.

4. Kormilitsyna, M.I. and Meshcheryakova, I.S. (1996) The new vaccine strains (or variants) of Francisella tularensis. FEMS Immunology and Medical Microbiology 13, 215-219.

5. Мещерякова И.С. Антигены туляремийного микроба, их серологическая характеристика и применение в реакции гемагглютинации. Дисс. канд. 1968.

6. Мещерякова И.С. Таксономия, идентификация и иммунологическая диагностика туляремии. Дисс.докт. 1991.

7. Олсуфьев Н.Г. Туляремия. Иммунология // Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. - М., 1966. - Т.VII. - С.196-199

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Живая туляремийная вакцина, отличающаяся тем, что она включает штамм Francisella tularensis Nik-sp., депонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311, полученный путем селекции микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы штамма 15 НИИЭГ Francisella tularensis, представляющий собой S-форму с максимальной иммунизирующей дозой для лабораторных животных при подкожном введении от 1·10 4 до 1·108 микробных клеток, и способный защищать их от инфицирования Francisella tularensis subsp. tularensis 503.

www.freepatent.ru

Смотрите также

• 
  Вакцина вич 2017
• 
  Вакцина инактивированная аденовирусная
• 
  Акдс вакцина расшифровка
• 
  Производство вакцину вирусную
• 
  Вакцина ротавек корона
• 
  Акдс зарубежная вакцина
• 
  Реактогенные вакцины это
• 
  Вакцина живая бцж
• 
  Вакцина гриппозная живая
• 
  Вакцина для котят
• 
  Вакцина для щенков