Забыли пароль?
Регистрация
О компании
Доставка
Каталог товаров  
Контакты		 Задать вопрос
Как сделать заказ
Рекомендации
Партнёрам
Получить консультацию
Ваша корзина

В корзине 0 товаров
  • Заказать
    		•
  • Очистить
    		•

    Каталог товаров

    ГлавнаяВакциныРекомбинантные вакцины

    Рекомбинантные вакцины. Рекомбинантные вакцины


    / вирусология шпоры / Противовирусные вакцины нового поколения ( Рекомбинантные, синтетические, ДНК-вакцины

    Рекомбинантные (векторные) вакцины, полученные методами генной инженерии. Суть метода: гены вирулентного микроорганизма,отвечающий за синтез протективных антигенов, встраивают в геном какого - либо безвредного микроорганизма, который при культивировании продуцирует и накапливает соответствующий антиген. Примером может служить рекомбинантная вакцина против вирусного гепатита B, вакцина против ротавирусной инфекции. Наконец, имеются положительные результаты использования т.н. векторных вакцин, когда на носитель - живой рекомбинантный вирус осповакцины (вектор) наносятся поверхностные белки двух вирусов: гликопротеин D вируса простого герпеса и гемагглютинин вируса гриппа А. Происходит неограниченная репликация вектора и развивается адекватный иммунный ответ против вирусной инфекции обоих типов. Действие отдельных компонентов микробных, вирусных и паразитарных антигенов проявляется на разных уровнях и в разных звеньях иммунной системы. Их результирующая может быть лишь одна: клинические признаки заболевания - выздоровление - ремиссия - рецидив - обострение или другие состояния организма. Для производства этих вакцин применяют рекомбинантную технологию, встраивая генетический материал микроорганизма в дрожжевые клетки, продуцирующие антиген. После культивирования дрожжей из них выделяют нужный антиген, очищают и готовят вакцину. Примером таких вакцин может служить вакцина против гепатита .

    Синтетические вакцины. Их создают путем биоорганического синтеза антигенных детерминант протективных вирусных белков. Получение таких вакцин возможно при полной расшифровке структуры (последовательности аминокислот) этих антигенных детерминант. Синтетические вакцины — это препараты, содержащие искусственно синтезированные короткие пептиды, имитирующие небольшие участки протективных антигенов вируса, способные вызвать специфический иммунный ответ организма и защитить его от конкретного заболевания. Для получения таких вакцин используют автоматические синтезаторы. Однако синтетические пептиды оказались слабыми антигенами, и для усиления иммуногенности они нуждаются в соединении с белком-носителем или синтетическим биополимером (мурамилпептид, сополимеры Д-глутамина и др.).Проблема, связанная с синтетическими пептидами, состоит в том, что многие антигенные вирусные детерминанты представляют собой не непрерывную последовательность аминокислот, а конформационные кислотные участки, собранные вместе благодаря пространственной организации белка. Для иммунного ответа конформация является очень важной. Циклизированные пептиды показали большую иммуногенность, чем их линейные аналоги.

    Возможность использования синтетических пептидов для индукции иммунитета у животных впервые была показана на примере ящура. Это стало возможным после того, как было установлено, что за индукцию вируснейтрализующих антител вируса ящура ответственен белок VP-1. Позднее был синтезирован пептид, содержащий аминокислотные последовательности VP-1 (141 — 160), который связали с гемоцианином и адъювантом Фрейнда. Вакцину испытали на морских свинках, свиньях и крупном рогатом скоте. Вакцина защитила животных от заболевания при заражении их вирулентным штаммом вируса. Однако антительный ответ был в 10—100 раз ниже, чем после иммунизации цельными вирионами. Указанная вакцина не нашла широкого практического применения.

    Получены обнадеживающие результаты применения синтетических вакцин против гриппа, гепатита В, полиомиелита и др.

    ДНК-вакцины. Основой является бактериальная плазмида, способная эффективно размножаться в клетках. В плазмиду генно-инженерными методами встраивают «смысловой» ген, кодирующий иммунногенный белок того вируса, от которого будет защищать ДНК-вакцина. На практике используют модифицированную плазмиду цитомегаловируса или обезьяньего вируса 40, или вируса саркомы Рауса. В плазмиде есть ген устойчивости к антибиотику, необходимому для ее селекции при клонировании и выращивании. Результаты исследования на лаб.животных показали, что количество плазмиды, необходимой для вакцинации при в/м введении, может колебаться в пределах 0,001-10 мкг на 1 кг живой массы.

    Днк-вакцины можно вводить внутрикожно, в/м, п/к,в/в,интраназально, орально. В настоящее время сконструировано более 20 таких вакцин против: бешенства, болезни Ауески, болезни Ньюкасла, инфеккционного ринотрахеита, вирусной диареи, СПИДа, герпесвирусных инфекциях человека и др. Перспективны ля профилактики болезней, склонных к длительному хроническому течению. Они обладают безопасностью инактивированных и эффективностью живых вакцин.

    studfiles.net

    Рекомбинантные вакцины.

    В мире интенсивно разрабатывается генно-инженерный способ получения протективных белковых антигенов бактерий и вирусов. Известно 2 способа получения рекомбинантных вакцин. В одном случае вначале происходит клонирование генов, обеспечивающих синтез необходимых антигенов, затем, введение этих генов в вектор, введение векторов в клетки – продуценты (вирусы, бактерии, грибы и пр.), культивирование клеток in vitro, отделение антигена и его очистка. В другом случае в качестве вакцины используются клетки - продуценты (дрожжи, эшерихии, псевдомонады) со встроенными в них генами протективных антигенов. В общем, принцип и технология получения вакцин на основе генно-инженерного способа сводятся к выращиванию рекомбинантного штамма, выделению и очистке протективного антигена, конструированию конечного препарата.

    Вектор или носитель - это ослабленные вирусы или бактерии, внутрь которых может быть вставлен генетический материал от другого микроорганизма, являющегося причинно-значимым для развития заболевания, к которому необходимо создание протективного иммунитета.

    В перспективе предполагается использовать векторы, в которые встроены не только гены, контролирующие синтез антигенов возбудителя, но и гены, кодирующие различные медиаторы (белки) иммунного ответа (интерфероны, интерлейкины и т.д.).

    Примером векторных (рекомбинантных, генноинженерных) вакцин могут служить генно-инженерные рекомбинантные вакцины против вирусного гепатита B, представляющие собой очищенный белок поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg), выделенный из дрожжей продуцентов, преимущественно Saccharomyces cerevisiae, адсорбированный на геле алюминия гидроксида.

    Получены рекомбинантные штаммы бактерий, продуцирующие антигены возбудителей гриппа, коклюша, кори, герпеса, бешенства, ящура и др. Получение протективных антигенов генно-инженерным способом целесообразно в том случае, когда выращивание микробов связано с большими трудностями или опасностями, или когда трудно извлекать антиген из микробной клетки.

    Рис. 8. Рекомбинантная вакцина против вирусного гепатита В «Регевак».

    Рекомбинантные вакцины безопасны, достаточно эффективны, они могут быть использованы для создания комплексных вакцин, создающих иммунитет одновременно против нескольких инфекций.

    5.1.7. Комбинированные (ассоциированные) вакцины упрощают проведение вакцинации и сокращают число манипуляций по их введению, а также необходимое число посещений ребенком прививочного кабинета. При создании комбинированных вакцин необходимо решать ряд проблем: иммуногенность компонентов при раздельном и совместном введении; взаимозаменяемость комбинированных вакцин разных производителей и с моновакцинами; использование комбинированной вакцины с «лишним» компонентом и стоимость.

    На иммуногенность комбинированных вакцин может повлиять как иммунологическая интерференция, так и химическое взаимодействие при конструировании вакцины. Большинство лицензируемых комбинированных вакцин по своей иммуногенности соответствует моновакцинам.

    Взаимозаменяемость комбинированных вакцин разных производителей и с моновакцинами определяется их составом. Для живых вирусных вакцин заменимость полная, также как для анатоксинов и цельно клеточного коклюшного компонента. В связи с тем, что разные производители используют разные наборы антигенов а целлюлярной коклюшной вакцины, рекомендуется проводить первичную вакцинацию из 3 прививок вакциной одного производителя, а ревакцинацию можно сделать вакциной любого производителя.

    Использование комбинированной вакцины с «лишним» компонентом. Здесь есть одно исключение – не следует вводить «лишнюю дозу» столбнячного анатоксина, если не прошло менее 5 лет от предыдущей дозы.

    Первая отечественная ассоциированная вакцина, содержащая несколько компонентов - АКДС вакцина, начала применяться с 1960 года и используется до сих пор. В ее состав входят цельноклеточный коклюшный компонент и дифтерийный и столбнячный анатоксины. В настоящее время комбинированные вакцины стали насущной необходимостью, создание и регистрация таких вакцин поможет расширить сферу иммунопрофилактики. В нашей стране широко используются зарегистрированные отечественные и зарубежные вакцины: «Бубо-Кок» (Дифтерия+Столбняк+Коклюшная корпускулярная+Геп.В.), Корь+Паротит+Краснуха, «Пентаксим»(Дифтерия+Столбняк+Коклюшная бесклеточная+Гемофильная инфекция+ Полиомиелитная инактивированная), Твинрикс (ГепатитА+ГепатитБ) и другие. Стоимость комбинированных вакцин обычно не превышает стоимости их компонентов, часто она равна стоимости одного компонента.

    Требования к комбинированным вакцинам по их безопасности и иммуногенности те же, что и к моновакцинам. При разработке таких вакцин учитывается совместимость не только антигенных компонентов, но и различных добавок (адъювантов, консервантов, стабилизаторов). Побочные реакции на комбинированные вакцины могут возникать несколько чаще, чем на моновакцины, однако отсутствует прямая корреляция между степенью реактогенности комбинированной вакцины и числом ее компонентов.

    Иммунизация комбинированными вакцинами не влияет на интенсивность иммунного ответа на последующее введение других вакцин при условии соблюдения определенных интервалов между прививками.

    В мире создано более 20 комбинированных вакцин, разрабатывается еще столько же.

    5.1.8. Синтетические вакцины - представляют собой искусственно созданные антигенные детерминанты микроорганизмов. В 1974 г. М. Села впервые описал искусственно полученный пептид, вызывающий образование антител к белку лизоциму. При определенных условиях синтетические пептиды могут обладать такими же свойствами, как и естественные антигены, выделенные из возбудителей инфекционных заболеваний. Синтезированы и испытаны полисахариды, аналогичные естественным антигенам, например, сальмонеллезным полисахаридам. Молекула синтетических вакцин может содержать разнородные участки (эпитопы), которые способны формировать иммунитет к разным видам инфекций. Экспериментальные синтетические вакцины получены против дифтерии, холеры, стрептококковой инфекции, гепатита В, гриппа, ящура, клещевого энцефалита, против пневмококковой и сальмонеллезной инфекций.

    У синтетических пептидов нет недостатков, характерных для живых вакцин (возврат патогенности, остаточная вирулентность, неполная инактивация и т.п.). Синтетические вакцины обладают высокой степенью стандартности, обладают слабой реактогенностью, они безопасны.

    5.1.9. Виросомальные вакцины – вакцины четвертого поколения.

    В Российской Федерации зарегистрирована расщепленная виросомальная гриппозная вакцина «Ультрикс®» и рекомендована к применению для вакцинации против гриппа.

    Технология производства: 1. Наработка вирусной биомассы в куриных эмбрионах и сбор аллантоисной жидкости. 2. Очистка полученных вирусов от примесей и концентрирование методом микрофильтрации. 3. Очистка вирусного концентрата методом хроматографии. 4. Разрушение вирионов при помощи детергента и очистка расщепленной биомассы методом хроматографии. 5. Формирование виросомальных частиц и приготовление готовой лекарственной формы тривалентной вакцины.

    Вакцина содержит инактивированный виросомальный комплекс с презентацией поверхностных и внутренних антигенов вируса гриппа. Виросомальные вакцины отличаются низкой реактогенностью и высокой иммуногенностью, длительным напряженным иммунитетом и могут применяться, без ограничений, для иммунизации детей и пожилых.

    pdnr.ru

    Рекомбинантные субъединичные вакцины - Med24info.com

    Прогресс в области получения большого количества протективных вирусных антигенов достигнут благодаря использованию технологии рекомбинантной ДНК. Рекомбинантные субъединичные вакцины готовят из очищенных вирусных белков, экспрессируемых клонированными вирусными генами. Гены, кодирующие протективные антигены, вводят в подходящую плазмиду, которую клонируют в экспрессирующую клеточную систему. Используемыми эукариотическими системами экспрессии являются дрожжи, клетки насекомых и клетки различных млекопитающих. Преимуществом дрожжей является возможность крупномасштабного выращивания. Первой вакциной, приготовленной экспрессией клонированного гена в дрожжах, была вакцина против гепатита В человека. Если иммуногенный вирусный белок должен быть в гликозилированной форме, необходимо использовать эукариотическую экспрессирующую систему. Экспрессированный таким образом белок является гликозилированным и имеет соответствующую конформацию. Продукция вирусных белков в прокариотической системе была менее успешной [958]. Преимущество клеток насекомых заключается в простой технологии, связанной с культурами клеток мотылька (или гусеницы), способными дать большое количество вирусного белка в результате инфицирования бакуловирусами, несущими ген (гены) протективного белка (белков) интересующего вируса. Промотор гена, кодирующего белок бакуловирусного полиэдроза, является настолько сильным, что продукт интересующего вирусного гена, введенный внутрь гена бакуловирусного полиэдрина, может составлять половину всего протеина инфицированных клеток моли или гусеницы.

    Преимущество клеток млекопитающих по сравнению с клетками низших эукариотов заключается в том, что в них более точно (правильно) осуществляется посттрансляционный процессинг, включая гликозилирование и секрецию вирусных белков. При выборе клеточной системы для экспрессии рекомбинантных вирусных антигенов важную роль играют такие критерии, как эффективность, безопасность и технологичность. Прежде всего необходимо определить идентичность экспрессируемого протективного антигена и экономическую целесообразность его производства. В случае использования перевиваемых линий клеток, необходимо, чтобы экспрессируемый вирусный белок легко отделялся от клеточной ДНК из-за ее возможной онкогенной опасности. Секреция вирусных гликопротеинов в среду облегчает их очистку, которая не должна сопровождаться нарушением конформации нейтрализующих эпитопов. Необходимо также определить целесообразность добавления адъюванта с целью усиления иммуногенности очищенного белка. В прокариотической системе E.coli были экспрессированы капсидный белок VP1 вируса ящура, поверхностный антиген вируса гепатита В, гемагглютинин вируса гриппа А, поверхностный гликопротеин G вируса бешенства, гликопротеин D вируса простого герпеса и белки, кодируемые различными сегментами генома ротавируса [1131]. Количество рекомбинантного белка VP1 вируса ящура, синтезированного в E.coli, достигало 17% от общей массы белка. Такой белок в сочетании с адъювантом вызывал иммунитет у животных [222, 1131, 1219]. Гликопротеин D вируса простого герпеса, экспрессированный в E.coli в негли- козилированном виде, вызывал образование нейтрализующих антител у кроликов. Это указывало на то, что гликозилирование поверхностных вирусных гликопротеинов данного вируса не является необходимым условием для выработки нейтрализующих антител. Однако негликозилированный белок гемагглютинина вируса гриппа А, синтезированный в той же системе, не вызывал у кроликов и мышей антител, нейтрализующих вирус, или задержку гемагглютинации. Гликопротеин вируса бешенства, полученный подобным способом, не был гликолизированным и, несмотря наполноразмерность, не индуцировал иммунитету мышей [1131]. Рекомбинантный гликопротеин Е и неструктурный белок NS-1 вируса японского энцефалита, синтезированные в E.coli и усиленные адъювантом, вызывали образование ВН-антител и устойчивость к заражению у мышей после четырехкратного введения [1443]. Рекомбинантный белок, представленный С-концевой частью гликопротеина Е и N-концевой частью NS-1 вируса денге, экспрессированный в E.coli, защищал мышей от летальной инфекции гомологичным вирусом [1442]. Скармливание мышам рекомбинантных сальмонелл, экспрессирующих антигены вируса гепатита В, сопровождалось образованием специфических антител в высоком титре [1382]. Возможно, это был первый шаг на пути создания энтеральной вакцины против гепатита В и других вирусных болезней. Несмотря на отдельные положительные результаты при использовании прокариотической системы экспрессии, возник ряд проблем, основными из которых явились низкий выход и агрегация рекомбинантного белка [1167].

    Накоплены данные, свидетельствующие о преимуществах использования эукариотических систем экспресии, в частности дрожжей. Производство вирусных антигенов в дрожжах представляет пример эффективного использования гетерологичной системы для разработки технологии изготовления противовирусных вакцин. Дрожжи не только обладают способностью к росту с высокой плотностью популяции в суспензионной культуре в фер- ментарах, но и обеспечивают специфические модификации транслируемых рекомбинантных белков, чего не происходит в прокариотической системе. В итоге при использовании дрожжей оказалось возможным получить рекомбинантный вирусный белок с высокой специфической иммунологической активностью. Наглядным примером изготовления «дрожжевой» вакцины служит вакцина против гепатита В. Цель была достигнута трансформацией дрожжей рекомбинантной экспрессионной плазмидой, содержащей ген поверхностного антигена вируса гепатита В. Современная технология рекомбинантной ДНК пришла на смену устаревшей рутинной технологии изготовления вакцины против одного из наиболее опасных и широко распространенных заболеваний людей. Ранние вакцины против гепатита В были необычными и представляли собой очищенный поверхностный антиген вируса (HBsAg), полученный из плазмы крови человека, хронического носителя вируса. Это была уникальная в своем роде вакцина. Рекомбинантные дрожжевые клетки продуцируют поверхностный антиген вируса гепатита В, агрегированный в многомерные сферические частицы диаметром 22 нм, идентичные натуральному поверхностному HBsAg антигену, обнаруживаемому в плазме крови хронически инфицированных людей. HBsAg синтезировался в дрожжах в количестве, достаточном для промышленного изготовления вакцины. Антиген, выделенный из разрушенных дрожжей, очищают скоростным центрифугированием в сочетании с иммунной хроматографией. Сравнительный анализ физико-химических, морфологических и иммуно- генных свойств HBsAg, полученного генно-инженерным способом и выделенного из плазмы крови носителей вируса, продемонстрировал близость их характеристик. Однако поверхностный антиген вируса гепатита В, продуцируемый дрожжами, оказался негликозилированным. С целью усиления иммуногенности в рекомбинантные вакцины были включены, помимо HBsAg, белки, кодируемые зонами npe-S ДНК вируса гепатита В. Рекомбинантные культуры дрожжей, в отличие от плазмы носителей антигена вируса, практически представляют неограниченный источник вирусного антигена для изготовления вакцинного препарата. Протективная активность рекомбинантной вакцины не отличается от активности вакцины, полученной из плазмы крови доноров [1196]. В дрожжах экспрессирован G-белок вируса бешенства в нативном виде [1130]. Основной протективный белок VP2 вируса бурсальной болезни кур образовывался в высокоиммуногенной форме в рекомбинантных дрожжах. Рекомбинантный белок VP2 после однократного внутримышечного введения (-50 мкг) в составе эмульгированной вакцины вызывал у кур вируснейтрализующие антитела в таком же титре, как после введения живого вируса. Трансовариальная передача антител обеспечивала выраженный иммунитет у потомства и вселяла надежду на практическое применение такой вакцины [655]. Аналогичные результаты получены с рекомбинантной субъединичной вакциной, содержащей белок VP2, экспрессированный в бакуловирусной системе [1244, 1701]. Создание эффективной вакцины против гепатита С связано с многими проблемами, и в первую очередь, с отсутствием возможности размножения вируса в культуре клеток, а так же генетическим разнообразием и высоким уровнем мута- бильности вируса. Вакцины, основанные на гликопротеинах Е1 и Е2, вызывали кратковременное образование антител у обезьян к этим антигенам и требовали частой бустеризации. Привитые животные были защищены против внутривенного заражения малыми дозами вирулентного вируса гомологичной антигенности, но не против заражения большой дозой вируса или заражения гетерологич- ным штаммом вируса. Возможно, что для усиления протективного эффекта требуется индукция специфических цитотоксических лимфоцитов к консервативным эпитопам неструктурных белков [989]. Возрастающий интерес к изготовлению компонентных вакцин на основе технологии рекомбинантной ДНК привлек внимание к использованию клеток животных в качестве систем, экспрессирующих рекомбинантные вирусные белки. В качестве таких систем часто использовали трансформированные линии клеток, в том числе яичника китайского хомяка (линия СНО), а также клетки обезьян, трансформированные вирусом SV-40 (линия COS). Такую систему использовали для наработки антигенов, вируса гепатита В и др. Продуцируемые в рекомбинантных клетках СНО вирусоподобные частицы, содержащие поверхностный антиген вируса гепатита В, имели диаметр 22 нм, плотность в хлориде цезия 1,21 г/см3 и не отличались от частиц, обнаруживаемых в плазме крови инфицированных носителей. Культуральные свойства клеток СНО позволяли рассчитывать на их промышленное использование в качестве продуцентов иммуно- генного материала [934]. Клетки гепатобластомы человека (линия HepG2), трансфицированные полноразмерной ДНК вируса гепатита В, в большом количестве секретировали антигены Е, С и S [1320]. Мембранный гликопротеин (340/220) вируса Эпштейн- Барр длительное время экспрессировался в фибрабластоподобных клетках мышей, трансформированных вирусом папилломы крупного рогатого скота [528]. Белок Е1 вируса краснухи был экспрессирован в клетках COS после трансфекции клеток кДНК в составе вектора обезьяньего вируса SV-40. Этот белок антигенно подобен белку, экспрессируемому в клетках, зараженных вирусом краснухи [1146]. Генно-инженерным методом получена клеточная линия, продуцирующая пустые капсиды парвовируса В-19 человека. Продукция полых капсидов была равной или превышала формирование вирионов в инфицированных клетках костного мозга (1000—2000 капсидов на клетку). Трансфекция не влияла на скорость роста клеток-продуцентов [867]. Капсиды парвовируса В-19, экспрессированные в бакуловирусной системе, по антигенным и иммуногенным свойствам были подобны нативным вирионам [868]. Испытание рекомбинантной вакцины на серонегативных добровольцах дало положительные результаты [527]. Получен рекомбинантный вирус бешенства, стабильно экспрессирующий гликопротеин оболочки др 160 вируса иммунодефицита человека 1. Этот вирус вызывал у мышей образование ВН-антител в высоком титре (1:800) и мог служить прообразом рекомбинантной вакцины против ВИЧ-1 [1386]. Живые вакцины против краснухи весьма эффективны, однако их реактоген- ность, особенно для беременных женщин, побудила к созданию новых средств специфической профилактики краснухи. Новая стратегия основывалась на создании компонентных вакцин на основе рекомбинантной ДНК-технологии. Получена субъединичная вакцина, которая включает белок Е1, содержащий главные нейтрализующие эпитопы [921]. Клетки куриного эмбриона, трансфицированные геном HN вируса Ньюкаслской болезни в составе вектора из вируса саркомы Рауса, стабильно экспрессировали белок HN на клеточной поверхности; адсорбировали эритроциты кур и проявляли нейраминидазную активность. Трансфицированные HN-клетки проявляли резистентность к суперинфекции вирусами ньюкаслской болезни и гриппа, связывающимися с рецепторами, содержащими сиаловую кислоту, но были чувствительны к заражению вирусом везикулярного стоматита [1100]. Протективный поверхностный гликопротеин D вируса простого герпеса, экспрессируемый и секретируемый клетками СНО, вызывал синтез нейтрализующих антител и защиту мышей от заражения летальной дозой вируса [1131]. Обработка морских свинок гликопротеином вместе с адъювантом предупреждала развитие латентной инфекции ганглиев и оказывала терапевтический эффект, снижая количество и тяжесть вирусиндуцированных повреждений. Субъединичные вакцины, содержащие HN и F гликопротеины вируса ПГ-3, получены из очищенного вируса или в культуре клеток насекомых, инфицированных рекомбинантным бакуловирусом, экспрессирующим HN и F белки, или химерным вирусом. Рекомбинантная субъединичная вакцина против лейкоза кошек в качестве антигена содержала негликозилированный гликопротеин оболочки вируса лейкемии кошек подгруппы А. Такой рекомбинантный белок включал белок оболочки (гликопротеин 70 кД) и первые 34 аминокислоты трансмембранного белка Р15Е. Вакцина представляла собой очищенный белок, адсорбированный на гидроокиси алюминия, и содержала сапонин. У вакцинированных кошек образовывались вируснейтрализующие антитела и развивалась анамнестическая реакция на введение вируса лейкемии кошек. Иммунизированные животные были защищены от вирусной инфекции [1007]. Постоянные линии клеток имеют важные преимущества в качестве субстратов для производства рекомбинантных субъединичных вакцин. Поскольку такиеклетки являются естественным хозяином вирусов млекопитающих и птиц, синтезируемые в них рекомбинантные вирусные белки во всех отношениях подобны природным вирусным антигенам. Выделение и очистка таких антигенов отличаются быстротой и экономичностью. Наработка протективных вирусных антигенов в эукариотических системах, по-видимому, является наиболее приемлемым процессом, так как вирусные антигены экспрессируются на клеточной поверхности в сочетании с антигенами гистосовместимости хозяина, обеспечивая, тем самым, наряду с гуморальным иммунным ответом, и эффективный клеточный ответ [1131]. Основной недостаток таких клеточных систем — потенциально существующая опасность их возможной онкогенности. По мнению авторитетных специалистов, клиническая оценка безопасности антигенов, полученных при использовании клеточных линий и рекомбинантных векторов, содержащих фрагменты трансформирующих вирусов, является условной [1131, 1167]. Однако существующие методы очистки антигенов от клеточной и вирусной ДНК, а также других продуктов метаболизма, дают возможность получить препараты, отвечающие существующим требованиям, и практически снимают ограничения с использования постоянных линий клеток. Для экспрессии чужеродных вирусных белков широко используют перевиваемые линии клеток насекомых под контролем бакуловируса в качестве вектора. Таким путем были экспрессированы НА вируса гриппа, протективный антиген вируса гепатита Е, а так же белки других вирусов. Клетки млекопитающих широко используют для получения протективных вирусных белков, которые пригодны для приготовления субъединичных вакцин. Этот способ может быть использован для приготовления вакцин, когда вирус не размножается в культуре клеток (вирус гепатита В, парвовирус В19, вирус Норволк), или в случае, когда изготовление цельновирионной инактивированной вакцины представляет биологическую опасность (некоторые лентивирусы, филовирусы, хантавирусы и аренавирусы человека). Для крупных вирусов, таких как вирусы герпеса, которые кодируют около 10 протективных антигенов, может оказаться необходимым использовать для вакцины смесь нескольких экспрессированных белков [326]. 

    www.med24info.com

    Вакцины рекомбинантные - это... Что такое Вакцины рекомбинантные?

     Вакцины рекомбинантные

    "...Рекомбинантные вакцины - получают при клонировании генов, обеспечивающих синтез необходимых антигенов, введении этих генов в вектор, введении векторов в клетки-продуценты (вирусы, бактерии, грибы и пр.)..."

    Источник:

    "ПОРЯДОК УНИЧТОЖЕНИЯ НЕПРИГОДНЫХ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ВАКЦИН И АНАТОКСИНОВ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 3.3.2.1761-03"

    (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 05.10.2003)

    Официальная терминология. Академик.ру. 2012.

    • Вакцины инактивированные
    • Вакцины химические

    Смотреть что такое "Вакцины рекомбинантные" в других словарях:

    • рекомбинантные вакцины — Производятся при помощи рекомбинантной (генно инженерные) технологии. [Англо русский глоссарий основных терминов по вакцинологии и иммунизации. Всемирная организация здравоохранения, 2009 г.] Тематики вакцинология, иммунизация EN recombinant… …   Справочник технического переводчика

    • Вакцина — У этого термина существуют и другие значения, см. Вакцина (значения). Вакцина (от лат. vacca  корова)  медицинский или ветеринарный препарат, предназначенный для создания иммунитета к инфекционным болезням. Вакцина изготавливается… …   Википедия

    • Вакци́ны — (лат. vaccinus коровий) препараты, получаемые из микроорганизмов или продуктов их жизнедеятельности; применяются для активной иммунизации людей и животных с профилактической и лечебной целями. Вакцины состоят из действующего начала специфического …   Медицинская энциклопедия

    • Биологические препараты — Биологические препараты  группа медицинских продуктов биологического происхождения, в том числе вакцины, препараты крови, аллергены, соматические клетки, ткани, рекомбинантные белки. В состав биологических препаратов могут входить сахара,… …   Википедия

    • Словарь генетических терминов — # А Б В Г Д Е Ё Ж З И Й К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Ч Ш Щ Ы …   Википедия

    • Список генетических терминов — Эта страница глоссарий. См. также: Список генетических пороков развития и заболеваний Термины генетики в алфавитном поряд …   Википедия

    • вирус — Термин вирус Термин на английском virus Синонимы Аббревиатуры Связанные термины бактериофаг, капсид Определение (лат. virus – яд) – автономные генетические структуры, не имеющие собственного метаболизма и способные размножаться только в… …   Энциклопедический словарь нанотехнологий

    • Интерферон — Интерфероны  общее название, под которым в настоящее время объединяют ряд белков со сходными свойствами, выделяемых клетками организма в ответ на вторжение вируса. Благодаря интерферонам клетки становятся невосприимчивыми по отношению к… …   Википедия

    • Чума мелких жвачных — Чума мелких жвачных  высококонтагиозная вирусная болезнь овец и коз, протекающая преимущественно остро или подостро, характеризующаяся лихорадкой, язвенными поражениями слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, конъюнктивитами,… …   Википедия

    • Биотехнологии —   совокупность технологий, использующих характерные для живой природы способы преобразования вещества и получения разнообразных полезных эффектов. Среди этих технологий можно выделить биоинженерию (генную инженерию), биологический синтез… …   Толковый словарь «Инновационная деятельность». Термины инновационного менеджмента и смежных областей

    official.academic.ru

    Химические вакцины

    Содержат компоненты клеточной стенки или других частей возбудителя, как например в ацеллюлярной  вакцине  против коклюша, коньюгированной  вакцине  против гемофильной инфекции или в  вакцине  против менингококковой инфекции.

    Химические вакцины- создаются из антигенных компонентов, извлеченных из микробной клетки. Выделяют те антигены, которые определяют иммуногенные характеристики  микроорганизма. К таким  вакцинам  относятся: полисахаридные  вакцины (Менинго А+С, Акт-ХИБ, Пневмо 23, Тифим Ви), ацеллюлярные коклюшные  вакцины.

    Биосинтетические вакцины

    В 80-е годы зародилось новое направление, которое сегодня успешно развивается, - это разработка биосинтетических  вакцин  -  вакцин  будущего. Биосинтетические  вакцины  - это  вакцины, полученные методами генной инженерии и представляют собой искусственно созданные антигенные детерминанты  микроорганизмов. Примером может служить рекомбинантная  вакцина  против вирусного гепатита B,  вакцина  против ротавирусной инфекции. Для их  получения  используют дрожжевые клетки в культуре, в которые встраивают вырезанный ген, кодирующий выработку необходимого для  получения   вакцины  протеин, который затем выделяется в чистом виде. На современном этапе развития иммунологии как фундаментальной медико-биологической науки стала очевидной необходимость создания принципиально новых подходов к конструированию  вакцин  на основе знаний об антигенной структуре патогена и об иммунном ответе организма на патоген и его компоненты.

    Биосинтетические  вакцины  представляют собой синтезированные из аминокислот пептидные фрагменты, которые соответствуют аминокислотной последовательности тем структурам вирусного (бактериального) белка, которые распознаются иммунной системой и вызывают иммунный ответ. Важным преимуществом синтетических  вакцин  по сравнению с традиционными является то, что они не содержат бактерий и вирусов, продуктов их жизнедеятельности и вызывают иммунный ответ узкой специфичности. Кроме того, исключаются трудности выращивания вирусов, хранения и возможности репликации в организме вакцинируемого в случае использования живых  вакцин. При создании данного типа  вакцин  можно присоединять к носителю несколько разных пептидов, выбирать наиболее иммуногенные из них для коплексирования с носителем. Вместе с тем, синтетические  вакцины менее эффективны, по сравнению с традиционными, т.к. многие участки вирусов проявляют вариабельность в плане иммуногенности и дают меньшую иммуногенность, нежели нативный вирус. Однако, использование одного или двух иммуногенных белков вместо целого возбудителя обеспечивает формирование иммунитета при значительном снижении реактогенности  вакцины  и ее побочного действия.

    Векторные (рекомбинантные) вакцины

    Вакцины, полученные методами генной инженерии. Суть метода: гены вирулентного  микроорганизма, отвечающий за синтез протективных антигенов, встраивают в геном какого - либо безвредного  микроорганизма, который при культивировании продуцирует и накапливает соответствующий антиген. Примером может служить рекомбинантная  вакцина  против вирусного гепатита B,  вакцина  против ротавирусной инфекции. Наконец, имеются положительные результаты использования т.н. векторных  вакцин, когда на носитель - живой рекомбинантный вирус осповакцины (вектор) наносятся поверхностные белки двух вирусов: гликопротеин D вируса простого герпеса и гемагглютинин вируса гриппа А. Происходит неограниченная репликация вектора и развивается адекватный иммунный ответ против вирусной инфекции обоих типов. Действие отдельных компонентов микробных, вирусных и паразитарных антигенов проявляется на разных уровнях и в разных звеньях иммунной системы. Их результирующая может быть лишь одна: клинические признаки заболевания - выздоровление - ремиссия - рецидив - обострение или другие состояния организма. Так, в частности, АДС - через 3 недели после ее введения детям приводит к возрастанию уровня Т-клеток и увеличению содержания ЕКК в периферической крови, поливалентная бактериальная  вакцинаLantigen B стимулирует антителообразование Ig A в крови и слюне, но самое главное, что при дальнейшем наблюдении у вакцинированных отмечено уменьшение числа случаев заболевания, а если они и возникали, то протекали легче. Клиническая артина болезни, т.о. является наиболее объективным показателем вакцинации. Рекомбинантные  вакцины  - для производства этих  вакцин  применяют рекомбинантную технологию, встраивая генетический материал  микроорганизма   в дрожжевые клетки, продуцирующие антиген. После культивирования дрожжей из них выделяют нужный антиген, очищают и готовят вакцину. Примером таких  вакцин  может служить  вакцина против гепатита В (Эувакс В).

    studfiles.net

    1.10 Химические вакцины

    Содержат компоненты клеточной стенки или других частей возбудителя, как например в ацеллюлярной  вакцине  против коклюша, коньюгированной  вакцине  против гемофильной инфекции или в  вакцине  против менингококковой инфекции.

    Химические вакцины- создаются из антигенных компонентов, извлеченных из микробной клетки. Выделяют те антигены, которые определяют иммуногенные характеристики  микроорганизма. К таким  вакцинам  относятся: полисахаридные  вакцины (Менинго А+С, Акт-ХИБ, Пневмо 23, Тифим Ви), ацеллюлярные коклюшные  вакцины.

    1.11Биосинтетические вакцины

    В 80-е годы зародилось новое направление, которое сегодня успешно развивается, - это разработка биосинтетических  вакцин  -  вакцин  будущего. Биосинтетические  вакцины  - это  вакцины, полученные методами генной инженерии и представляют собой искусственно созданные антигенные детерминанты  микроорганизмов. Примером может служить рекомбинантная  вакцина  против вирусного гепатита B,  вакцина  против ротавирусной инфекции. Для их  получения  используют дрожжевые клетки в культуре, в которые встраивают вырезанный ген, кодирующий выработку необходимого для  получения   вакцины  протеин, который затем выделяется в чистом виде. На современном этапе развития иммунологии как фундаментальной медико-биологической науки стала очевидной необходимость создания принципиально новых подходов к конструированию  вакцин  на основе знаний об антигенной структуре патогена и об иммунном ответе организма на патоген и его компоненты.

    Биосинтетические  вакцины  представляют собой синтезированные из аминокислот пептидные фрагменты, которые соответствуют аминокислотной последовательности тем структурам вирусного (бактериального) белка, которые распознаются иммунной системой и вызывают иммунный ответ. Важным преимуществом синтетических  вакцин  по сравнению с традиционными является то, что они не содержат бактерий и вирусов, продуктов их жизнедеятельности и вызывают иммунный ответ узкой специфичности. Кроме того, исключаются трудности выращивания вирусов, хранения и возможности репликации в организме вакцинируемого в случае использования живых  вакцин. При создании данного типа  вакцин  можно присоединять к носителю несколько разных пептидов, выбирать наиболее иммуногенные из них для коплексирования с носителем. Вместе с тем, синтетические  вакцины менее эффективны, по сравнению с традиционными, т.к. многие участки вирусов проявляют вариабельность в плане иммуногенности и дают меньшую иммуногенность, нежели нативный вирус. Однако, использование одного или двух иммуногенных белков вместо целого возбудителя обеспечивает формирование иммунитета при значительном снижении реактогенности  вакцины  и ее побочного действия.

    1.12 Векторные (рекомбинантные) вакцины

    Вакцины, полученные методами генной инженерии. Суть метода: гены вирулентного  микроорганизма, отвечающий за синтез протективных антигенов, встраивают в геном какого - либо безвредного  микроорганизма, который при культивировании продуцирует и накапливает соответствующий антиген. Примером может служить рекомбинантная  вакцина  против вирусного гепатита B,  вакцина  против ротавирусной инфекции. Наконец, имеются положительные результаты использования т.н. векторных  вакцин, когда на носитель - живой рекомбинантный вирус осповакцины (вектор) наносятся поверхностные белки двух вирусов: гликопротеин D вируса простого герпеса и гемагглютинин вируса гриппа А. Происходит неограниченная репликация вектора и развивается адекватный иммунный ответ против вирусной инфекции обоих типов. Действие отдельных компонентов микробных, вирусных и паразитарных антигенов проявляется на разных уровнях и в разных звеньях иммунной системы. Их результирующая может быть лишь одна: клинические признаки заболевания - выздоровление - ремиссия - рецидив - обострение или другие состояния организма. Так, в частности, АДС - через 3 недели после ее введения детям приводит к возрастанию уровня Т-клеток и увеличению содержания ЕКК в периферической крови, поливалентная бактериальная  вакцинаLantigen B стимулирует антителообразование Ig A в крови и слюне, но самое главное, что при дальнейшем наблюдении у вакцинированных отмечено уменьшение числа случаев заболевания, а если они и возникали, то протекали легче. Клиническая артина болезни, т.о. является наиболее объективным показателем вакцинации. Рекомбинантные  вакцины  - для производства этих  вакцин  применяют рекомбинантную технологию, встраивая генетический материал  микроорганизма   в дрожжевые клетки, продуцирующие антиген. После культивирования дрожжей из них выделяют нужный антиген, очищают и готовят вакцину. Примером таких  вакцин  может служить  вакцина против гепатита В (Эувакс В).

    studfiles.net

    Рекомбинантные живые векторные вакцины - Med24info.com

    В генетическом разнообразии вирусов в природе, особенно корона-, флави- и тогавирусов, важную роль играет рекомбинация. Она может происходить не только между близкородственными, но и отдаленно родственными вирусами [1727]. Важным достижением технологии рекомбинантной ДНК явилось открытие возможности замены удаленного гена чужеродным геном. Этот метод использует вирусы как векторы для переноса генов протективных антигенов других вирусов. В геном авирулентного вируса вставляют ген интересующего вируса, кодирующий антиген, вызывающий протективный ответ в привитом организме. Модифицированный таким образом авирулентный вирус используют как живую вирусную вакцину. Клетки, в которых векторный вирус реплицируется in vivo, экспрессируют чужеродный белок, вызывающий гуморальный и опосредованный клетками иммунный ответ на данный белок [ 1130]. Вирусные химеры, как вакцины с репликативным механизмом одного вируса и протективными антигенами другого, являются быстрой формой векторных вакцин. Прообразом таких вакцин можно считать реассортантные вакцины. Вирус осповакцины был одним из первых вирусов, на примере которого была показана возможность такой замены без потери жизнеспособности рекомбинантного вируса с экспрессией белка, кодируемого чужеродным геном и индукцией иммунитета на этот белок. Подход к получению безопасной эффективной живой вакцины заключается в использовании стабильного вакцинного вирусного штамма для создания рекомбинантов, которые экспрессируют протективные антигены других вирусов, против которых желательно создать иммунитет. Члены семейства вирусов оспы оказались удобными для получения рекомбинантных гибридов, благодаря их большому геному, позволяющему удалять значительные участки ДНК без потери способности к репликации. Гены, кодирующие различные антигены многих вирусов, были включены в геном вируса осповакцины. Прививка животных этими рекомбинантными векторными вакцинами каждый раз сопровождалась хорошим антительным ответом. Например, вирус осповакцины, использованный в качестве вектора вакцины против бешенства, будучи включенным в приманку для скармливания, защищал лис и хорьков от бешенства. Возможность включения нескольких генов, кодирующих соответствующие иммуногены, позволяет создать новый тип комбинированных (поливалентных) вакцин. Потенциальными векторами являются многие ДНК-содержащие вирусы, реплицирующиеся в ядре или цитоплазме. Первые во многих случаях могут быть интегрированы в клеточную ДНК, что может привести к персистенции вируса и клеточной трансформации. Этот факт — хороший аргумент в пользу выбора «цитоплазматических» вирусов, таких как вирусы оспы, которые являются наиболее крупными вирусами животных. Участок генома вирусов оспы, кодирующий тимидинкиназу, не является геномом, функция которого жизненно необходима для размножения вируса, и его можно заменять на чужеродные ДНК. Чужеродные белки, экспрессирующиеся рекомбинантным вирусом оспы, сохраняют свои антигенные свойства [41] и способность формировать вирион- ную структуру. Использование этого вируса в качестве вектора для вакцинации имеет ряд преимуществ: способность размножаться в клетках многих видов животных, экспрессировать несколько генов, индуцировать гуморальный и опосредованный клетками иммунитет, термостабильность, экономичность производства и легкость применения [1106]. В качестве векторов для создания живых рекомбинантных вакцин могут быть использованы адено-, бакуло- и герпесвирусы. Они, как и вирусы оспы, имеют крупный геном, — по крайней мере с одной несущественной областью для репликации и несколькими участками, в которые могут быть встроены чужеродные гены и экспрессированы без потери инфекционное™. В качестве векторов успешно используют вирусы оспы птиц. Рекомбинантные живые вакцины по существу сочетают в себе свойства живых и компонентных вакцин. Проблема использования вектора живых вакцин в основном аналогична. Основное различие с живыми вакцинами заключается в том, что экспрессируется только один или несколько селективных генов, реплицируемых вместе с геномом вектора. В этом смысле, данные вакцины похожи на традиционные субъединичные (компонентные), но отличаются от них лишь тем, что являются «реплицирующимися антигенами». Рекомбинантные векторные вакцины как бы сочетают в себе положительные качества живых и инактивированных вакцин. При репликации в организме рекомбинантного вируса с встроенным чужеродным геном, кодирующим синтез гликопротеина, который может быть экспрессирован на поверхности клеток и может индуцировать развитие как гуморального, так и клеточного иммунного ответа. Субъединичные вакцины могут индуцировать развитие только гуморального иммунного ответа [11671. Использование вируса осповакцины или других аттенуированных векторов для создания реплицирующихся субъединичных (компонентных) вакцин - новое перспективное направление молекулярной биологии и генной инженерии. В последнее время этот метод получил широкое применение в разработке нового поколения вакцин против различных вирусных заболеваний. Естественно, что становление принципиально нового направления создания вакцин сопряжено со многими трудностями. Однако на главный и принципиальный вопрос — способны ли рекомбинантные вакцины вызывать выраженный и длительный иммунитет — получен положительный ответ. Накопилось много данных о получении рекомбинантных вакцин, особенно на основе вируса осповакцины, содержащих гены различных вирусов, об их антигенной и иммуногенной активности при испытании в лабораторных и практических условиях. Рекомбинанты респираторно-синцитиального (PC) вируса получены встраиванием ДНК-копий РНК, кодирующих G- или F-белки, в тимидинкиназный ген вируса осповакцины. Такие рекомбинанты, размножаясь в клетках животных, экспрессировали на их поверхности гликопротеины, аутентичные гликопротеинам РС-вируса. У хлопковых крыс, привитых внутримышечно рекомбинантами, обнаружен высокий уровень специфических вируснейтрализующих антител. Рекомбинантная вакцина PCB-F, экспрессирующая F белок, обладала более выраженным протективным эффектом [146]. Испытания, проведенные на пяти видах низших приматов, показали безопасность и иммуногенность таких рекомбинантных вакцин [471]. Рекомбинанты, экспрессирующие другие семь вирусспецифических белков, оказались не- иммуногенными или слабоиммуногенными. Иммунизация крыс и обезьян рекомбинантным вирусом осповакцины, экспрессирующим белки HN и F вируса парагриппа-3, сопровождалась образованием высокого уровня вируснейтрализующих антител и устойчивостью к заражению вирусом парагриппа-3. Рекомбинантный вирус ПГ-3 крупного рогатого скота и ПГ-3 человека (В/Н PIV3) с встроенными и экспрессирующимися генами белков G и F респираторно-синциального вируса хорошо размножался в респираторном тракте хомяков, с образованием антител, и создал защиту при экспериментальном заражении хомяков всеми тремя вирусами [1413]. Рекомбинантная осповакцина, экспрессирующая F- и НА-гены вируса чумы КРС, оказалась иммуногенной для естественно восприимчивых животных [1703]. Опыты на кроликах показали, что для защиты было достаточно экспрессии только F-белка. Положительные результаты иммунизации получены при испытании аналогичной вакцины на зебу [1610]. Рекомбинантный вирус оспы кур содержал ген, кодирующий белок слияния вируса кори. Иммунизация этим вирусом защищала мышей от летальной инфекции при интрацеребральном заражении вирусом кори, хотя устойчивость к заражению не сопровождалась выраженной сероконверсией [1656]. На основе вируса оспы кур получены рекомбинантные вирусы, экспрессирующие ген HN вируса ньюкаслской болезни. Такие рекомбинанты обладали выраженными превентивными свойствами, вызывая иммунитет практически у всей птицы, иммунизированной внутримышечно. Вакцинация смесью рекомбинантных вирусов, экспрессирующих гемагглютинин-нейраминидазу и гликопротеин F, не усиливала защитного эффекта [623]. Аналогичными качествами обладал рекомбинантный вирус оспы голубей, эскпрессирующий белок слияния F вируса ньюкаслской болезни. Этот белок оказался гликозилированным и расщепленным (F1 и F2). Вакцинация кур рекомбинантным вирусом создавала выраженный иммунитет и образование антител к F-белку. Установлена корреляция между протективной активностью и уровнем таких антител. Однако вакцинация не приводила к образованию вируснейтрализующих антител [943]. При использовании обычных вакцин невозможно отличать вакцинированную птицу от птицы инфицированной. Применение рекомбинантной вакцины позволяет это сделать путем выявления антител ко всем протеинам вируса (инфицирование) или к отдельным протеинам (вакцинация) [650]. Рекомбинантный вирус оспы птиц, экспрессирующий капсидный белок Р-2 вируса инфекционной болезни бурсы, защищал кур от летальной инфекции, но не от поражения бурсы Фабрициуса [310]. Рекомбинантные вакцины были созданы путем вставки Н и/или F генов вируса чумы КРС (ЧКРС) в вирус осповакцины в качестве вектора [1590, 1696]. Рекомбинантный вирус с аналогичными свойствами (CPV) получен при использовании вируса оспы канареек в качестве вектора.

    Сконструирован химерный вирус, содержащий гены вакцинного штамма SA-14-14-2 вируса японского энцефалита и гены инфекционного клона 17D вируса желтой лихорадки. Химерный вирус размножался с высоким титром в культуре клеток, был авирулентным при интрацеребральном введении мышам и обладал выраженной иммуногенностью. Авирулентный фенотип химерного вируса сохранялся после 6 пассажей в головном мозге мышей [745а]. Рекомбинантный вирус оспы птиц, экспрессирующий ген гликопротеина В вируса болезни Марека оказался безопасным и защищал цыплят от заболевания [1230]. На основе вируса оспы птиц получена рекомбинантная вакцина против геморрагического энтерита индеек (аденовирус птиц тип 2), экспрессирущая белок гексонов [449]. Рекомбинантная вакцина по антигенности и иммуногеннос- ти не уступала коммерческой традиционной вакцине, но в отличие от нее не вызывала иммуносупрессии [745а]. Рекомбинанты вируса осповакцины, экспрессирующие гликопротеины В, D, Е, G, I вируса простого герпеса испытывали на мышах для сравнения имму- ногенности индивидуальных гликопротеинов. Гликопротеины D и В индуцировали выраженный синтез антител и повышали уровень элиминации вируса, а также защищали от развития латентного носительства ВПГ-1 в чувствительных ганглиях. Гликопротеин Е был слабым индуктором нейтрализующих АТ, а глико- протены G, Н и I вовсе не вызывали образования нейтрализующих АТ и не предотвращали латентное инфицирование ганглиев [353]. Варианты рекомбинантной вакцины против японского энцефалита созданы на основе вируса осповакцины. Они обеспечивали синтез гликозилированного неструктурного белка NS-1 и гликозилированного белка Е оболочки вириона. Рекомбинанты, экспрессирующие тот и другой вирусные белки, обладали высокой иммуногенностью. Две инъекции вакцины защищали мышей от 104ЛД50 вируса японского энцефалита. Высокий уровень защиты коррелировал с высоким уровнем АТ, обладающих нейтрализующей активностью и активностью в РТГА [1019]. Рекомбинанты вируса осповакцины, содержащие в геноме различные сочетания генов С, М, Е, NS-1 вируса клещевого энцефалита, размножали в культуре клеток CV-1. Двукратное введение мышам вируса, экспрессирующего белок Е оболочки вируса клещевого энцефалита, защищало их при контрольном заражении гомологичным вирулентным вирусом [15]. Гены структурных белков вируса классической чумы свиней были встроены в ген тимидинкиназы вируса осповакцины. В культуре клеток CV-1 рекомбинантный вирус экспрессировал все четыре структурных белка вируса чумы, которые по основным свойствам не отличались от соответствующих вирионных белков. Иммунизация рекомбинантным вирусом надежно защищала свиней от инфицирования вирулентным вирусом [1348]. Сконструирован рекомбинантный вирус осповакцины, экспрессирующий основной белок оболочки вируса лейкоза крупного рогатого скота. Иммунизация телят таким вирусом оказывала лишь частичный защитный эффект. Аналогичные результаты получены в других исследованиях при испытании рекомбинантного вируса на овцах.

    Мыши, иммунизированные рекомбинантным вирусом осповакцины, кодирующим неструктурный белок NS-1 вируса денге, были полностью защищены от летального энцефалита при последующем заражении вирулентным вирусом [656]. В ген gill аттенуированного вакцинного штамма вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота встроены последовательности кДНК, кодирующие мономерные и димерные формы эпитопов белка VP1 вируса ящура. Такая вакцина вызывала иммунитет к вирусу ринотрахеита и выработку антител против ящура [891]. Рекомбинантный бакуловирус экспрессировал капсидный белок VP 2 вируса катаральной лихорадки овец в иммуногенной форме. Добавление структурного белка VP5 усиливало иммуногенный эффект [1345]. С целью создания эффективной, безопасной и экономичной антирабичес- кой вакцины для профилактической иммунизации людей и животных получен рекомбинантный аденовирус серотипа-5 человека, содержащий ген гликопротеина вируса бешенства. Иммунизированные им мыши были защищены от летальной интрацеребральной инфекции [1272]. Получен рекомбинантный вирус осповакцины, содержащий одновременно участки генома вирусов гепатита В, гриппа и герпеса простого, который экспрессировал HBsAg вируса гепатита В, гемагглютинин — вируса гриппа и гликопротеин D вируса герпеса простого [41]. Таким образом, в качестве векторов для создания рекомбинантных вакцин используют различные стабильные аттенуированные вирусы. Наибольший успех был достигнут при использовании вируса осповакцины в качестве рекомбинантного вектора. Такой рекомбинантный вирус мог экспрессировать протективные антигены большого количества вирусов, в том числе его использовали для иммунизации против бешенства. Вставка гена гликопротеина вируса бешенства в ген тимидинкиназы вируса вакцины приводит к снижению его вирулентности. В силу того, что геном вируса осповакцины способен включать много чужеродных генов без потери способности формировать вирионную структуру, теоретически возможно конструировать в качестве вектора один рекомбинантный вирус, способный защищать против нескольких вирусных болезней. Использование вируса оспы птиц в качестве вектора при создании рекомбинантных вакцин для птиц представлялось весьма логичным. Однако большим сюрпризом оказалось то, что вирус оспы птиц может служить вектором при имм- мунизации млекопитающих. Допускается возможность, что этот вирус и тесно связанный с ним вирус оспы канареек, также используемый в качестве вектора, не реплицируются с образованием инфекционного вируса в клетках млекопитающих, но включенные в их геном чужеродные гены экспрессируются и вызывают специфический иммунный ответ. Возможно, что такие векторы вызывают абортивную инфекцию in vivo с экспрессией чужеродных антигенов, вызывая клеточный и гуморальный иммунитет. Такие нереплицирующие векторы являются безопасными для иммуносу- прессивных хозяев.

    Необходимо иметь в виду, что введение рекомбинантных живых вакцин в организм может вызывать иммунный ответ как против вируса донора чужеродного гена, так и против векторного вируса. Однако непохоже, чтобы рекомбинантные субъединичные вакцины были эффективнее рекомбинантных векторных вакцин, ограниченных однократным применением из-за развития иммунитета к векторному вирусу. Отдельные векторные вакцины применяют в полевых условиях. Это вакцина против бешенства лис, применяемая для профилактики бешенства в Европе, и вакцина против бешенства хорьков, применяемая в США. Вакцина против чумы КРС (основанная на вирусе осповакцины и вирусе оспы коз) применяется в Африке. Недавние исследования подтвердили, что адено-, герпес- и парвовирусы могут также служить векторами и могут иметь преимущества в экспресии генов гетерологичных вирусов. 

    www.med24info.com

    Смотрите также

    г.Самара, ул. Димитрова 131
    [email protected]