MERIAL РАБИЗИН ВАКЦИНА ПРОТИВ БЕШЕНСТВА. Линия клеток nil2 вакцины ветеринария
Способ изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной
(57) Использование: вирусология. Сущность изобретения: вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемой культуре клеток почки сайги в бессывороточной питательной среде. Инфекционная активность вируса достигает 7,5 - 8,0 логарифмов МЛД 50/мл. Вирус инактивируют препаратом А-24 (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) не менее 18 часов при концентрации его в сырье 0,1 - 0,15%. Добавляют гидроокись алюминия и готовят жидкую или лиофилизированную вакцину. 1 табл. Изобретение относится к области вирусологии, в частности к способу изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной, и может быть использовано для специфической профилактики бешенства животных. Известна вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма Щелково-51 [1] которая эффективна и вызывает у животных иммунитет не менее 2x лет. Готовится в сухом виде. Для получения вирусного сырья используют вакцинный штамм Щелково-51 и перевиваемую линию культуры клеток ВНК-21, которая обладает потенциальными онкогенными свойствами. Вирус инактивируют
--пропилактоном. Для стимулирования иммунитета у животных готовят специальный растворитель РКАВ. Известна также инактивированная вакцина РОН-МЕРЬЕ Rabisin [2]которая высокоэффективна и вызывает у собак и кошек иммунитет до 3x лет. Готовится в жидком виде. Основой для ее получения служат фиксированный штамм PV 11-PM вируса бешенства и клеточная линия неврального происхождения (NiL2 - нервная ткань эмбрионов хомячков). Вакцину очищают от клеточных белков методом фильтрации. Вирус инактивируют -пропилактоном. Вирусный белок сорбируют гидроокисью алюминия. В вирусном сырье вышеуказанных вакцин содержится сыворотка млекопитающего, которую используют при выращивании вируса в культуре клеток. С 1973 г. ВОЗ рекомендует использовать инактивированные культуральные антирабические вакцины. Однако производство антирабических вакцин на гетероплоидных клетках связано с низким выходом вируса и использованием сывороток млекопитающих в культуральной среде во время выращивания вируса. В ветеринарии используют перевиваемую культуру клеток ВНК-21, хотя в медицине эта клеточная линия для производства антирабических вакцин из-за онкогенных потенций не используется. Целью настоящего изобретения является разработка простого и экономичного способа изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной, пригодной для иммунизации животных против бешенства. Поставленная цель достигается тем, что вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства впервые выращивают в перевиваемой культуре клеток почки сайги (ПС) без сыворотки млекопитающего, так и в присутствии ее в культуральной жидкости. Инфекционная активность вируса достигает 7,5 8,0 лог МЛД 50/мл. Использование отечественного препарата А-24 позволяет полностью инактивировать вирус, сохранив иммуногенные свойства препарата. Разработанная технология производства вакцины позволяет получать вирусное сырье в больших объемах и готовить вакцину в жидком и сухом виде. В качестве растворителя сухой вакцины служит стерильная дистиллированная или кипяченая вода. Пример конкретного выполнения. Для приготовления вакцины используют перевиваемую культуру клеток ПС с посадочной концентрацией 120
10 тыс.кл/мл, которую получают роллерным способом в виде кругового монослоя в бутылях, используя среду Игла (МЭМ). Монослой клеток на стенках роллерных бутылей формируется в течение 42 48 часов при температуре 37 0,5oC при пролиферативной активности клеток 1:5 и рН 7,3 7,4. Культуру клеток ПС инокулируют вакцинным штаммом ТС-80 вируса бешенства при множественности заражения 0,1 МЛД50/мл на клетку. Бутыли с вируссодержащей культуральной жидкостью замораживают при температуре минус 40 60oC. Затем через 18 24 часа размораживают при комнатной температуре, вируссодержащее сырье объединяют и вирус инактивируют препаратом А24 (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) не менее 18 часов при содержании его в сырье 0,1 0,15% Затем добавляют гидроокись алюминия до 2,5% концентрации в препарате и готовят жидкую или лиофилизированную вакцину. По предлагаемому способу изготовлено 6 серий (3 жидкой и 3 лиофилизированной) антирабической вакцины инактивированной культуральной по 5 8 тыс. доз в каждой серии. Полученные вакцинные препараты испытаны согласно Требованиям ВОЗ. Результаты исследований, отображенные в таблице, свидетельствуют о высокой иммуногенной активности антирабической вакцины инактивированной культуральной. Указанная вакцина как после двукратной, так и однократной иммунизации защищает собак и кошек на 100% от заражения уличным штаммом "Rabies 777M" вируса бешенства и морских свинок на 90 100% после инокуляции стандартным референс штаммом "CV5". Одновременно установлены стерильность, безвредность приготовленных вакцинных препаратов и полная инактивация вируса. Указанная вакцина сохраняет свои свойства в течение 1,5 лет (срок наблюдения). Предлагаемая технология изготовления вакцины проста в исполнении и может быть промышленно применима.
Формула изобретения1 Способ изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной, включающий культивирование вируса в культуре клеток, инактивацию и сорбцию, отличающийся тем, что из вирусов используют вакцинный штамм вируса бешенства ТС-80, культивированный в роллерной культуре перевиваемой линии клеток почки сайги в бессывороточной среде до активности 7,5 8,0 lg МЛД 50/мл, инактивацию проводят 1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодеканом в 0,1 0,15% -ной концентрации не менее 18 ч и готовят в жидком или лиофилизированном виде.
РИСУНКИРисунок 1www.findpatent.ru MERIAL РАБИЗИН ВАКЦИНА ПРОТИВ БЕШЕНСТВА
Цена:от: до:
Название:
Артикул:
Текст:
Выберите категорию:Все АКЦИИ! НОВИНКИ! ВЕТЕРИНАРНЫЕ ДИЕТЫ» Кошки»» Сухие корма»» Влажные корма» Собаки»» Сухие корма»» Влажные корма КОШКИ» Повседневные корма» Влажные корма» Лакомства» Витамины» Наполнители» Груминг»» Расчески , Фурминаторы»» Педикюр»» Машинки для стрижки» Косметика » Игрушки» Когтеточки и Домики» Миски , Фонтаны , Коврики под миски, Автокормушки» Ошейники , Шлейки » Туалеты и Аксессуары » Одежда для кошек СОБАКИ» Повседневные корма» Влажные корма» Лакомства» Витамины» Все для дрессировки» Косметика» Груминг»» Расчески, Пуходерки, Фурминаторы»» Педикюр»» Машинки для стрижки» Одежда для собак »» для маленьких собак»» для средних и крупных собак»» Дождевики»» Кофты и свитера»» Обувь»» Зимние комбинезоны»» Куртки, парки» Амуниция»» Поводки рулетки»» Поводки, ринговки, сворки»» Ошейники»» Шлейки»» Намордники»» Адресники,жетоны»» Карабины»» Цепи»» Украшения» Туалеты , Пелёнки и Аксессуары» Миски , Фонтаны , Коврики под миски , Автокормушки» Спальное место для собаки, лежаки» Игрушки ГРЫЗУНЫ» Корма для грызунов» Лакомства и витамины» Аксессуары» Наполнители» Клетки ХОРЬКИ» Корма для хорьков» Средства по уходу» Аксессуары» Клетки ПТИЦЫ» Корма» Витамины» Аксессуары» Клетки» Игрушки» Гнезда и домики РЕПТИЛИИ» Корм» Витамины» Наполнитель для террариума» Лампы и подсветка для террариума РЫБЫ» Корм и витамины» Средства для воды» Лекарства для рыб» Грунт для аквариума» Средства для растений» Техника и оборудование» Аквариумы» Компрессоры» Наполнитель для фильтров ЛОШАДИ» УХОД ЗА ЛОШАДЬЮ»» Скребницы»» Щетки»» Крючки для копыт»» Ящики для инструментов по уходу» КОРМА И ПОДКОРМКИ»» Сиропы и масла»» Корма и мюсли»» Подкормки»» Вкусняшки»» Соли, лизунцы» АМУНИЦИЯ»» НЕДОУЗДКИ И ЧОМБУРА»»» Недоуздки»»» Чомбура»»» Аксессуары»» РАБОТА НА КОРДЕ»» ОГОЛОВЬЯ И АКСЕССУАРЫ»»» Трензельные оголовья»»» Мундштучные оголовья»»» Безтрензельные уздечки»»» Железо»»» Налобные ремни»»» Капсуля,детали уздечек и аксессуары»»» Поводья»» СЕДЛА И ВСЕ К НИМ»»» Выездковые седла»»» Конкурные седла»»» Универсальные седла»»» Стремена»»» Подпруги»»» Путлища»» ВАЛЬТРАПЫ»» ПОПОНЫ»» АМОРТИЗАТОРЫ»» УШКИ»» ЗАЩИТА ДЛЯ НОГ»»» Бинты и ватники»»» Ногавки»»» Колокольчики» КОСМЕТИКА»» Репелленты»» Уход за копытами»» Шампуни и Кондиционеры»» Линименты, мази» АПТЕКА ДЛЯ ЛОШАДЕЙ»» Лекарственные сборы»» Обработка ран и лечение кожных заболеваний»» Антигельминтики»» Вакцины» ВСЕ ДЛЯ ТРАНСПОРТИРОВКИ» ТОВАРЫ ДЛЯ ВСАДНИКА ФЕРМА ГИГИЕНА И УХОД» Уход за глазами» Уход за зубами» Уход за ушами» Уход за лапами» Удаление пятен и запахов» Приучающие и отпугивающие средства ДЛЯ ВСКАРМЛИВАНИЯ НОВОРОЖДЕННЫХ ТОВАРЫ ДЛЯ ПЕРЕВОЗКИ КЛЕТКИ , ВЫСТАВОЧНЫЕ ПАЛАТКИ , ВОЛЬЕРЫ ВЕТЕРИНАРНАЯ АПТЕКА» Вакцины и сыворотки » Иммуностимуляторы и противовирусные» Антигельминтики (противоглистные)»» Таблетки»» Капли»» Суспензии, пасты, порошки»» Ошейники»» Инъекции» Средства от блох и клещей »» Таблетки»» Ошейники»» Капли»» Спреи и аэрозоли»» Шампуни» Контрацептивы и Гормоны» Гомеопатия и фитопрепараты» Противомикробные препараты » Глазные , ушные капли и лосьоны , средства для полости рта» Выведение волосяных бензоатов из ЖКТ (профилактика и лечение )» Пребиотики и пробиотики» Препараты для лечения онкологических заболеваний» Гепатопротекторы. Профилактика и лечение заболеваний печени.» Препараты для лечения заболеваний кожи различного генеза» Профилактика и лечение ЖКТ» Препараты для лечения мочеполовой системы » Успокоительные средства» Хондропротекторы и лечение заболеваний опорно-двигательной системы» Препараты применяемые в кардиологии» Ветеринарные паспорта» Аксессуары по уходу» Растворы для инъекций» Дезинфекция, обработка помещений
Производитель:ВсеS.P. Veterinaria(Испания)Vet-Agro(Польша)Mozer(Германия)Sanal(Голландия)Квиглис(Россия)ООО Фармбиомедсервис(Россия)ООО Фарвет(Россия)Super Design(Китай)Elanco(Франция)Kela(Бельгия)S.A.Sogeval(Франция)ООО ВИК (Россия)Зооник(Россия)Данко(Россия)ООО Ветспектрум(Россия)Бионит(Россия)ООО "Ваше хозяйство"(Россия)Organix(Нидерланды)Wellness Core(США)OOO Фармасофт(Россия)Norbrook Laboratories Ltd(Великобритания)ЗАО Пептек(Россия)ЗАО Агробиопром(Россия)ООО Фирма Биоветсервис(Россия)PetPillPen(Китай)Lion(Россия)PetsEra(Китай-США)HomeCat(Китай)Sera(Германия)Green Farm(Россия)Vitakraft(Германия)ООО Фарма ГенNatural(Китай)Marchioro(Италия)ORLING(Чехия)Winner's Circle(Бельгия)Zootrend(Россия)Cliffi(Италия)ПетроваксФарм(Россия)Doglike(Россия)Дарелл(Россия)НЭКА(КНР)PSH(Испания)Фатро(Италия)Wanpy(Китай)Curver PetLife(Польша)Dunya Dogus(Россия)Pet's Dream(Россия)ООО «ВИК здоровье животных»(Россия)Vetericyn(США)Andover(США)MidWest(Китай)Petto(Россия)Fresh Step(США)Easy Clean(Канада)INNOVATIVE DESIGN&SOURCING(США)Hau-Hau(Финляндия)ТМ Золотая Клетка(Фабричный Китай)АлексАнн(Россия)Астрафарм(Россия)Витавет(Россия)ООО «Белэкотехника»Holistic Blend(Канада)HKM(Германия)Star(Индия)Hagen(Малайзия)АвитаГрупп(Россия)Биосенсор АН(Россия)АО з-д "Ветеринарные препараты"(Россия)Фелуцен(Россия)Catzone(Турция)Dr. Elsey’s(США)Oster(Китай)Barking heads(Великобритания)Vetdicate(Тайвань)Ecuphar(Бельгия)Pettric (Тайланд)AATU(Британия)Pfiff(Германия)Loesdau(Германия)Дикий медведь(Россия)Elanco(Германия)ООО «Медмил»(РоссияDogmoda(Россия)Magnusson(Швеция)БиАгро(Россия)Bio-Pro Research(США)1 All systems(США)Iv San Bernard(Италия)KONG Company Limited(США)ProDen PlaqueOff(Швеция)Pet Fashion(Россия)ВетБиоХим(Россия)Артериум(Украина)ООО НИО «Медитэр», РоссияВетзвероцентр(Россия)Белкаролин(Белорусь)Kruuse(Дания)Kyjen(США)Animonda(Германия)Dog Fest (Китай)VanCat(Турция)«Norbrook Laboratories Limited»(Великобритания)Vetoquinol(Франция)ООО ТД "Вестерн"(Китай)Green Fort(Россия-Германия)Астрофарм(Россия)Marstall(Германия)Canina(Германия)Lolo Pets(Польша)Wildcat(Германия)Wolfsblut(Германия)Богатырские корма(Россия)PerseiLine(Россия)Redplastic(Россия)SafeMade(США)Цамакс(Россия)ЗАО Мосагроген(Россия)Ceva Sante Animale(Франция)Хелвет(Россия)ЗАО Нита-Фарм(Россия)OOO Фирма Каскад(Россия)ООО НПК Асконт+(Россия)Триол(Китай)ООО Флоресан(Россия)ImmCont GmbH(Германия)Зоомарк(Россия)Isegrim(Германия)Hubertus Gold(Германия)Pavo(Голландия)Pioneer Pet (США)Jolly Pets(США)Starmark(США)Doggles(США)PIONEER PET(Китай)Moderna(Бельгия)STEFANPLAST(Бельгия)ООО Грин Кьюзин (Китай)J.W(США)Triol(Китай)Super Pet(США)Little One(Россия)ООО «ТНК СИЛМА»(Россия)Luxsan(Россия)Balkanpharma(Болгария)Flexi(Германия)PetHead(США)Trixie(Германия)Yami-Yami(Россия)Ontario(Канада)Nero Gold(Нидерланды)ТурцияVetricyn(США)ООО БиоФармГарант(Россия)Whimzees(Голландия)SERGEAT'S(США)ООО Ветбиохим(Россия)Биохимфарм(Россия)Novartis Animal Health d.o.o(Словения)MaxiCat(Италия)Tomi(Германия)Сlan Classic(Италия)BENELUX ( Бельгия)Collar(Украина)Clan(Россия)Equilibre(Франция)Piccolo(Великобритания)1ST Choice(Канада)Gina(Канада)Gina(Великобритания)Canagan(Великобритания)Vigor&Sage GmbH(Германия)Interchemie werken ( Нидерланды )YuuP(Италия)Kennels`Favourite(Голландия)Carr&Day&Martin (Англия)Nutri Horse(Чехия)S.P.Veterinaria,S.A.(Испания)Montego(ЮАР)Текопеска(Эквадор)Techiblend CC(ЮАР)Vitapol(Польша)Pet Line(Индия)КанадаMerial(Франция)InstinktKarlie-Flamingo ( Бельгия)Savic(Бельгия)Penn-Plax (США)HOBBY (Польша)VetExpert ( Польша)ICF (Италия)LDCA ( Франция)Keystone ( США )Euracon pharma ( Германия )Virbac( Франция)Witte Molen ( Нидерланды)Тетра (Германия)BIO-GROOM (США)ООО Гринко (Россия)Protexin ( Великобритания)Titbit(Россия)Karlie Flamingo(Бельгия)SanicatKatrinCandioli(Италия)Tropiclean(США)Clan(Россия-Германия)Schesir(Италия)Биотех-ФармStuzzy(Италия)MANITOBA (Италия)Pronature,КанадаГолден Акрес (Великобритания)Производственная фирма «НАША Ручная работа»Nicovet GmbH, ГерманияEuracon Pharma ( Германия)ООО " Оргполимерсинтез"ООО "Нита-Фарм"ПАО "Ветеринарные препараты"INVESA (Испания)Ceva ( Франция)MSDGlobalvet (Дания)Mr.Gee ( Россия)ООО Полидекс (Россия)НТЦ БиоИнвест ООО (Россия)ООО "Ветбиохим"Padovan ( Италия)R2P PETООО НПФ " Пробиотика"ООО " Биоспектр"ООО БФ "Компонент"«CEVA Animal Helth»АвстралияHAGENGIGI ЛатвияGigwiЗАО*Гатчинский ККЗ*Ленинградская обл.ЗАО"Гатчинский ККЗ" РоссияБельгияМнямс (Нидерланды)Zogoflex ( США)Monge ( Италия)АгробиопромООО"ГринЛайф"Тайланд PetreetFurminator (Spectrum Brands Inc.)СЕВА (Франция)Hill's ( Голландия)ООО *Биосфера*ООО *Старлайт*Экохимтех (Россия)Полярис (Россия)Биосенсор АНг.Пенза (Россия)VIYO INTERNATIONAL NVАгробиомедАО *ТОП ВЕТ*ЗАО*Агробиопром*Факта Фармацевтичи (Италия)ООО *АлексАнн*ООО *ФОКС и КО*"HOBBY", ПольшаBosch(Германия)MPS2 snc di Tamiozzo G.B. & C.Ветзвероцентр, (Россия)Zoetis (ранее Pfizer).MERIALИнтервет, АвстрияБиовета, ЧехияВеликобританияVersele-Laga (Бельгия)Hill`sEukanuba (Нидерланды)ЗАО" Экопром" (Россия)FatCat (США)ООО "Никофарм" ( Россия)Krka Farm (Крка) СловенияЗоомир ( Россия)Гамма (Россия)Dogman (Россия)Lara ( Франция)Becothings (Великобритания)Рэма (Россия)ООО " Алькор" ( Россия)Van ness (США)Osso-Fashion (Россия)CatIt ( Нидерланды)Petstages (CША)Hunter ( Германия)Мнямс (Германия)Biofactory ( Чехия)Kennels Favorit ( Голандия)Скифф ( Россия)Экопром ( Россия)АВЗ ( Россия)Petmate ( США)Gimborn ( Германия)Beaphar ( Германия)SANAL ( Голандия)Ginborn( Германия)MPS ( Италия)Dezzie(Китай)Pet Brands (США)Nero Gold(Голандия)PetNovatoins Ltd СШАBayer (Германия)KRKA (Словения)Veda(Россия)Tropiclin (США)Dental Fresh (USA)ГлобалВетООО ДельтаФармакс ( Россия)Fiory (Италия)cliny (Россия)Фронтлайн (Франция)Вектра 3Д (Франция)Hartz(CША)Api-San(Россия)Crown Royal(США)Show Tech(Бельгия)Savarra(Великобритания)OOO НИК(Россия)ЗАО НПФ Биофармтокс(Россия)ForMyDogs(Китай)Anju Beaute(Франция)ООО Лигфарм(Россия)ООО ГамаВетФарм(Россия)ООО Лидер (Россия)Iv San Bernar(Италия)Espree(США)Jerob(CША)Biofaktory(Чехия)8 in1(США)Inform Nutrition(Ирландия)№1 Наполнители(Россия)Wolmar Winsome(Швейцария)ФГУП Армавирская биофабрика(Россия)ООО НПП Бионокс(Россия)ЗАО Микро-плюс (Россия)ООО Интервет MSD(Нидерланды)Polidex(Россия)TRM(Ирландия)Sanabelle(Германия)Kis-Kis(Голландия)Pro-vet (Нидерланды)Зубочистики(Россия)Rinti(Германия)Pi-Pi-Bent(Россия)Best Friend (Дания)Nature Miracle(США)World Best(США)Extreme Classic(Канада)NOW!(Канада)GO!(Канада)Miamor(Германия)Schmusy(Германия)Bozita(Швеция)Royal Canin(Россия)Ferplast(Италия)Arden Grandge(Англия)Cat's Best(Германия)Guabi(Бразилия)Applaws(Англия)Dental Fresh(США)Bilanx(Дания)Pro Plan (Франция)Farmina(Италия)Almo Nature(Италия)Деревенские лакомства (Россия)Berkley(Германия)
Новинка:Всенетда
Спецпредложение:Всенетда
Результатов на странице:5203550658095
zoobogema.ru Род афтовирусы - Med24info.com
Ящур — высококонтагиозное, в большинстве случаев острогтротекающее заболевание парнокопытных животных, сопровождающееся образованием везикул и эрозий на слизистых оболочках пищеварительного тракта, в межкопытной щели и венчике, а также на других безволосых участках кожи. Ящур пока еще остается проблемой для многих стран. Раньше профилактика его основывалась главным образом на вакцинации крупного рогатого скота. Вакцинацию мелкого рогатого скота и свиней хотя и проводили, но часто недостаточно эффективно. Вирус ящура характеризуется большой вариабельностью антигенной структуры. Различают семь антигенных типов вируса: О, А, С, SAT1, SAT2, SAT3 и Азия 1. Иммунизация или переболевание одним из них не создает защиты против других типов вируса ящура. Кроме того, существуют несколько десятков подтипов и вариантов вируса, существование которых затрудняет специфическую профилактику данного заболевания. После переболевания вирус ящура может быть обнаружен у КРС спустя более года, у овец — спустя 6 месяцев. Персистенция вируса не обнаружена у свиней. Вирус ящура удалось выделить из глоточно-пищеводной области крупного рогатого скота через 539 дней после заражения. Однако клинически здоровые вирусоносители не являются эффективными распространителями вируса [1181]. Во время персистентной инфекции наблюдается быстрая эволюция вируса. Точечные мутации могут сопровождаться изменением вирулентности и антигенно- сти [698]. РНК вируса ящура, как и РНК других вирусов, мутируют на несколько порядков чаще, чем клеточное ДНК. Полагают, что с этим связано отсутствие точного считавания в процессе копирования генома [1449]. Поэтому в организме инфицированного животного популяция вирусных геномов существует как «видовое» явление [598]. Эта способность к быстрой геномной и антигенной изменчивости ответственна за существование 7 серотипов и множества антигенных вариантов внутри серотипов. Из четырех структурных белков VP1, VP2, VP3 и VP4, образующих капсид вируса ящура, иммунодоминантным белком является VP1 [926]. Оказалось, что иммуногенность вакцины связана с полными вирионами (1408-частицами). Ан- тигенность вируса — значительно варьирует в зависимости от типовой и вариантной принадлежности. При испытании трехвалентной инактивированной вакцины установлено, что антиген А22 в 30 раз более иммуногенен, чем антиген О]. Антиген типа СЗ занимал промежуточное положение [349]. Для создания одинакового защитного эффекта требовалось 220 нг 1408-антигена типа О; 4,36 нг — типа С и 2,4 нг типа А. Продолжительность колострального иммунитета также зависит от типа вируса. Ревакцинация индуцирует более выраженный иммунный ответ, чем первичная вакцинация, при этом также отмечается расширение антигенной специфичности. Например, у животных, вакцинированных однократно, развивается выраженный типоспецифический иммунитет на введение только цельновирионного антигена (MOS-антигена). В отличие от первичного иммунного ответа, ревакцинация гетеротипичными антигенами меньшей активности стимулирует образование гомо- и гетеротипических антител. У вакцинированных животных после реиммунизации цельновирионными (1408-антигенами), инактивированными гомо- и гетеротипичными вакцинами наблюдается повышение уровня ВНА, выработанных на первичное введение антигена, а также появляются ВНА на вновь введенный антиген [454]. Основное значение в защите животных от заболевания принадлежит гуморальным факторам иммунитета. Местный клеточный иммунитет проявляется в перые дни после заражения и ярко выражен к моменту генерализованного афто- образования. Возможную роль на этом этапе играет опсонизация макрофагов [1035]. Антигенспецифические Т-клетки играют важную регуляторную роль в развитии гуморального иммунитета. ВНА у КРС можно обнаружить через 3—4 дня Таблица 46. Географическое распространение ящура
Регион
|
Тип вируса
|
Южная Америка
|
О, А, С
|
Европа
|
О, А, С
|
Африка
|
О, А, С, SAT1, SAT2, SAT3
|
Азия
|
О, А, С, Азия 1
|
Северная и Центральная Америка
|
Свободны от вируса
|
Океания
|
Свободна от вируса
|
после заражения. Они достигают максимума через 10—14 дней и удерживаются на этом уровне 30—40 дней, а затем их уровень постепенно снижается.
Клиническое выздоровление коррелирует с образованием антител. К концу первой недели вырабатываются ВНА, а спустя еще несколько дней — компле- ментсвязывающие антитела (КСА), и затем преципитирующие антитела (ПА). ВНА сохраняются в течение нескольких месяцев, а КСА и ПА — 2—3 месяца. IgM нейтрализуют гомо- и гетерологичные типы вируса, IgG — только гомологичный тип вируса или его субтипы.
У переболевших животных, в отличие от привитых инактивированной вакциной, присутствуют антитела к полимеразе. Иммунитет обычно длится около года и реже дольше. Он еще сохраняется после исчезновения нейтрализующих антител и зависит от свойств инфицирующего штамма вируса, а также от реактивности животного. Он всегда направлен против гомологичного типа вируса. Против вариантов данного типа, как правило, также образуется хороший иммунитет. При очень напряженном иммунитете может проявляться некоторая устойчивость к заражению другими типами вируса [596].
С развитием методов культивирования вируса был создан ряд высокоэффективных инактивированных вакцин, отличающихся способом размножения, инактивацией вируса и качеством адъювантов. Для крупного и мелкого рогатого скота, как правило, применяют сорбированные вакцины, а для свиней — эмульгированные. Современные инактивированные вакцины против ящура производят из вируса, выращенного в суспензии клеток. Вирус инактивируют N-ацети- лэтиленимином и в качестве адъюванта добавляют ГОА или готовят двойную масляную эмульсию. Систематическое применение инактивированной вакцины во многих европейских странах привело к ликвидации болезни. Первоначально вакцину готовили из вируса больных животных. Затем выращивали в экплантах эпителия языка КРС, а позже в клеточных культурах. В начале использовали первичную культуру клеток почки телят, а затем линию клеток почки молодого хомяка [1458]. Последняя клеточная система была адаптирована к производству инактивированной противоящурной вакцины [1436, 715]. Наконец появилась самая современная технология крупномасштабного культивирования в суспензии клеток. В основном используют линию клеток ВНК 21 [296] или, реже, линию клеток эмбриона хомяка NIL-2 [661] или IFA3 [1186].
Выбор производственного штамма вируса зависит от эпизоотической ситуации в соответствии с циркулирующими типами вируса. Актуальные эпизоотические штаммы вируса ящура предварительно размножали в однослойных культурах клеток почек крупного рогатого скота или свиней, а затем адаптировали к размножению в суспензионной культуре клеток. После размножения в суспензионной культуре вирус подвергают осветлению, фильтрации, инактивации, очистке и концентрированию. Все операции проводят при рН=7,0—8,0 [401].
Содержание целых вирусных частиц (146S) является главной характеристикой вирусного сырья, определяющей иммуногенную активность вакцины [1223]. При составлении вакцины необходимое количество антигена в прививной дозеопределяют исходя из концентрации 146S компонента. Необходимо иметь в виду, что VP1 чувствителен к разрушению протеазами [462], которые могут снижать его иммуногенность в процессе инактивации вируса [1660].
Инактивация вируса является одним из наиболее критических этапов изготовления противоящурной вакцины. Многие вспышки ящура в Европе в 1980-х годах были связаны с применением инактивированной вакцины [316]. Первоначально использовали формальдегид для инактивации вируса адсорбированного на ГОА. По мере совершенствования эта система в основном была заменена использованием веществ, обладающих кинетикой инактивации первого порядка из группы азиридинов, и в первую очередь диаметром этиленимина [276]. В идеале эта процедура выполняется дважды в различных сосудах.
Процесс инактивации контролируют титрованием вируса в чувствительной культуре клеток, спектрофотометрическим анализом и серологически [1683].
С целью уменьшения объема и повышения эффективности вакцины используют концентрированный и частично очищенный вирусный антиген. После инактивации вирус в производственных условиях концентрируют ультрафильтрацией, или полиэтиленгликолем, или полиэтиленоксидом, что дает возможность повысить концентрацию антигена в десятки и сотни раз [1183].
Безопасность готовой вакцины определяют на естественно восприимчивых серонегативных животных, а элюированный из нее антиген — в чувствительной культуре клеток. При 40°С вакцина сохраняет специфическую активность в течение 1 года.
Адъювант добавляют к инактивированной забуференной вирусной суспензии. В жидком виде (после адсорбции инактивированного вируса на ГОА — А1(ОН)3 и добавления сапонина) вакцину широко используют в мире для иммунизации жвачных. В связи с недостаточным иммунитетом после применения такой вакцины у свиней им стали применять концентрированную вакцину с масляным адъювантом. Такую же вакцину применяли для КРС в Южной Америке [445]. Совершенствование такой вакцины было направлено на снижение реактогенности. Эмульгированная вакцина была необходима для зон, где требовался длительный иммунитет у КРС и преодоление материнского иммунитета. Простая эмульсия вода в масле получена эмульгированием жидкого раствора антигена с легким минеральным маслом и эмульгирующим агентом. Более легко вводимый препарат получают путем дальнейшего эмульгирования во второй водной фазе до получения стабильной эмульсии вода в масле в воде (двойная масляная эмульсия — DOE). DOE вакцина против ящура успешно применялась для иммунизации КРС и свиней [597]. Ежегодно в мире методом суспензионного культивирования в перевиваемых клетках с использованием автоматизированных реакторов большой емкости производили 800^-1000 млн доз вакцины [296, 1112].
Однократное введение инактивированной вакцины сопровождается кратковременным иммунитетом продолжительностью 3—6 мес. С целью более надежной иммунизации животных обычно первоначально вакцинируют дважды с интервалом 2—4 недели. Ревакцинацию проводят через 4—12 месяцев в зависимости от эпизоотической обстановки, качества вакцины и возраста животных.
Концентрированная ГОА-сапониновая вакцина при однократном введении в дозе 1 мл обеспечивала практически 100%-ную защиту скота при экспериментальном заражении общепринятым способом. Выраженный иммунитет наступает на 10—14 день и достигает максимума через 3-4 недели после вакцинации. Иммунитет у взрослых животных длится 6—12 месяцев. Ревакцинация значительно усиливает иммунитет. При широкой профилактической вакцинации крупный рогатый скот обычно ревакцинируют 1 раз в год, свиней — два раза. ВНА в сыворотке крови появляются к концу первой недели, достигают максимального титра в 3-5 недель, затем их концентрация постепенно снижается. ВНА быстрее появляются и достигают пика после введения сорбированных вакцин, однако после применения эмульгированных вакцин титр антител выше и они сохраняются дольше. Колостральный иммунитет хорошо выражен, антител'а у телят сохраняются в течение 5 мес., хотя пассивная защита продолжается до 3 мес.
Материнский иммунитет может подавлять эффект вакцинации у молодняка, поэтому вакцинацию телят при систематической вакцинации коров начинают с 3—4 месячного возраста. Однако имеются доказательства, что телята отвечают на вакцинацию в месячном возрасте или раньше [266].
Возникновение и течение ящура в неблагополучной зоне в значительной мере определяются групповым иммунитетом. Если уровень иммунитета в популяции естественно восприимчивых видов животных превышает 75%, заболевание будет под контролем, хотя такие меры, как контроль за импортом скота, карантин и локальный убой скота в неблагополучном пункте являются эффективными.
Инактивированные вакцины могут быть моно- или поливалентными, то есть содержать антигены одного или нескольких типов, подтипов и вариантов вируса. При изготовлении поливалентных вакцин количественное соотношение вирусных антигенов необходимо определять с учетом их иммуногенности.
Одновременная вакцинация крупного рогатого скота против ящура и чумы оказалась возможной. Если инактивированную поливалентную ГОА-вакцину против ящура и живую — против чумы вводить одновременно подкожно в область шеи с разных сторон, то образуется такой же иммунитет, как и при раздельной вакцинации против каждого заболевания. Исследования и разработки в области специфической профилактики ящура достигли высокого уровня.
Инактивированные противоящурные вакцины являются высокоэффективными препаратами, а технология их изготовления основывается на самых современных достижениях биологической науки. Успех и изготовление инактивированных противоящурных вакцин могут быть использованы в качестве прототип- ных решений в исследованиях и разработках инактивированных вакцин против других заболеваний человека и животных.
Остается неясным вопрос, могут ли современные инактивированные вакцины защищать животных от латентного инфицирования в эндемичных по ящуру регионах. Если нет, то какими они должны быть для достижения указанной цели. Большой интерес представляют сведения о том, что у вакцинированных свиней после экспериментального заражения при отсутствии клинических признаков болезни вирус обнаруживали в достаточно высокой концентрации в полости рта в течение нескольких недель. Наличие его в ротовой полости находится в прямой зависимости от уровня иммунитета. О приживлении вируса в организме вакцинированных животных свидетельствовало также резкое нарастание титра ВНА. Большой научный и практический интерес представляет выяснение места размножения вируса у таких животных.
Живые вакцины против ящура не разработаны. Многочисленные попытки в этой области не дали положительных результатов. Аттенуированные штаммы, как правило, оказывались или слабоиммуногенными, или реверсибельными. В этом отношении вирус ящура существенно отличался от вируса полиомиелита, аттенуированные штаммы которого успешно применяют для пероральной иммунизации человека. Причина этих различий неизвестна. Возможно, что она заключается в различном патогенезе этих заболеваний. Полиомиелит, как и многие вирусные заболевания, имеет сложный патогенез. Для их возбудителей характерно первичное место репликации с последующим проникновением в один или несколько органов-мишений. У полиовируса первичным местом размножения является кишечник, вторичным — центральная нервная система. Такие вирусы, по-видимому, относительно легко могут быть аттенуированны с помощью селективного изменения тропизма в отношении вторичных органов-мишений. В отличие от них, вирус ящура, как, впрочем, возбудители ряда других топикаль- ных инфекций, практически не имеют вторичного органа-мишени. Получение аттенуированных иммуногенных штаммов против таких заболеваний, вероятно, требует иных подходов и представляет более сложную задачу.
Риновирус лошадей 1 по ряду свойств ближе стоит к афтовирусам, чем к другим пикорнавирусам [1686]. Некоторые штаммы этого вируса могут вызывать виремию системное заболевание лошадей с респираторным синдромом. Вирус может выделяться с фекалиями. Средства специфической профилактики не разработаны.
www.med24info.com Способ изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной
(57) Использование: вирусология. Сущность изобретения: вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемой культуре клеток почки сайги в бессывороточной питательной среде. Инфекционная активность вируса достигает 7,5 - 8,0 логарифмов МЛД 50/мл. Вирус инактивируют препаратом А-24 (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) не менее 18 часов при концентрации его в сырье 0,1 - 0,15%. Добавляют гидроокись алюминия и готовят жидкую или лиофилизированную вакцину. 1 табл. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Изобретение относится к области вирусологии, в частности к способу изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной, и может быть использовано для специфической профилактики бешенства животных. Известна вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма Щелково-51 [1] которая эффективна и вызывает у животных иммунитет не менее 2x лет. Готовится в сухом виде. Для получения вирусного сырья используют вакцинный штамм Щелково-51 и перевиваемую линию культуры клеток ВНК-21, которая обладает потенциальными онкогенными свойствами. Вирус инактивируют β--пропилактоном. Для стимулирования иммунитета у животных готовят специальный растворитель РКАВ. Известна также инактивированная вакцина РОН-МЕРЬЕ Rabisin [2]которая высокоэффективна и вызывает у собак и кошек иммунитет до 3x лет. Готовится в жидком виде. Основой для ее получения служат фиксированный штамм PV 11-PM вируса бешенства и клеточная линия неврального происхождения (NiL2 - нервная ткань эмбрионов хомячков). Вакцину очищают от клеточных белков методом фильтрации. Вирус инактивируют β-пропилактоном. Вирусный белок сорбируют гидроокисью алюминия. В вирусном сырье вышеуказанных вакцин содержится сыворотка млекопитающего, которую используют при выращивании вируса в культуре клеток. С 1973 г. ВОЗ рекомендует использовать инактивированные культуральные антирабические вакцины. Однако производство антирабических вакцин на гетероплоидных клетках связано с низким выходом вируса и использованием сывороток млекопитающих в культуральной среде во время выращивания вируса. В ветеринарии используют перевиваемую культуру клеток ВНК-21, хотя в медицине эта клеточная линия для производства антирабических вакцин из-за онкогенных потенций не используется. Целью настоящего изобретения является разработка простого и экономичного способа изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной, пригодной для иммунизации животных против бешенства. Поставленная цель достигается тем, что вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства впервые выращивают в перевиваемой культуре клеток почки сайги (ПС) без сыворотки млекопитающего, так и в присутствии ее в культуральной жидкости. Инфекционная активность вируса достигает 7,5 8,0 лог МЛД 50/мл. Использование отечественного препарата А-24 позволяет полностью инактивировать вирус, сохранив иммуногенные свойства препарата. Разработанная технология производства вакцины позволяет получать вирусное сырье в больших объемах и готовить вакцину в жидком и сухом виде. В качестве растворителя сухой вакцины служит стерильная дистиллированная или кипяченая вода. Пример конкретного выполнения. Для приготовления вакцины используют перевиваемую культуру клеток ПС с посадочной концентрацией 120 ± 10 тыс.кл/мл, которую получают роллерным способом в виде кругового монослоя в бутылях, используя среду Игла (МЭМ). Монослой клеток на стенках роллерных бутылей формируется в течение 42 48 часов при температуре 37 ± 0,5oC при пролиферативной активности клеток 1:5 и рН 7,3 7,4. Культуру клеток ПС инокулируют вакцинным штаммом ТС-80 вируса бешенства при множественности заражения 0,1 МЛД50/мл на клетку. Бутыли с вируссодержащей культуральной жидкостью замораживают при температуре минус 40 60oC. Затем через 18 24 часа размораживают при комнатной температуре, вируссодержащее сырье объединяют и вирус инактивируют препаратом А24 (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) не менее 18 часов при содержании его в сырье 0,1 0,15% Затем добавляют гидроокись алюминия до 2,5% концентрации в препарате и готовят жидкую или лиофилизированную вакцину. По предлагаемому способу изготовлено 6 серий (3 жидкой и 3 лиофилизированной) антирабической вакцины инактивированной культуральной по 5 8 тыс. доз в каждой серии. Полученные вакцинные препараты испытаны согласно Требованиям ВОЗ. Результаты исследований, отображенные в таблице, свидетельствуют о высокой иммуногенной активности антирабической вакцины инактивированной культуральной. Указанная вакцина как после двукратной, так и однократной иммунизации защищает собак и кошек на 100% от заражения уличным штаммом "Rabies 777M" вируса бешенства и морских свинок на 90 100% после инокуляции стандартным референс штаммом "CV5". Одновременно установлены стерильность, безвредность приготовленных вакцинных препаратов и полная инактивация вируса. Указанная вакцина сохраняет свои свойства в течение 1,5 лет (срок наблюдения). Предлагаемая технология изготовления вакцины проста в исполнении и может быть промышленно применима.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1 Способ изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной, включающий культивирование вируса в культуре клеток, инактивацию и сорбцию, отличающийся тем, что из вирусов используют вакцинный штамм вируса бешенства ТС-80, культивированный в роллерной культуре перевиваемой линии клеток почки сайги в бессывороточной среде до активности 7,5 8,0 lg МЛД 50/мл, инактивацию проводят 1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодеканом в 0,1 0,15% -ной концентрации не менее 18 ч и готовят в жидком или лиофилизированном виде. bankpatentov.ru
|