Растворитель для живых бактерийных вакцин. Растворитель для вакцин
Растворитель для живых бактерийных вакцин
Изобретение относится к биологической промышленности и может быть использовано в ветеринарной практике. Растворитель предназначен для растворения сухих живых бактерийных вакцин (против листериоза животных, сальмоноллеза, рожи свиней, пастереллеза птиц, бруцеллеза крупного рогатого скота и др.) перед применением. Входящий в состав растворителя пептон, взятый в оптимальных концентрациях, и буферный компонент, содержащий изотоническую среду, обеспечивают близкую к стопроцентной выживаемость микроорганизмов как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии. Для изготовления растворителя навеску пептона концентрацией 0, 25-1,00% растворяют в калий-фосфатном буферном растворе рН 7,2-7,5 и стерилизуют автоклавированием в течение 30 мин под давлением 1 атм. 5 табл. Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в ветеринарной практике для растворения сухих бактерийных вакцин против листериоза животных, сальмонеллезов, рожи свиней, пастереллеза птиц, бруцеллеза крупного рогатого скота и др.
Сухие бактерийные вакцины содержат взвесь живых микроорганизмов, высушенных в защитной среде. Перед использованием вакцину необходимо растворить, причем процесс растворения (регидратации) оказывает на бактерии повреждающее действие и делает необходимым применение эффективного растворителя (разбавителя) для сохранения исходной активности разведенной вакцины в течение всего периода вакцинации. При анализе патентной документации и научно-технической литературы не обнаружено достаточно эффективного разбавителя для живых бактерийных вакцин. Известен растворитель для живых бактерийных вакцин, принятый за прототип. К числу недостатков данного растворителя, обнаруженных в процессе применения при вакцинации, относятся следующие: реактогенность, связанная с высоким содержанием пептона (2 - 5%) и отрицательным воздействием трилона Б на жизнеспособность бактерий, сложность и дороговизна изготовления. Целью изобретения является повышение стабилизирующей эффективности растворителя, стандартизация его состава и упрощение технологии его изготовления. Поставленная цель достигается за счет того, что в качестве стабилизирующего вещества растворитель содержит пептон, а в качестве буферного компонента - калий-фосфатный буферный раствор (КФБ) при следующем соотношении компонентов, мас.%: пептон 0,25 - 1,00; КФБ - остальное до 100. Для изготовления растворителя навеску пептона (ГОСТ 13805-76) из расчета его концентрации 0,25 - 1,00% растворяют в КФБ (0,925 г Kh3PO4 и 5,4 г K2HPO4 на 1 л дистиллированной воды) и устанавливают величину pH 7,2 - 7,5. Приготовленный растворитель стерилизуют автоклавированием в течение 30 мин под давлением 1 атм (120oC), стерильный растворитель расфасовывают по 100, 200 или 500 см3 в стерильные флаконы, закрывают стерильными резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют. Входящий в состав растворителя пептон, взятый в оптимальных концентрациях, и буферный компонент, создающий изотоническую среду, обеспечивают близкую к 100%-ной выживаемость микробных тел (листерий, сальмонелл, бактерий рожи, пастерелл, бруцелл и др.) как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии в течение всего времени вакцинации животных. Входящие в состав разбавителя компоненты - пептон и фосфаты калия - физиологически индифферентные вещества, хорошо растворимые в воде, стерилизуются автоклавированием, не оказывают токсического действия на людей и животных, не обладают антигенностью. Влияние концентрации пептона в растворителе на жизнеспособность бактерий в вакцине поясняется следующими примерами. Пример 1. Растворитель с минимальным количеством пептона 0,25% в КФБ. Сухую вакцину растворяют в данном растворителе и выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18oC, после чего делают высевы на мясо-пептонный агар для определения количества жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и употребляемый для этих целей физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 1, показывают, что жизнеспособность бактерий при содержании 0,25% пептона в растворителе выше, чем при использовании прототипа и физиологического раствора. Пример 2. Растворитель с оптимальным количеством пептона 0,5% в КФБ. Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 2, показали, что содержание в растворителе 0,5% пептона значительно повышает жизнеспособность бактерий по сравнению с прототипом и физиологическим раствором. Пример 3. Растворитель с максимальным количеством пептона 1,0% в КФБ. Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 3, показывают, что при содержании в растворителе 1,0% пептона жизнеспособность бактерий выше, чем в прототипе и физиологическом растворе. Пример 4. Растворитель с количеством пептона ниже минимального 0,1% в КФБ. Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 4, показывают, что при содержании в растворителе 0,1% пептона жизнеспособность бактерий падает и приравнивается к жизнеспособности в физиологическом растворе. Пример 5. Растворитель с количеством пептона выше максимального 1,5% в КФБ. Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения используют известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 5, показывают, что при содержании в растворителе 1,5% пептона жизнеспособность бактерий становится ниже, чем в прототипе и физиологическом растворе. Предлагаемый растворитель технологичнее, дешевле, более стандартен по сравнению с существующим, не требует использования ценного пищевого сырья при изготовлении и не вызывает реактогенных реакций у животных, а самое главное, повышает жизнеспособность бактерий.
Формула изобретения Растворитель для живых бактерийных вакцин, содержащий стабилизатор и буферный компонент, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора растворитель содержит пептон, а в качестве буферного компонента - калий-фосфатный буферный раствор при следующем соотношении компонентов, мас.%: Пептон - 0,25 - 1,00 Калий-фосфатный буферный раствор - Остальное до 100РИСУНКИ Рисунок 1
www.findpatent.ru Растворитель для живых бактерийных вакцин — SU 1490739
РАСТВОРИТЕЛЬ ДЛЯ ЖИВЫХ БАКТЕРИЙНЫХ ВАКЦИН, содержащий стабилизатор на основе пептона и фосфатный буферный раствор, отличающийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности микроорганизмов, стандартизации состава растворителя, упрощения технологии его изготовления, стабилизатор дополнительно содержит трилон Б при следующем соотношении компонентов, мас.%:Пептон 2 - 5Трилон Б 0,2 - 0,5Фосфатный буферный раствор Остальное Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в ветеринарной практике для растворения сухих бактерийных вакцин, например, против рожи свиней, пастереллеза птиц и бруцеллеза крупного рогатого скота.Целью изобретения является повышение стабилизирующей эффективности растворителя, стандартизация его состава, упрощение технологии его изготовления и замена ценного пищевого сырья на непищевое.П р и м е р 1. Для изготовления растворителя пептон и трилон Б растворяют в калийфосфатном буферном растворе (0,925 г КН2РО4 и 5,4 г К2НРО на 1 л дистиллированной воды) и определяют величину рН, которая должна быть в пределах 7,2-7,5. Приготовленный растворитель стерилизуют автоклавированием, расфасовывают во флаконы, закрывают резиновыми пробками, откатывают металлическими колпачками и этикетируют.Пептон и буферный компонент создают изотоническую среду и обеспечивают близкую к 100%-ной выживаемости микробных тел (пастерелл, бруцелл, бактерий рожи и др.) как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии в течение времени, необходимого для вакцинации (1-3 ч).Введение в состав растворителя трилона Б предотвращает образование осадка фосфорнокислых солей при изготовлении и хранении растворителя за счет образования водорастворимых комплексов трилона Б - катионы металлов, образующих нерастворимые соли фосфатов, увеличивает буферную емкость растворителя.П р и м е р 2. Для оценки эффективности действия растворителя приведены результаты исследования сохраняемости живых микробных тел в вакцине против рожи свиней (штамм ВР-2), разведенной растворителем на калийфосфатном буфере с концентрацией пептона и трилона Б соответственно 1, 2, 3, 4, 5 и 6% и 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6% и выдержанной 45 мин при 20 
2оС (см. табл.1).Из табл.1 видно, что при возрастании содержания в составе растворителя пептона в пределах 1-3% и трилона Б в пределах 0,1-0,3% возрастает концентрация живых бактерий рожи в разведенной вакцине и при концентрации пептона выше 3%, трилона Б выше 0,3% остается практически постоянной, поэтому концентрация пептона 3% и трилона Б 0,3% является оптимальной.П р и м е р 3. Исследована сохраняемость количества живых микробных тел в вакцинах против рожи свиней и пастереллеза птиц, растворенных в растворителе, содержащем 3% пептона, 0,3% трилона Б и КФБ. Разведенные вакцины выдерживают при 20
2оС в течение 0,5-1; 1,5; 2 ч. Определяют через каждые 0,5 ч количество живых микробных тел. Предлагаемый растворитель сравнивают с физиологическим раствором NaCl (ФР) и растворителем, содержащим МПБ.Результаты исследований (см. табл.2 и 3) показывают, что МПБ и растворитель на основе пептона обеспечивают практически одинаковую сохраняемость живых микробных тел в растворенной вакцине против пастереллеза птиц в интервале 0,5-2 ч и в вакцине против рожи свиней в интервале 0-4 ч, что существенно превышает сохраняемость живых микробных тел в вакцинах, разведенных физиологическим раствором.Наряду с практически одинаковой выживаемостью микробных клеток в растворителях на основе МПБ и пептона с трилоном Б последний растворитель имеет ряд преимуществ: технологичнее, дешевле, более стандартен и не требует использования при его изготовлении ценного пищевого сырья.П р и м е р 4. Для подтверждения возможности использования предлагаемого растворителя для других сухих бактерийных вакцин исследована его эффективность для живой сухой вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота (штамм 82 и 19). Вакцину растворяют в физиологическом растворе и в предлагаемом растворителе.Результаты исследований (см. табл.4) свидетельствуют об эффективности предлагаемого растворителя для сухой вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота и возможности его применения для целого ряда сухих бактерийных вакцин.П р и м е р 5. Для подтверждения стандартности состава предлагаемого растворителя исследованы 3 серии растворителя, изготовленные с трилоном Б и без него, на содержание общего и аминного азота, величину сухого остатка и буферной емкости. Результаты исследований (см. табл.5) показывают стандартность состава растворителя, что обеспечивается введением в состав растворителя трилона Б.П р и м е р 6. Безвредность растворителя для животных испытывают на цыплятах суточного и 15-суточного возраста и белых мышах массой 18-20 г. Цыплятам растворитель вводят внутримышечно и интраназально (в дозе 0,5 и 0,2 см3 соответственно), белым мышам - по 0,5 см3 растворителя подкожно в область спины. Контролем служит физиологический раствор. В течение 10-суточного наблюдения цыплята и мыши остаются клинически здоровыми, и на месте введения растворителя не наблюдается местной реакции, абсцессов и некрозов, что свидетельствует о безвредности предлагаемого растворителя.Таким образом, растворитель для сухих живых бактерийных вакцин обеспечивает хорошую выживаемость микробных клеток, является стандартным, более дешевым и безвредным.Изобретение относится к биологической промышленности и может быть использовано в ветеринарной практике. Растворитель предназначен для растворения сухих живых бактерийных вакцин (против рожи свиней, пастереллеза птиц, бруцеллеза крупного рогатого скота) перед их применением. Цель изобретения - повышение жизнеспособности микроорганизмов, стандартизации состава растворителя, упрощения технологии его изготовления. Растворитель позволяет отказаться от используемого в практике физиологического раствора - хлористого натрия -, не обеспечивающего сохраняемости необходимого для успешной вакцинации количества живых микробных тел, а также позволяет заменить мясо-пептонный бульон на пептон, трилон Б и буферный компонент. Для изготовления растворителя навески пептона в концентрации 2 - 5% и трилона в концентрации 0,2 - 0,5% растворяют в калийфосфорном буферном растворе с pH 7,2 - 7,5. Стерилизуют автоклавированием в течение 30 мин под давлением 1 атм. Новый растворитель обеспечивает близкую к 100%-ной выживаемость микроорганизмов (пастерелл, бруцелл, бактерий рожи и др.), как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии в течение 3 ч. Растворитель технологичен, стандартен и не требует использования при его изготовлении ценного пищевого сырья. 5 табл.
patents.suРастворитель для живых бактерийных вакцин
Изобретение относится к биологической промышленности и может быть использовано в ветеринарной практике. Растворитель предназначен для растворения сухих живых бактерийных вакцин (против рожи свиней, пастереллеза птиц, бруцеллеза крупного рогатого скота) перед их применением. Цель изобретения - повышение жизнеспособности микроорганизмов, стандартизации состава растворителя, упрощения технологии его изготовления. Растворитель позволяет отказаться от используемого в практике физиологического раствора - хлористого натрия -, не обеспечивающего сохраняемости необходимого для успешной вакцинации количества живых микробных тел, а также позволяет заменить мясо-пептонный бульон на пептон, трилон Б и буферный компонент. Для изготовления растворителя навески пептона в концентрации 2 - 5% и трилона в концентрации 0,2 - 0,5% растворяют в калийфосфорном буферном растворе с pH 7,2 - 7,5. Стерилизуют автоклавированием в течение 30 мин под давлением 1 атм. Новый растворитель обеспечивает близкую к 100%-ной выживаемость микроорганизмов (пастерелл, бруцелл, бактерий рожи и др.), как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии в течение 3 ч. Растворитель технологичен, стандартен и не требует использования при его изготовлении ценного пищевого сырья. 5 табл.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в ветеринарной практике для растворения сухих бактерийных вакцин, например, против рожи свиней, пастереллеза птиц и бруцеллеза крупного рогатого скота. Целью изобретения является повышение стабилизирующей эффективности растворителя, стандартизация его состава, упрощение технологии его изготовления и замена ценного пищевого сырья на непищевое. П р и м е р 1. Для изготовления растворителя пептон и трилон Б растворяют в калийфосфатном буферном растворе (0,925 г КН2РО4 и 5,4 г К2НРО на 1 л дистиллированной воды) и определяют величину рН, которая должна быть в пределах 7,2-7,5. Приготовленный растворитель стерилизуют автоклавированием, расфасовывают во флаконы, закрывают резиновыми пробками, откатывают металлическими колпачками и этикетируют. Пептон и буферный компонент создают изотоническую среду и обеспечивают близкую к 100%-ной выживаемости микробных тел (пастерелл, бруцелл, бактерий рожи и др.) как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии в течение времени, необходимого для вакцинации (1-3 ч). Введение в состав растворителя трилона Б предотвращает образование осадка фосфорнокислых солей при изготовлении и хранении растворителя за счет образования водорастворимых комплексов трилона Б - катионы металлов, образующих нерастворимые соли фосфатов, увеличивает буферную емкость растворителя. П р и м е р 2. Для оценки эффективности действия растворителя приведены результаты исследования сохраняемости живых микробных тел в вакцине против рожи свиней (штамм ВР-2), разведенной растворителем на калийфосфатном буфере с концентрацией пептона и трилона Б соответственно 1, 2, 3, 4, 5 и 6% и 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6% и выдержанной 45 мин при 20
2оС (см. табл.1). Из табл.1 видно, что при возрастании содержания в составе растворителя пептона в пределах 1-3% и трилона Б в пределах 0,1-0,3% возрастает концентрация живых бактерий рожи в разведенной вакцине и при концентрации пептона выше 3%, трилона Б выше 0,3% остается практически постоянной, поэтому концентрация пептона 3% и трилона Б 0,3% является оптимальной. П р и м е р 3. Исследована сохраняемость количества живых микробных тел в вакцинах против рожи свиней и пастереллеза птиц, растворенных в растворителе, содержащем 3% пептона, 0,3% трилона Б и КФБ. Разведенные вакцины выдерживают при 202оС в течение 0,5-1; 1,5; 2 ч. Определяют через каждые 0,5 ч количество живых микробных тел. Предлагаемый растворитель сравнивают с физиологическим раствором NaCl (ФР) и растворителем, содержащим МПБ. Результаты исследований (см. табл.2 и 3) показывают, что МПБ и растворитель на основе пептона обеспечивают практически одинаковую сохраняемость живых микробных тел в растворенной вакцине против пастереллеза птиц в интервале 0,5-2 ч и в вакцине против рожи свиней в интервале 0-4 ч, что существенно превышает сохраняемость живых микробных тел в вакцинах, разведенных физиологическим раствором. Наряду с практически одинаковой выживаемостью микробных клеток в растворителях на основе МПБ и пептона с трилоном Б последний растворитель имеет ряд преимуществ: технологичнее, дешевле, более стандартен и не требует использования при его изготовлении ценного пищевого сырья. П р и м е р 4. Для подтверждения возможности использования предлагаемого растворителя для других сухих бактерийных вакцин исследована его эффективность для живой сухой вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота (штамм 82 и 19). Вакцину растворяют в физиологическом растворе и в предлагаемом растворителе. Результаты исследований (см. табл.4) свидетельствуют об эффективности предлагаемого растворителя для сухой вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота и возможности его применения для целого ряда сухих бактерийных вакцин. П р и м е р 5. Для подтверждения стандартности состава предлагаемого растворителя исследованы 3 серии растворителя, изготовленные с трилоном Б и без него, на содержание общего и аминного азота, величину сухого остатка и буферной емкости. Результаты исследований (см. табл.5) показывают стандартность состава растворителя, что обеспечивается введением в состав растворителя трилона Б. П р и м е р 6. Безвредность растворителя для животных испытывают на цыплятах суточного и 15-суточного возраста и белых мышах массой 18-20 г. Цыплятам растворитель вводят внутримышечно и интраназально (в дозе 0,5 и 0,2 см3 соответственно), белым мышам - по 0,5 см3 растворителя подкожно в область спины. Контролем служит физиологический раствор. В течение 10-суточного наблюдения цыплята и мыши остаются клинически здоровыми, и на месте введения растворителя не наблюдается местной реакции, абсцессов и некрозов, что свидетельствует о безвредности предлагаемого растворителя. Таким образом, растворитель для сухих живых бактерийных вакцин обеспечивает хорошую выживаемость микробных клеток, является стандартным, более дешевым и безвредным.Формула изобретения РАСТВОРИТЕЛЬ ДЛЯ ЖИВЫХ БАКТЕРИЙНЫХ ВАКЦИН, содержащий стабилизатор на основе пептона и фосфатный буферный раствор, отличающийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности микроорганизмов, стандартизации состава растворителя, упрощения технологии его изготовления, стабилизатор дополнительно содержит трилон Б при следующем соотношении компонентов, мас.%: Пептон 2 - 5 Трилон Б 0,2 - 0,5 Фосфатный буферный раствор ОстальноеРИСУНКИ Рисунок 1, Рисунок 2MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе Номер и год публикации бюллетеня: 10-2002 Извещение опубликовано: 10.04.2002 www.findpatent.ru
|
