Забыли пароль?
Регистрация
О компании
Доставка
Каталог товаров  
Контакты
Задать вопрос
Как сделать заказ
Рекомендации
Партнёрам
Получить консультацию

Характер действия антибиотиков на микроорганизмы. Бактериостатическое и бактерицидное действие антибиотиков


БАКТЕРИОСТАТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ АНТИБИОТИКОВ ЭТО: Антибиотики – лекарство против жизни

Антибиотики, растворяющие клеточную мембрану. В обычных дозах препараты этой группы действуют бактериостатически, в высоких концентрациях — оказывают бактерицидное действие. По характеру действия антибиотики делятся на бактерицидные и бактериостатические. Глобальное действие антибиотиков на бактерии или другие микроорганизмы может выражаться в двух формах: бактерицидный и бактериостатический эффекты.

Бактериостатическое действие лекарственных средств — временное подавление способности микроорганизмов к размножению в организме. Бактерицидное действие характеризуется тем, что под влиянием антибиотика наступает гибель микроорганизмов. Бактерицидным действием обладают такие антибиотики, как различные пенициллины, стрептомицин, неомицип, канамицин, ванкомицин, полимиксин. При бактериостатическом действии гибель микроорганизмов не наступает, наблюдается лишь прекращение их роста и размножения.

В большинстве случаев при лечении инфекционных болезней бактериостатическое действие антибиотиков в совокупности с защитными механизмами организма обеспечивает выздоровление пациента. Применение антибиотиков в ветеринарии и животноводстве — Использование антибиотиков в ветеринарии началось сразу же после их открытия. АНТИБИОТИКИ — вырабатываемые микроорганизмами химические вещества, которые способны тормозить рост и вызывать гибель бактерий и других микробов.

Тест на чувствительности бактерий к разным антибиотикам. На поверхность чашки Петри, на которой растут бактерии, положены диски, пропитанные разными антибиотиками. Некоторые антибиотики используются в качестве цитостатических (противоопухолевых) препаратов при лечении онкологических заболеваний.

Смотреть что такое «Характер действия антибиотиков на микроорганизмы» в других словарях:

Это и был первый современный антибиотик, о котором Флеминг доложил 13 сентября 1929 года на заседании Медицинского исследовательского клуба при Лондонском университете. Огромное разнообразие антибиотиков и видов их воздействия на организм человека явилось причиной классифицирования и разделения антибиотиков на группы. Бе́та-лакта́мные антибио́тики (β-лактамные антибиотики, β-лактамы) — группа антибиотиков, которые объединяет наличие в структуре β-лактамного кольца.

Важнейшим моментом в понимании феномена антибиотиков является определение горизонта их действия

Сходство химической структуры предопределяет одинаковый механизм действия всех β-лактамов (нарушение синтеза клеточной стенки бактерий), а также перекрёстную аллергию к ним у некоторых пациентов. Пеницилли́ны — антимикробные препараты, относящиеся к классу β-лактамных антибиотиков. Це́фалоспори́ны (англ.cephalosporins) — это класс β-лактамных антибиотиков, в основе химической структуры которых лежит 7-аминоцефалоспорановая кислота (7-АЦК).

Как оказалось, первые антибиотики — цефалоспорины, имея высокую антибактериальную активность, полной устойчивостью к β-лактамазам не обладают. Будучи резистентными в отношении плазмидных лактамаз, они разрушаются хромосомными лактамазами, которые вырабатываются грамотрицательными бактериями.

Всегда ли антибиотики разрушают бактерии

Карбапенемы (англ.carbapenems) — класс β-лактамных антибиотиков, с широким спектром действий, имеющие структуру, которая обусловливает их высокую устойчивость к бета-лактамазам. Действие макролидов обусловлено нарушением синтеза белка на рибосомах микроорганизмов.

Макролиды относятся к числу наименее токсичных антибиотиков. Тетрацикли́ны (англ.tetracyclines)— группа антибиотиков, относящихся к классу поликетидов, близких по химическому строению и биологическим свойствам. Представители данного семейства характеризуются общим спектром и механизмом антимикробного действия, полной перекрёстной устойчивостью, близкими фармакологическими характеристиками.

К этой группе антибиотиков относятся тетрациклины, макролиды, аминогликозиды, а также левомицетин и линкомицин

Ами́ногликози́ды — группа антибиотиков, общим в химическом строении которых является наличие в молекуле аминосахара, соединённого гликозидной связью с аминоциклическим кольцом. По химическому строению к аминогликозидам близок также спектиномицин, аминоциклитоловый антибиотик. Основное клиническое значение аминогликозидов заключается в их активности в отношении аэробных грамотрицательных бактерий.

Обладают бактериостатическими или бактерицидными свойствами в зависимости от концентрации в организме и чувствительности микроорганизмов. Действие обусловлено подавлением в бактериальных клетках синтеза белка путём связывания 30S-субъединицы рибосомальной мембраны. Используется при инфекциях, вызванных грамположительными кокками (преимущественно в качестве препаратов второго ряда) и неспорообразующей анаэробной флорой.

Из препаратов в основном применяются полимиксин В и полимиксин М. Обладают выраженной нефро- и нейротоксичностью. Многие из этих веществ с середины двадцатого века употребляются в качестве антибактериальных препаратов. К нитрофуранам чувствительны грамположительные и грамотрицательные бактерии, а также хламидии и некоторые простейшие (трихомонады, лямблии). Полиеновый макроциклический антибиотик с противогрибковой активностью. Оказывает фунгицидное или фунгистатическое действие в зависимости от концентрации в биологических жидкостях и от чувствительности возбудителя.

В последние годы это наиболее динамично развивающаяся группа антибиотиков. Это вещество и есть природный антибиотик – химическое оружие микромира. Механизм действия (принцип работы) антибиотиков главным образом состоит в их способности угнетать рост и разрушать клетки бактерий, грибов и опухолей.

gogalonas.ru

Бактериостатическое действие: Способ определения бактериостатического и бактерицидного действия антибиотика

При бактерицидном действии антибиотика рост бактерий не возобновляется. Изобретение относится к медицинской и ветеринарной бактериологии и может быть использовано для дифференциации антибиотиков по бактерицидному бактериостатическому действию. При бактериостатическом действии гибель микроорганизмов не наступает, наблюдается лишь прекращение их роста и размножения.

Бактериостатическое действие лекарственных средств — временное подавление способности микроорганизмов к размножению в организме. Бактерицидным действием обладают такие антибиотики, как различные пенициллины, стрептомицин, неомицип, канамицин, ванкомицин, полимиксин. При устранении антибиотика из окружающей среды микроорганизмы вновь могут развиваться. В большинстве случаев при лечении инфекционных болезней бактериостатическое действие антибиотиков в совокупности с защитными механизмами организма обеспечивает выздоровление пациента.

Существуют два основных механизма действия антибиотиков:

Применение антибиотиков в ветеринарии и животноводстве — Использование антибиотиков в ветеринарии началось сразу же после их открытия. АНТИБИОТИКИ — вырабатываемые микроорганизмами химические вещества, которые способны тормозить рост и вызывать гибель бактерий и других микробов. В первом случае микроорганизмы погибают, и тогда говорят о бактерицидном действии данного консерванта, во втором — происходит глубокое торможение жизненных функций микроорганизма.

Определенное влияние на тип действия антибиотиков оказывают микроорганизм, свойства антибиотика, а также их концентрация. Однако наиболее доступным и доказательным бактерицидным типом действия является отсутствие способности клеток к росту и размножению после удаления антибиотика.

При бактериостатическом действии антибиотика на бактерии после добавления пенициллиназы появляется рост бактерий в тех лунках, где его не обнаружили после второго этапа исследования. Пример 1. Определение бактерицидного и бактериостатического действия натриевой соли бензилпенициллина на музейные культуры бактерий.

В параллельном ряду с добавленной пенициллиназой во всех лунках, в том числе при максимальной концентрации антибиотика, наблюдали рост бактерий (пожелтение и помутнение среды). Во все лунки добавлено отделяемое 6-го Т-ва. Через 6 ч обнаружили задержку роста бактерий в первых трех лунках при концентрации антибиотика. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрацию антибиотика снижают методом серийных разведений. Для проявления своего действия антибактериальные препараты в большинстве случаев должны проникнуть внутрь клетки, и главным барьером на их пути при этом > является клеточная стенка микроорганизма.

При идентификации микроорганизма необходимо использовать антибактериальное средство, имеющее наиболее узкий спектр действия. Это означает, что оно должно оказывать повреждающее действие по отношению только к микроорганизму, не влияя на макроорганизм. Селективность действия антимикробных средств основана на том, что они ингибируют те биохимические процессы, которые являются жизненно важными для микроорганизмов, но не для макроорганизмов.

Бактериостатическое действие заключается во временном подавлении роста и размножения микроорганизмов (тетра-циклины, сульфаниламиды). Клиническая эффективность средств бактериостатического действия зависит от активного участия в уничтожении микроорганизмов собственными защитными механизмами организма-хозяина.

Бактериостатические препараты не следует комбинировать с бактерицидными. Однако понятия бактерицидности и бактериостатичности не абсолютны, поскольку очень часто повышение концентрации бактериостатического препарата может дать бактерицидный эффект. 1) Бактерицидный механизм — полное подавление роста бактерий посредством действия на жизненноважные клеточные структуры микроорганизмов, следовательно, вызывают их необратимую гибель.

Возможность применения антибиотиков у беременных и кормящих

Если не выдержать полный курс лечения и рано прекратить прием бактериостатического антибиотика, симптомы заболевания вернутся. После приема антибиотик оказывается в крови, а затем в определенном органе.

В настоящее время остро стоит проблема антибиотикорезистентности микроорганизмов (устойчивость микроорганизмов к действию антибактериальных препаратов). В небольших дозах антибиотики опасны и влияют на формирование устойчивости бактерий. Молоко и молочные продукты следует принимать не ранее чем через 4 часа после приема антибиотика или совсем отказаться от них на время курса терапии.

В этом случае свидетельствуют о бактериостатическом действии консервирующего вещества. Целью изобретения является повышение надежности метода и ускорение определения с разграничением типа бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков. Бактерицидное действие приводит к гибели микроорганизма, так действуют, например, бета-лактамные антибиотики, аминогликозиды. Одним из важнейших признаков для антибиотиков является тип их действия на микроорганизмы — бактериостатический и бактерицидный (Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия.

osbafertol.ru

Характер действия антибиотиков на микроорганизмы

 Характер действия антибиотиков на микроорганизмы Характер действия антибиотиков на микроорганизмы

        По характеру действия антибиотики делятся на бактерицидные и бактериостатические. Бактерицидное действие характеризуется тем, что под влиянием антибиотика наступает гибель микроорганизмов. Достижение бактерицидного эффекта особенно важно при лечении ослабленных пациентов, а также в случаях заболевания такими тяжелыми инфекционными болезнями, как общее заражение крови (сепсис), эндокардит и др., когда организм не в состоянии самостоятельно бороться с инфекцией. Бактерицидным действием обладают такие антибиотики, как различные пенициллины, стрептомицин, неомицип, канамицин, ванкомицин, полимиксин.

        При бактериостатическом действии гибель микроорганизмов не наступает, наблюдается лишь прекращение их роста и размножения. При устранении антибиотика из окружающей среды микроорганизмы вновь могут развиваться. В большинстве случаев при лечении инфекционных болезней бактериостатическое действие антибиотиков в совокупности с защитными механизмами организма обеспечивает выздоровление пациента.

Жизнь растений: в 6-ти томах. — М.: Просвещение. Под редакцией А. Л. Тахтаджяна, главный редактор чл.-кор. АН СССР, проф. А.А. Федоров. 1974.

.

  • ХЕМОАВТОТРОФНЫЕ БАКТЕРИИ
  • Характеристика отдельных видов и групп бактерий рода Pseudomonas

Смотреть что такое "Характер действия антибиотиков на микроорганизмы" в других словарях:

  • Применение антибиотиков в ветеринарии и животноводстве —         Использование антибиотиков в ветеринарии началось сразу же после их открытия. Это объясняется целым рядом преимуществ, которыми обладают антибиотики по сравнению с другими химиотерапевтическими веществами: антимикробное действие в очень… …   Биологическая энциклопедия

  • ВЗАИМООТНОШЕНИЯ В МИРЕ МИКРООРГАНИЗМОВ И ОБРАЗОВАНИЕ БАКТЕРИЯМИ И АКТИНОМИЦЕТАМИ АНТИБИОТИКОВ —         В конкретных экологических условиях между разными группами микробов устанавливаются определенные взаимоотношения, характер которых зависит от физиологических особенностей и потребностей совместно развивающихся микробов. Кроме того,… …   Биологическая энциклопедия

  • Жёсткокрылые — Запрос «Жук» перенаправляется сюда. Cм. также другие значения. ? Жёсткокрылые Бронзовка золотистая, Cetonia aurata Научная классификация …   Википедия

  • Медицина — I Медицина Медицина система научных знаний и практической деятельности, целями которой являются укрепление и сохранение здоровья, продление жизни людей, предупреждение и лечение болезней человека. Для выполнения этих задач М. изучает строение и… …   Медицинская энциклопедия

  • АНТИБИОТИКИ — вырабатываемые микроорганизмами химические вещества, которые способны тормозить рост и вызывать гибель бактерий и других микробов. Противомикробное действие антибиотиков имеет избирательный характер: на одни организмы они действуют сильнее, на… …   Энциклопедия Кольера

  • Таваник — Действующее вещество ›› Левофлоксацин* (Levofloxacin*) Латинское название Tavanic АТХ: ›› J01MA12 Левофлоксацин Фармакологическая группа: Хинолоны/фторхинолоны Нозологическая классификация (МКБ 10) ›› A15 A19 Туберкулез ›› A41.9 Септицемия… …   Словарь медицинских препаратов

  • Защи́та от ору́жия ма́ссового пораже́ния — (ЗОМП) комплекс организационных, инженерных, медицинских и других мероприятий, направленных на предотвращение или максимально возможное ослабление поражающего и разрушающего действия ядерного, химического и биологического оружия с целью… …   Медицинская энциклопедия

  • Остеомиелит — I Остеомиелит Остеомиелит (osteomyelitis, греч. osteon кость + myelos костный мозг + itis) воспаление костного мозга, обычно распространяющееся на губчатое и компактное вещество кости и надкостницу. Классификация. По этиологическому признаку… …   Медицинская энциклопедия

  • СССР. Естественные науки —         Математика          Научные исследования в области математики начали проводиться в России с 18 в., когда членами Петербургской АН стали Л. Эйлер, Д. Бернулли и другие западноевропейские учёные. По замыслу Петра I академики иностранцы… …   Большая советская энциклопедия

  • Болезнь Лайма — Эту статью следует викифицировать. Пожалуйста, оформите её согласно правилам оформления статей. У этого термина существуют и другие значения, см. Лайма (значения) …   Википедия

dic.academic.ru

Способ определения бактериостатического и бактерицидного действия антибиотика

 

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной бактериологии и может быть использовано для дифференциации антибиотиков по бактерицидному бактериостатическому действию. Способ включает следующие операции: готовят последовательные разведения исследуемого антибиотика в питательной среде с индикатором в лунках планшеты, затем добавляют в лунки с антибиотиком (опыт) и лунки с питательной средой (контроль) исследуемый материал, содержащий бактерии. Планшету инкубируют в течение 3-6 ч и регистрируют наличие роста бактерий по помутнению и/или изменению окраски среды. При наличии роста в контроле и отсутствии роста в опытных лунках с малым разведением антибиотика в последних снижают концентрацию антибиотика и продолжают инкубирование до 11-24 ч. Затем повторно регистрируют наличие роста бактерий по тем же показателям и при его наличии определяют бактериостатическое действие, а при его отсутствии - бактерицидное действие антибиотика. Снижение концентрации антибиотика осуществляют с помощью бета-лактамазы в случае дифференциации бета-лактамных антибиотиков или методом серийных разведений для остальных классов антибиотиков. 2 з.п. ф-лы, 3 табл.

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологии и касается способа определения бактерицидного и бактериостатического действия антибиотиков.

Одним из важнейших признаков для антибиотиков является тип их действия на микроорганизмы - бактериостатический и бактерицидный (Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., "Медицина", 1982, с.15-17).

Такое деление антибиотиков в значительной мере определяет тактику их применения для лечения больных (доза, способ введения, продолжительность лечения, сочетанная антибиотикотерапия и другие показатели). Определенное влияние на тип действия антибиотиков оказывают микроорганизм, свойства антибиотика, а также их концентрация.

Для отличия типов действия антибиотиков до настоящего времени используют установление жизнеспособности клеток чаще всего посевами в жидкие или агаровые питательные среды с определением числа бактерий до и после контакта с антибиотиком (Сазыкин Ю. О. Биохимические основы действия антибиотиков на микробную клетку. М., "Наука", 1965, с.11-13). В специальных целях применяют и другие методики, например способность бактерий к синтезу белка, дыханию клеток, ферментации углеводов и другие показатели их жизнедеятельности, а также регистрируемое приборами нарушение морфологии клетки (Сидоренко С.В., Федорович В.Ю. Ускоренный метод определения минимальной подавляющей концентрации антибиотиков на планшетных спектрофотометрах со встроенным термостатом. Тезисы 11-й Российской научно-практической конференции, 7-9.12.99 г. "Внутрибольничные инфекции - проблемы эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики". М., 1999, с.220-221). Однако наиболее доступным и доказательным бактерицидным типом действия является отсутствие способности клеток к росту и размножению после удаления антибиотика.

Известно, что существуют бактериальные ферменты, вырабатываемые микроорганизмами семейства Еnterobacteriасеае, которые инактивируют беталактамные антибиотики различных классов, в том числе цефалоспорины I-IV поколений, кроме цефаломицинов. Эти ферменты получили название беталактамазы расширенного спектра действия. По субстратной специфичности выделяют пенициллиназу - фермент, разрушающий пенициллины ("Антибактериальная терапия" под ред. Страчунского Л.С. и др. М., 2000, с.ХШ). Фермент инактивирует чувствительные к нему антибиотики.

Наиболее близким по техническому решению и достигаемому положительному эффекту к предлагаемому способу определения бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков является метод серийных разведений суспензии смеси бактерий и раствора антибиотика (Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., "Медицина", 1982, с.72). Однако этот метод выполняют в пробирках и в объеме до 500 мкл. Результаты учитывают через 16-18 ч инкубации посевов при 37oС по изменению цвета и помутнению среды. При этом определяют задержку роста бактерий без дифференциации бактерицидного и бактериостатического действия антибиотика. Прототипом является способ определения чувствительности бактерий к антибиотикам с применением индикатора фенолрот в средах Хэнкса с сывороткой и гидролизатом лактальбумина, входящих в состав синтетической среды 199 для культуры тканей, что позволяет учитывать результаты через 5-6 ч по изменению цвета среды после посева стафилококков, кишечной палочки, синегнойной палочки, протея, стрептококка и других (более 12 видов) бактерий семейства Еnterobacteriасеае, что не всегда к этому времени сопровождается помутнением питательной среды (Леви М.И., Горожанкина И. А., Сагатовская Л.А. Быстрый метод определения чувствительности культур к различным антибиотикам в жидкой среде. Антибиотики, 1, 1967, с.57-60). В указанном способе-прототипе не предусмотрена возможность дифференцировать бактериостатический и бактерицидный тип действия антибиотиков.

Целью изобретения является повышение надежности метода и ускорение определения с разграничением типа бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков.

Поставленную цель достигают использованием очищенных препаратов беталактамаз для инактивации чувствительных к ним беталактамных антибиотиков и последующего беспрепятственного роста выживших бактерий в пробах. Это определяют по изменению окраски и (или) мутности среды. Ферментирующие глюкозу бактерии окисляют ее, что регистрирует индикатор в жидкой среде, изменяя цвет. При этом некоторые бактерии могут подщелачивать ее. Не ферментирующие глюкозу бактерии не меняют рН, но рост сопровождается помутнением среды.

Предлагаемый способ выполняют в три этапа. Исследование проводят в стерильных 96-луночных планшетах, предназначенных для иммуноферментного анализа однократного применения (ТУ 64-2-375-86. "Медполимер", Санкт-Петербург) или других подобных планшетах.

Первый этап - последовательное двукратное (или с другим интервалом) разведение исследуемого антибиотика в двух параллельных рядах в 8 или 12 лунках планшета в объеме 50 мкл цветной питательной среды с 0,5% глюкозы и 0,002% бромкрезолового пурпурового в качестве индикатора. Среда при рН 7,4-7,7 имеет интенсивный сиреневый цвет.

Второй этап - добавление во все лунки с антибиотиком по 50 мкл суспензии исследуемых бактерий в указанной цветной среде, содержащей 2107 микробных клеток (м. к.) 1 мл по оптическому стандарту мутности. После ручного встряхивания пластины помещают в термостат при 37oС, где инкубируют в течение времени, необходимого для появления роста бактерий в контроле (без антибиотика). Для большинства бактерий семейства Enterobacteriaceae требуется для этого 3-6 ч. При отсутствии изменения цвета в контроле пластины оставляют в термостате, продолжая наблюдение. После инкубации регистрируют результаты. Ускорение роста бактерий достигается уменьшением объема питательной среды, как это было установлено ранее (Патент на изобретение 2151187: Способ определения эффективности паровой стерилизации бактериологическим методом. Ю.Г. Сучков, М. И. Леви. 20.06.2000 г.), и необходимой концентрацией бактерий в ней (до 105 м.к.). Дальнейшее повышение концентрации не целесообразно, так как результат может искажаться за счет появления спонтанных мутантов с устойчивостью к антибиотикам, которые могут появляться с частотой 110-6-110-13 (Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., "Медицина", 1982, с.26).

Третий этап исследования. После регистрации роста бактерий добавляют в один ряд 50 мкл раствора беталактамазы в цветной среде в избыточной дозе, в 3-6 раз превышающей минимальную, для надежной нейтрализации наибольшей концентрации антибиотика, что выясняют эмпирически до проведения исследования или исходят из определения 1 ЕД беталактамазы. За 1 ЕД принимается наименьшее количество препарата фермента, способное инактивировать 60 ЕД бензилпенициллина в течение 1 ч при 37oС (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., 1978, ч. II, с. 35-36). В другой параллельный ряд добавляют 50 мкл цветной среды. Пластины вновь помещают на 3-5 или до 18-24 ч в термостат при температуре 37oС. Результаты регистрации роста бактерий после второго этапа сравнивают с ростом после добавления фермента. При бактериостатическом действии антибиотика на бактерии после добавления пенициллиназы появляется рост бактерий в тех лунках, где его не обнаружили после второго этапа исследования. При бактерицидном действии антибиотика рост бактерий не возобновляется.

Способом разграничения бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков, не входящих в группу беталактамных, является использование разведения смеси антибиотика и бактерий до таких концентраций, когда становится возможным размножение бактерий и регистрация этого размножения. В этом способе была использована способность бактерий (в присутствии подпороговых концентраций антибиотика) размножаться, что документируется ростом колоний на агаре, помутнением жидкой питательной среды или изменением ее цвета в результате утилизации глюкозы.

Способы исследованы в сравнении со способом-протопипом по критериям изменения окраски и (или) помутнению среды при плановом бактериологическом исследовании материала от гнойно-септических больных в лечебно-профилактических учреждениях Москвы. Применение в исследовании небольших объемов ингредиентов наряду с ускорением получения результатов приносит экономический эффект. Использование предлагаемого способа разграничения бактериостатического и бактерицидного эффекта действия антибиотиков основывалось на "Методических рекомендациях по ускоренному отбору эффективных антибиотиков для лечения больных госпитальными инфекциями", утвержденными МЗ РФ 10.01.2000 г., 1100/26-0-117.

Пример 1. Определение бактерицидного и бактериостатического действия натриевой соли бензилпенициллина на музейные культуры бактерий.

В экспериментальных исследованиях использовали музейные бактериальные штаммы Е. соli К-12, Stahylococcus aureus Wood, Yersinia реstis ЕV (вакцина), Yersinia рsеudotuberculosis 1985 III серовара, Васillus аnthracis СТИ (вакцина), Васillus сеrеus 96, Васillus subtilis 168, Васillus stearothermophilus ВКМ-718. Все культуры бактерий выращивали при температуре 37oС, кроме Yersinia реstis ЕV (26oС) и Васillus stearothermophilus (55oС). В качестве основы жидкой питательной среды применяли питательный бульон для культивирования микроорганизмов, сухой, НПО "Питательные среды" (г. Махачкала), в который добавляли 0,5% глюкозы и 0,002% индикатора бромтимолового синего или бромкрезолового пурпурового (цветная среда). Раствор натриевой соли бензилпенициллина 1000 мкг/мл титровали в двух параллельных рядах для каждой культуры цветной среды двукратным последовательным разведением в объеме 50 мкл. В оба ряда добавляли по 50 мкл суспензии бактерий в цветной среде из концентрации 2107 м.к. в 1 мл. Пластины с посевами после ручного встряхивания помещали в термостат при оптимальной для каждого микроорганизма температуре. В контрольных лунках находились бактерии без антибиотика.

После пожелтения среды в контрольных посевах регистрировали результаты, а затем в один ряд добавляли по 50 мкл раствора пенициллиназы с исходной концентрацией 1000 БД в 1 мл цветной среды, в другой ряд добавляли по 50 мкл той же среды без фермента. Через 11-12 ч дополнительной инкубации при оптимальных для бактерий температурах вновь регистрировали рост бактерий и сравнивали с первым результатом (табл. 1). По этим данным видно, что учет роста бактерий в испытанных средах возможен через 3-5 ч. Добавление пенициллиназы с последующим инкубированием посевов в ряде случаев приводит к появлению роста бактерий в тех лунках, где ранее цвет среды не изменился. Однако для St. аureus, Y. рsеudotuberculosis и В. сеrеus - высокочувствительных к антибиотику, эта разница не превышала двукратного значения. В то же время МЗК после добавления пенициллиназы для других бактерий возрастала более чем в 40-80 раз.

В способе последовательного двукратного разведения антибиотика с использованием автоматических пипеток со съемными наконечниками разница в одно разведение (в 2 раза) не является доказательной. Поэтому результаты, полученные в питательных средах с двумя испытанными индикаторами, следует признать идентичными и считать, что в данных условиях постановки опыта пенициллин оказывает бактерицидное действие на St. аurеus, Y. рseudotuberculosis и В. сеrеus, а для других видов при данных условиях опыта пенициллин оказывает бактериостатический тип действия.

Пример 2. Определение бактерицидного и бактериостатического действия натриевой соли бензилпенициллина на Staphylococcus аurеus.

Смешивали суспензию Staphylococcus аurеus, штамм Wood с раствором пенициллина и после экспозиции при 37oС готовили последовательные разведения смеси в цветной питательной среде, как указано в табл. 2. После 24-часового термостатирования при 37oС учитывали результаты.

Задержка роста бактерий с пенициллином происходит до разведения смеси 1: 64 тыс. при росте бактерий в разведениях с 1:128 тыс. до 1:1 млн., как и в контроле, при отсутствии роста в последующих разведениях, где и теоретически не было бактерий.

Появление роста в разведениях 1:128 тыс. - 1:1 млн. произошло за счет снижения содержания антибиотика ниже минимальной задерживающей концентрации. В параллельном ряду с добавленной пенициллиназой во всех лунках, в том числе при максимальной концентрации антибиотика, наблюдали рост бактерий (пожелтение и помутнение среды). Наличие бактерий в этих лунках подтвердили посевами из них на питательный агар.

Пример 3. Определение бактерицидного и бактериостатического действия небеталактамного антибиотика - ципрофлоксацина.

Приводятся результаты опыта с раневым отделяемым больного Т-ва. В лунках планшета антибиотик протитрован с 4-кратным интервалом, после чего высушен. Во все лунки добавлено отделяемое 6-го Т-ва. Через 6 ч обнаружили задержку роста бактерий в первых трех лунках при концентрации антибиотика. Из этих лунок сделали ряды последовательных двукратных разведений ("вертикальное титрование") в цветной среде в объеме 50 мкл. Посевы в планшете инкубировали при 37oС в течение 14 ч. Результаты приведены в табл.3. В контроле и низких концентрациях антибиотика рост бактерий обнаружили в тех же разведениях, что и в рядах, где в исходных лунках планшета была задержка размножения бактерий за счет высокой концентрации ципрофлоксацина. При снижении концентрации разведением ниже 6,2 мкг/мл обнаружили рост бактерий. Следовательно, как в примерах 1 и 2 с пенициллином, так и примере 3, но методом серийных разведений, доказали не бактерицидное, а бактериостатическое действие небеталактамного антибиотика - ципрофлоксацина.

1. Способ определения бактериостатического и бактерицидного действия антибиотика, отличающийся тем, что готовят последовательные разведения исследуемого антибиотика в питательной среде с индикатором в лунках планшеты, затем добавляют в лунки с антибиотиком (опыт) и лунки с питательной средой (контроль) исследуемый материал, содержащий бактерии, планшету инкубируют в течение 3-6 ч, затем регистрируют наличие роста бактерий по помутнению и/или изменению окраски среды и при наличии роста в контроле и отсутствии роста в опытных лунках с малым разведением антибиотика в последних снижают концентрацию антибиотика и продолжают инкубирование до 11-24 ч, после инкубирования повторно регистрируют наличие роста бактерий по тем же показателям и при его наличии определяют бактериостатическое действие, а при его отсутствии - бактерицидное действие антибиотика.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрацию антибиотика снижают добавлением бета-лактамазы.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрацию антибиотика снижают методом серийных разведений.

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3

www.findpatent.ru


Смотрите также




г.Самара, ул. Димитрова 131
[email protected]