 |
|
|
|||||||||
|
инактивированная вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц. Вакцина сся 76признаки, диагноз, иммунитет и средства профилактики, мены борьбы. | Ветеринарная служба Владимирской области
Экономический ущерб. Ущерб от ССЯ 76 связан с недополучением в среднем на курицу-несушку до 10-30 яиц, при этом от племенных кур приходится выбраковывать в среднем до 50 яиц, снесением бесскорлуповых яиц, яиц с кровяным кольцом, снижением выводимости цыплят и низкой их жизнеспособностью до двухнедельного возраста. Этиология. Болезнь вызывается ДНК- содержащим неклассифицированным вирусом семейства аденовириде- Adenoviridae. Вирус имеет икосаэдральную форму. Симметрия капсида кубическая. Диаметр вириона 75-80нм. Вирус не принадлежит ни к одному из известных серотипов аденовирусов птиц и в отличие от них агглютинирует эритроциты кур, уток и гусей. Гемагглютинин стабилен 30минут при 70°С. Некоторыми исследователями идентифицирован как аденовирус уток. Вирулентность теряет через 30 минут при 60°С, а также под воздействием трипсина, мочевины и пиридина. Штаммы вируса, выделенные в различных странах, в антигеном отношении родственны. Вирус размножается в эмбрионах и культурах клеток утиного происхождения активнее, чем в эмбрионах и культурах клеток других птиц. ЦПЭ выражен образованием внутриядерных включений, округлением клеток, деформацией клеточного монослоя. У переболевшей (и экспериментально зараженной) птицы образуются специфические антитела, которые передаются трансовариально. Эпизоотологические данные. Болеют куры всех пород, преимущественно при достижении ими наивысшей продуктивности (25-35 недель), но возможно возникновение болезни в любой период продуктивного цикла. При этом к заболеванию наиболее восприимчива племенная птица и несушки мясных линий. Вирус ССЯ-76 широко распространен среди домашних и диких уток, а также гусей, является для них апатогенным и не вызывает клинического проявления болезни. Вирус способен персистироваться в организме кур, не достигших половой зрелости. Он активизируется и провоцирует спад яйценоскости в результате стресса, вызванного началом яйцекладки. Основной путь передачи вируса, а следовательно, и распространения заболевания – трансовариальный, не исключается и горизонтальный. Вирус передается контактно через одежду и обувь обслуживающего персонала, транспорт, кормушки, поилки, предметы ухода за птицей, отмечают случаи передачи возбудителя болезни со спермой петухов, пометом. Клинические признаки. У больных птиц наблюдают отдельные случаи прострации, взъерошенности перьев, анемии, диареи, угнетения во время яйцекладки, синюшность сережек и гребня, снижение поедаемости корма. Основной характерный признак – резкое снижение яйценоскости. Птица несет яйца измененной формы, скорлупа размягчена, иногда отсутствует. У кур яичных пород белок яиц может быть водянистым и мутным, пик яйцекладки задерживается на 4-5 недель. Снижается уровень выводимости и жизнеспособности цыплят в первые дни жизни. При продолжительности болезни 4-12 недель продуктивность кур уменьшается до 30-50%. Из них в течение 2-6 недель снижается продуктивность, а в течение 2-4 недель — она восстанавливается, но до исходного уровня не доходит. При клеточном содержании продуктивность кур восстанавливается почти полностью или остается на 1-3% ниже нормативной. В процессе переболевания ССЯ-76 птица в течении 6-8 недель несет бесскорлуповые («литые яйца») или депигментированные яйца с истонченной скорлупой, с кольцевидными или полосчатыми, шероховатые образованиями на поверхности. Происходит значительное увеличение количества «мраморного» яйца, возрастает процент боя и насечки яиц. Изменение качества скорлупы и так называемое «жировое яйцо», наиболее часто встречается у несушек цветных кроссов и у бройлеров. У кур белых кроссов изменена, в основном, белковая часть яйца в виде его локального разжижения. Патологоанатомические изменения, как правило, отсутствуют или выражены слабо, в виде отека и инфильтрации тканей яйцеводов, признаков катарального энтерита. При острой форме в отдельных случаях в яичнике отмечают изменения атрофического характера, уменьшение количества и размеров фолликулов, гиперемию или кровоизлияния в соединительнотканной капсуле фолликулов, их деформацию и дегенерацию. Встречаются участки яичника с полностью дегенерировавшими фолликулами и превращенными в некротизированную массу желтовато – коричневого цвета. У отдельных больных кур возможно появление кист. Яйцевод, как правило, короче и тоньше, чем у здоровых птиц. Печень иногда увеличена в размере, имеет дряблую консистенцию и желтоватый цвет. Одновременно отмечаем увеличение желчного пузыря, переполнение его водянистой жидкостью. При проведении гистологического исследования можно выявить дегенерацию кальцифинирующих желез и их мононуклеарную инфильтрацию, лимфоидную гиперплазию в печени, селезенке и других органах. Диагноз. Ставится комплексно на основании эпизоотологических, клинических данных, патологоанатомических изменений трупов павших и вынужденно убитых птиц, результатов лабораторных исследований (выделение вируса на утиных эмбрионах, культуре клеток фибробластов утиных эмбрионов или культуре клеток ткани печени утиных или куриных эмбрионов с последующей идентификацией возбудителя в РГА, РЗГА, МФА, ИФА), постановки биопробы на курах, определение специфических антител в сыворотке крови или желтках яиц кур—несушек в РЗГА или ИФА, гистологического исследования органов репродуктивного тракта. Для вирусологических исследований используют пробы яичника с фолликулами, яйцевода, прямой кишки с содержимым, клоачные смывы, кровь с антикоагулянтом. Отбор проб патологического материала проводится в первые 3-5 дней после начала болезни и не позднее, чем через 2 часа после клинической смерти или убоя птицы. Для серологического исследования направляют сыворотку крови от птиц в возрасте: 1-120, 160-180, 220, 300 дней и от птиц вышедших из эксплуатации по возрасту, а также кур с наличием клинических признаков болезни (по 20-15 проб от каждой группы). При направлении для исследования яиц от подозреваемых в заболевании птиц целесообразно отбирать некондиционные яйца (декальцинированные, депигментированные). Дифференциальный диагноз. Исключаем инфекционный бронхит, болезнь Ньюкасла, инфекционный ларинготрахеит, респираторный микоплазмоз, другие заразные болезни и факторы незаразной этиологии. Иммунитет и средства специфической профилактики. Переболевшие куры приобретают напряженный продолжительный иммунитет. Антитела у кур выявляются на 5-7-й день, достигают максимума к 2-3 неделе после заражения. В литературных источниках нет сведений о повторном заболевании птицы. Пассивные антитела у цыплят, выведенных из яиц инфицированных кур, полностью исчезают через 2-3 недели. За рубежом для специфической профилактики болезни используют инактивированные вакцины. Вводят их однократно подкожно или внутримышечно птице в 16-20 –недельном возрасте в дозе 0,5. Иммунитет после вакцинации образуется через 15 дней. Максимальный уровень поствакцинальных антител отмечают обычно к 30-му дню. Продолжительность иммунитета 1год. В России применяются следующие вакцины:
После вакцинации птицы предотвращается фаза виремии и связанная с ней экскреция вируса, улучшается яйценоскость и качество скорлупы. Профилактика. В целях профилактики ССЯ-76 необходимо:
Меры борьбы. При установлении диагноза ССЯ-76 Постановлением Губернатора области хозяйство (ферма) или населенный пункт объявляется неблагополучным по ССЯ-76 и в нем вводятся ограничения. По условиям ограничений запрещается:
По условиям ограничений разрешается:
Для аэрозольной дезинфекции воздуха, поверхностей производственных помещений и оборудования в присутствии птиц в неблагополучных птичниках применяют иодтриэтиленгликоль, молочную кислоту, пары хлорскипидара, гипохлорит натрия или стабилизированный раствор перекиси водорода, руководствуясь действующей инструкцией по проведению аэрозольной дезинфекции птицеводческих помещений в присутствии птиц. В период неблагополучия хозяйства (фермы, отделения) по ССЯ-76 проводят тщательную механическую очистку и заключительную дезинфекцию неблагополучных птичников, инкубаториев, подсобных помещений, инвентаря и оборудования, производственной территории, средств транспорта и других объектов в порядке и в сроки предусмотренные действующей инструкцией по проведению ветеринарной дезинфеции объектов животноводства, а также дезинсекции и дератизации. Для влажной дезинфекции свободных от птиц помещений применяют горячий раствор гидроксида натрия, раствор формальдегида, осветленный раствор хлорной извести, взвесь свежегашеной извести (гидроксид кальция) путем двукратной побелки или горячий раствор кальцинированной соды. Ограничения по ССЯ-76 в хозяйстве (ферме, отделении) снимают через 2 месяца после последнего случая выявления больных птиц (снижения яичной продуктивности, литья яиц, наличия деформированных и депигментированных яиц). В бывшем неблагополучном по ССЯ-76 хозяйстве проводят вакцинацию всего восприимчивого поголовья в течение не менее 3 лет. Вопрос о прекращении иммунизации птиц решают комиссионно с участием представителей вышестоящих ветеринарных органов. vetvo.ru вакцина против "синдрома снижения яйценоскости-76" и способ вакцинации - патент РФ 2155030
1. Вакцинный препарат против вирусов "Синдрома снижения яйценоскости - 76", содержащий инактивированный вирус, отличающийся тем, что инактивированный вирус заключен в липосомальную везикулу, а препарат дополнительно содержит смесь сахара и водорастворимого полимера при следующем соотношении ингредиентов в конечной форме, мас.%: Сахар - 8 - 15 Водорастворимый полимер - 0,5 - 3 Вирус в липосомальной везикуле - Остальное 2. Вакцинный препарат по п.1, отличающийся тем, что липосомальная везикула покрыта оболочкой из смеси сахара и водорастворимого полимера в соотношении 5 - 15 : 1. 3. Вакцинный препарат по п.1 или 2, отличающийся тем, что в качестве сахара он содержит моно- или полисахарид. 4. Вакцинный препарат по любому из пп.1 - 3, отличающийся тем, что в качестве сахара он содержит сахарозу, лактозу или сорбит. 5. Вакцинный препарат по п.1 или 2, отличающийся тем, что в качестве водорастворимого полимера он содержит желатину, полиглюкин или поливинилпирролидон. 6. Способ вакцинации птиц против "синдрома снижения яйценоскости - 76" путем введения вакцины в организм птицы в возрасте 110 - 140 дней, отличающийся тем, что в качестве вакцины используют липосомальную вакцину, причем препарат вводят перорально в ходе выпаивания в дозе 512-2048 ГАЕ/05. www.freepatent.ru Вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76) инактивированная эмульгированная.
1.1. Вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76) инактивированная эмульгированная. 1.2. Вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 приготовлена из инактивированного вируса ССЯ-76 и масляного адъюванта. 1.3. По внешнему виду препарат представляет собой однородную эмульсию белого цвета. При хранении допускается отслоение масла в верхней части флакона. При встряхивании однородность эмульсии восстанавливается. 1.4. Вакцину расфасовывают по 200 см 3 в стерильные стеклянные флаконы. Допускается другая фасовка, согласованная в установленном порядке. На флакон с вакциной наклеивается этикетка с обозначением наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака, полного названия биопрепарата, объема и количества доз во флаконе, номера серии и контроля, условий хранения, даты изготовления (месяц, год), срока годности, обозначения ТУ, штрих-кода. 1.5. Флаконы с вакциной упаковывают в коробки картонные или пластиковые с наличием гнезд и перегородок, обеспечивающих неподвижность и целостность флаконов. На коробку с флаконами наклеивают этикетку, на которой указывают: полное наименование и товарный знак предприятия-изготовителя, полное название биопрепарата, номера серии и контроля, дату изготовления (число, месяц, год), срок
2 годности, количество флаконов, количество доз во флаконе, условия хранения, обозначения настоящих ТУ, штрих-код. В каждую коробку вкладывают наставление по применению вакцины. 1.6. Флаконы без этикеток, содержащие постороннюю примесь, с нарушенной укупоркой, а также остаток вакцины, неиспользованной в течение 2 час после вскрытия, утилизируют кипячением в течение 15 мин или автоклавированием при 0,11±0,02 МПа в течение 15 мин. 1.7.Срок годности вакцины 9 месяцев с даты изготовления при условии хранения (транспортировки) в сухом, темном месте при температуре от 2 до 8°С..
2.1. Механизм действия препарата основан на выработке у привитых птиц иммунитета к вирусу ССЯ-76. Напряженность иммунитета после вакцинации определяют через 28 с/т в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) или в ИФА. 2.2. Вакцина должна вызывать не менее чем у 80% вакцинированных цыплят накопление в сыворотке крови антител к вирусу ССЯ-76 в титре 5 лог2 и выше в РТГА или более двух минимальных значений в ИФА. 2.3: Продолжительность поствакцинального иммунитета составляет не менее 12 месяцев.
3.2. Вакцинации подлежит клинически здоровая птица в возрасте 90-120 сут, но не позднее, чем за один месяц до начала яйцекладки. 3.3. За одну прививную дозу принимают 0,5 см3 препарата. Вакцину против ССЯ-76 вводят однократно подкожно в среднюю треть шеи, внутримышечно в область груди или в жировую складку хвоста цыплятам в возрасте 90-120 сут, но не позднее, чем за один месяц до начала яйцекладки. За 6-9 час до применения вакцину достают из холодильной камеры и ставят в помещение с температурой 20-28°С. Запрещается нагревание вакцины в водяной бане и на приборах отопления. Вакцину используют в течение 2 час после вскрытия флакона.
3 3.4. Через 28 сут после вакцинации цыплят против ССЯ-76 проверякл напряженность иммунитета, исследуя не менее 25 проб сывороток крови по п. 2.1 Птицу ревакцинируют при напряженности иммунитета менее 80 процентов. 3.5. Вакцина не вызывает клинически выраженной реакции. В некоторых случаях на месте инъекции возможно образование небольшой припухлости, исчезающей через 2-3 недели. 3.6. Убой птицы на мясо разрешается через 40 сут после введения вакцины. При убое птицы ранее этого срока тушки подлежат тщательному осмотру, и при обнаружении на месте введения вакцины признаков воспаления или не рассосавшейся вакцины тушки выбраковывают и утилизируют. Производитель: ВНИИЖЗ. new.uralbiovet.ru Вакцина овак против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц
Использование: биотехнология, ветеринарная вирусология, специфическая профилактика, вакцина против синдрома снижения яйценоскости - 76 птиц. Сущность изобретения: вакцина ОВАК содержит инактивированный антиген из штамма вируса снижения яйценоскости - 76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 106,0-108,0 ЭИД50/0,2см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 16 - 12 лог2, солевой разбавитель-стабилизатор: фосфатно-буферный раствор с pH 7,2 - 7,4, либо раствор Хенкса либо раствор Эрла и адъювант - двуокись кремния или гидроокись алюминия. Для инактивации вируса использован димерэтиленимин, а для его нейтрализации тиосульфат натрия. Препарат применяют внутримышечно, однократно цыплятам 110 - 120-дневного возраста в объеме 0,5 см3. Применение вакцины в птицехозяйствах способствует повышению яйценоскости кур несушек (на 27,2 яйца за продуктивный период) и уменьшению количества снесенных бесскорлупных яиц (на 5,5%). 3 табл. Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается создания новой вакцины для специфической профилактики синдрома снижения яйценоскости (ССЯ-76) птиц в угрожаемых и неблагополучных хозяйствах. Известна вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц, включающая инактивированный формалином антиген из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц ВС-14 и масляный адъювант нераскрытого состава [1] Недостатком данной вакцины является невысокая иммуногенность, и стабильность. Кроме того, использование для инактивации растворов формалина не обеспечивает отсутствие в ней остаточной инфекционности. Известна также вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц, включающая инактивированный этилениминоэтилоксамидом антиген из штамма вируса снижения яйценокскости-76 птиц В8/78, солевой растворитель-стабилизатор и масляный адъювант на основе соевого масла, лецитина и сорбита [2] Недостатком данной вакцины является также недостаточно высокая иммуногенность и стабильность, более высокая себестоимость при ее получении и более высокие трудозатраты при ее использовании. Целью настоящего изобретения является увеличение иммуногенности вакцины, повышение ее стабильности, а также снижение себестоимости при ее получении и снижение трудозатрат при ее использовании. Указанная цель достигается тем, что вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц содержит в качестве инактивированного антигена из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц инактивированный димерэтиленимином антиген из штамма вируса снижения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 106,0-108,0 ЭИД50/0,2 см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 16-12 лог2, в качестве солевого разбавителя-стабилизатора: фосфатно-буферный раствор с pH 7,2-7,4, либо раствор Хенкса или раствор Эрла и в качестве адъюванта 5% взвесь двуокиси кремния или 6% суспензия гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов (в мас.): Инактивированный димерэтиленимином антиген из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93"-ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 106,0-108,0 ЭИД50/0,2см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 16-12 лог2 16,6 33,2 Фосфатно-буферный раствор с pH 7,2-7,4, либо раствор Хенкса или раствор Эрла 66,4 82,8 5-ная взвесь двуокиси кремния или 6-ная суспензия гидроокиси алюминия - 0,4 0,6 Для изготовления вакцины используют штамм вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц "Б-93". Вакцинный штамм "Б-93" выделено т больных кур и получен в результате адаптации к утиным эмбрионам. Штамм вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц "Б-93" депонирован в коллекции вирусов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, имеет регистрационный N 98. Штамму вируса против ССЯ-76 ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП присущи следующие признаки и свойства. Морфологические признаки. При электронно-скопическом исследовании штамм N 98 "Б-93" ВГНКИ представлен вирионами икосаэдрической формы, которые лишены суперкапсидной оболочки и не содержат липидов. Коэффициент седиментации 550. Не установлено наличия вирионов морфологически отличных от вируса сем. Аденовирусов. Культуральные свойства. Штамм N 98 "Б-93" ВГНКИ хорошо размножается в 10-12-дневных утиных эмбрионах, зараженных в аллантоисную полость. Инфекционная активность штамма через 120 часов при температуре 37,5oC составляет не менее 106,0 ЭИД50/0,2 см3. Штамм также культивируется в куриных эмбрионах и первичной культуре клеток утиных фибробластов, вызывая цитопатическое действие. Гемагглютинирующие свойства. Штамм N 98 "Б-93" ВГНКИ обладает выраженными гемагглютинирующими свойствами. Агглютинирует эритроциты кур и уток, вызывая образование среднезернистой реакции гемагглютинации с предельным титром 12-16 лог2. Антигенные свойства. Через 14-21 день после заражения 120-дневных кур отмечают появление вируснейтрализующих и гемагглютинирующих антител. Титр антигемагглютинирующих антител составляет 7,0 лог2 и более с последующим их возрастанием. Инфекционные свойства. К штамму N 98 "Б-93" ВГНКИ восприимчивы куры, утки и гуси при интратрахеальном, оральном, внутримышечном заражениях. начиная с 14 дня после введения вируса 120-дневным цыплятам отмечают появление депигментированных и лишенных скорлупы яиц. В течение четырех недель процент яиц с мягкой скорлупой и бесскорлупных составляет около 30% и более. Клинических признаков болезни при экспериментальном и естественном заражениях вирус не вызывает. Патологоанатомические изменения не выражены и определяются только гистологически в виде внутринуклеарных включений в клетках эпителия железистого желудка. Устойчивость штамма. Штамм N 98 "Б-93" ВГНКИ стабилен при pH в пределах 6,0-9,0. Устойчив к жирорастворителям. Инактивируется при 56oC. Пример 1. Штамм вируса ССЯ-76 "Б-93" размножают на утиных эмбрионах, зараженных в аллантоисную полость в дозе 2,0 3,0 лг ЭИД50/0,2мл. Эмбрионы инкубируют в течение 96 120 ч при 37,0 0,5oC. Через 120 ч эмбрионы охлаждают при температуре +4 +8oC в течение 24-36 ч и используют для сбора вируссодержащей экстраэмбриональной жидкости. Жидкость собирают во флаконы емкостью 200 500 см3. Из каждого флакона берут пробу по 0,8 см3 для проверки на стерильность, в объеме 0,2 см3 путем высева на питательные среды: МПА, МПБ, МППБ, под вазелиновым маслом и среду Сабуро (при наличии роста вируссодержащий материал уничтожают). После проверки на стерильность определяют инфекционную активность вируса методом титрования на 10-12 дневных утиных эмбрионах при температуре 370,5oC в течение 120 ч. Устанавливают инфекционную активность равную 106,0 ЭИД50/0,2 см3. Гемагглютинирующую активность определяют в РГА с 1,0% суспензией эритроцитов кур. Устанавливают ГА активность, равную 12 лог2. Для инактивации вируса в экстраэмбриональную вируссодержащую жидкость добавляют димерэтиленимин до конечной концентрации его в реакционной смеси 0,2% и инкубируют при температуре 370,5oC в течение 4-5 сут. Затем остаточный инактиватор нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия до конечной концентрации в реакционной смеси 0,03 М. Смесь выдерживают в течение 2 ч при температуре 20-22oC. Повторно контролируют гемагглютинирующую активность инактивированного вируса в РГА с 1% суспензией эритроцитов кур. При этом РГА-активность соответствует первоначальной и составляет 12 лог2. Проводят проверку полноты инактивации вируса на утиных эмбрионах 10 - 12-суточного возраста в течение 3 последовательных пассажей. При отсутствии специфической гибели эмбрионов и отрицательной РГА в экстраэмбриональной жидкости инактивированный вирус используют для приготовления стандартного вакцинного препарата. Для приготовления 1 л вакцины "ОВАК" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц берут 332 см3 инактивированного димерэтиленимином антигена из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93"-ДЕП к которому добавляют 664 см3 разбавителя-стабилизатора (фосфатно-буферный раствор) с pH 7,2 7,4 и перемешивают. К полученной суспензии инактивированного вируса стандартной активности добавляют 4 см3 5% взвеси двуокиси кремния и снова перемешивают до получения равномерной взвеси. После проверки полноты адсорбции в РГА вакцину расфасовывают в стерильные флаконы объемом 500 см3, плотно закрывают стерильными резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками. Пример 2. Вакцину "ОВАК" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц готовят аналогично примеру 1, используя для ее приготовления инактивированный димерэтиленимином антиген из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 107,0 ЭИД50/0,2 см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 14 лог2. Для приготовления 1 л вакцины берут 249 см3 инактивированного антигена к которому добавляют 746 см 3 разбавителя-стабилизатора раствор Хенкса и после перемешивания вносят 5 см3 5% взвеси двуокиси кремния. Пример 3. Вакцину "ОВАК" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц готовят аналогично примеру 1, используя для ее приготовления инактивированный димерэтиленимином антиген из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 108,0 ЭИД50/0,2 см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 16 лог2. Для приготовления 1 л вакцины берут 166 см3 инактивированного антигена к которому добавляют 828 см3 разбавителя-стабилизатора раствор Эрла и после перемешивания вносят 6 см3 6% суспензии гидроокиси алюминия. Готовая вакцина представляет собой бесцветную жидкость с белым легко взбивающимся осадком. Вакцина сохраняет свои биологические свойства в течение 12 мес при условии хранения в сухом, темном помещении при температуре -20oC. Пример 4. Формируют четыре группы цыплят 110-120-дневного возраста по 40 тыс. голов в каждой. Цыплят 1-3 групп прививают вакциной "ОВАК" против ССЯ-76 птиц из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП, изготовленной по примерам 1,2 и 3. Четвертую группу цыплят прививают инактивированной масляной вакциной против ССЯ-76 из штамма "В8/78", изготовленной МГП "Вирион". Вакцины вводят внутримышечно однократно в объеме 0,5 см3. Через 10, 13, 16, 23 и 29 дн и далее ежемесячно от цыплят каждой группы исследуют по 25 проб сыворотки крови на наличие поствакцинальных антител в РТГА. В течение месячного продуктивного периода у птиц 1 и 4 групп проводят учет яйценоскости. Сравнительная антигенная активность образцов вакцин представлена в табл.1. Результаты опытов свидетельствуют о более высокой антигенной активности вакцины "ОВАК" из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП. Из данных табл. 1 видно, что через 10 дн после иммунизации уровень антител в группах цыплят, привитых вакциной "Овак", достигал значения 7,2 и более лог2 с максимальным накоплением к 23 дню и сохранялся на уровне 5,23 лог2 в течение периода наблюдения (6 мес). В группе цыплят привитых вакциной против ССЯ-76 из штамма "В8-78" уровень антител через 10 дней после вакцинации был на 2,8 лог ниже. К 23 дню разница уменьшилась до 0,52 лог2 и через 6 месяцев сохранялся на уровне 5,00 лог2. Показатели яичной продуктивности подопытных групп птиц представлены в табл.2. Как видно из табл. 2, среднее количество яиц, полученных от кур, привитых вакциной против ССЯ-76 из штамма "В8/78", было на 76 тыс. штук меньше, чем в группе, иммунизированной вакциной "Овак" против ССЯ-76 из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП (по примеру 1). В процентном выражении разница показателей составляет 8,6% в пользу вакцины "Овак". Пример 5. Формируют две группы цыплят 110-120 дневного возраста. Первую группу цыплят (34 тыс. голов) прививают вакциной "Овак" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП, по примеру 2, внутримышечно, однократно в объеме 0,5 см3. Вторая группа цыплят (6 тыс. голов) непривитые, служит контролем. В период с 5 до 15 месячного возраста осуществляют ежемесячно учет яйценоскости кур несушек в обеих группах. Показатели яичной продуктивности привитой и непривитой птицы представлены в табл.3. Данные табл. 3 свидетельствуют о повышении яичной продуктивности кур, привитых вакциной "Овак" за период с 5 до 15-месячного возраста, по сравнению с непривитым поголовьем кур. Предлагаемая вакцина "ОВАК" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП по сравнению с имеющимися вакцинами обладает следующими преимуществами: имеет более высокую антигенную и иммуногенную активности; быстро формирует надежный иммунитет; полная инактивация вируса в вакцине позволяет исключить возможность распространения заболевания в птицеводческих хозяйствах при проведении профилактических прививок; используемый адъювант способствует сохранению высокой стабильности и иммуногенной активности вакцины. Применение вакцины "ОВАК" в птицехозяйствах показало достоверное увеличение яйценоскости на курицу-несушку за продуктивный период на 27, 2 яйца и уменьшение количества снесенных бесскорлупных яиц на 5,5% Использование вакцины "ОВАК" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП в ветеринарной практике позволит расширить арсенал высокоэффективных биопрепаратов против указанного заболевания птиц и снизить затраты на проведение профилакических мероприятий.Формула изобретения Вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц, включающая инактивированный антиген из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц, солевой разбавитель-стабилизатор и адъювант, отличающаяся тем, что она содержит в качестве инактивированного антигена из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц инактивированный димерэтиленимином антиген из штамма вируса синдрома синжения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 106 108 ЭИД50/0,2см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 16 12 лог2, в качестве солевого разбавителя-стабилизатора фосфатно-буферный раствор с pH 7,2 7,4, либо раствор Хенкса, или раствор Эрла, в качестве адъюванта 5%-ную взвесь двуокиси кремния или 6%-ную суспензию гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов, мас. Инактивированный димерэтиленимином антиген из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б 93" ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 106 108 ЭИД50/0,2см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 16 12 лог2 16,6 33,2 Фосфатно-буферный раствор с pH 7,2 7,4, либо раствор Хенкса, или раствор Эрла 66,4 82,8 5%-ная Взвесь двуокиси кремния или 6%-ная суспензия гидроокси алюминия - 0,4 0,6аРИСУНКИ Рисунок 1www.findpatent.ru инактивированная вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц - патент РФ 2233671 8 нм.Антигенные свойстваПо своим антигенным свойствам штамм “БИСС №113” относится к 3 серологической группе птичьих аденовирусов. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. В перекрестной реакции торможения гемагглютинации (РТГА) со специфическими сыворотками к штаммам “В 8/78”, ВГНКИ №98 “Б-93” и “БИСС №113” вируса ССЯ-76 и с гетерологичными сыворотками к парамиксовирусу-1 (ПМВ-1), вызывающему болезнь Ньюкасла, и ортомиксовирусам 5-7 серотипов штамм “БИСС №113” был идентифицирован как вирус, аналогичный эталонному “В 8/78” и известному отечественному ВГНКИ №98 “Б-93” штаммам вируса ССЯ-76, и отнесен к аденовирусам птиц 3 серологической группы.Через 14-21 сут после заражения 120-суточных кур вирусом штамма “БИСС №113” отмечают появление вируснейтрализующих и ГА-антител. ГА-титр штамма достигает 18,0-21,0 лог2. Пробы экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ) после расплодки штамма на УЭ исследовали в реакции гемагглютинации (РГА). Исследуемые пробы ЭЭЖ имели ГА-активность в разведении 1:32768-1:262144.Биотехнологические характеристикиШтамм "БИСС №113" предназначен для изготовления инактивированной вакцины против ССЯ-76 птиц. Штамм хорошо размножается в 9 - 11-суточных УЭ, зараженных в аллантоисную полость. Инфекционная активность штамма через 120 ч при температуре 37,00,5 С достигает 6,750,31 Ig ЭИД50/0,2 см3.Штамм культивируется также в КЭ и первичной культуре клеток утиных фибробластов, вызывая цитопатическое действие (ЦПД). Результаты культивирования вируса ССЯ-76 штамма "БИСС №113" представлены в табл. 1. Штамм является генетически стабильным и сохраняет свои свойства на протяжении 10 пассажей.Гемагглютинирующие свойстваШтамм "БИСС №113" обладает выраженными гемагглютинирующими свойствами. Агглютинирует эритроциты кур и уток, вызывая образование среднезернистой РГА с предельным титром 21,0 лог2.Инфекционные свойстваК штамму "БИСС №113" восприимчивы куры, утки и гуси при интратрахеальном, оральном и внутримышечном заражениях. Начиная с 14 сут после введения вируса 120-суточным цыплятам, отмечают появление депигментированных лишенных скорлупы яиц. В течение четырех недель процент яиц с мягкой скорлупой и бесскорлупных составляет около 30% и более.Вирус не вызывает клинических признаков болезни при экспериментальном и естественном заражениях. Патологоанатомические изменения не выражены и определяются только гистологически по изменениям в репродуктивных органах.Хемогенотаксономическая характеристикаСердцевина вириона содержит двухцепочечную молекулу ДНК и два внутренних белка. Масса нуклеиновой кислоты достигает 17,3% массы вириона.Основная масса белков вируса ССЯ-76 птиц сосредоточена в капсидной оболочке вириона. На долю сердцевинных белков приходится до 20% всех протеинов вируса. Сердцевинный белок "1" с молекулярной массой 46 103 г/моль легко отделяется от внутреннего нуклеотида, содержащего ДНК в комплексе с богатым аргинином сердцевинным белком "2".Гексон, основание пептона и его нить (фибер) вируса "БИСС №113" построены из полипептидов с молекулярными массами 120103, 70103, 62103 г/моль соответственно.Белковые структуры вируса штамма "БИСС №113" формируют несколько антигенов. В составе структурного вирусного антигена у них обнаружены типоспецифические, группоспецифические, подгруппоспецифические антигены нити пептона. В составе структурного вирусного антигена выявлено три основных компонента, обозначенных А, В и С. Антиген А структурно связан с гексоном, антиген В - с пептоном, антиген С - с нитями вириона (фибера). Связанный с гексоном компонент А содержит группоспецифический антиген (а) и типоспецифический антиген ( ). Антигенный фактор, связанный с пептоном, назван антигеном  , а с нитью вириона (фибер) - антигеном  .С помощью ПЦР и секвенирования амплифицированных учтков генома установлено, что аллантоисная жидкость от УЭ, зараженных штаммом “БИСС №113”, содержала геном вируса ССЯ-76.Нуклеотидная последовательность амплифицированного консервативного фрагмента гена гексона штамма “БИСС №113” имела полную гомологию с референтными штаммами вируса ССЯ-76.Физические свойстваМасса вириона - 252103 г/моль. Плавучая плотность 1,32-1,35 г/мл в градиенте CsCl. Константа седиментации зрелого вириона составляет 8-1010-13 - 9-1010-13 с.Устойчивость к внешним факторамШтамм "БИСС №113" стабилен при рН в пределах 6,0-9,0. Устойчив к жирорастворителям. Инактивируется при 56С.Дополнительные признаки и свойстваАнтигенная активность - 100%.Патогенность выражена.Вирулентность выражена.Контагиозность выражена.Онкогенность отсутствует.Свободен от контаминации бактериальной и грибковой флоры, микоплазмами и гемагглютинирующими вирусами.На основании полученных данных можно утверждать, что штамм "БИСС№113" по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным изолятом вируса ССЯ-76 птиц.Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам предлагаемого изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа как наиболее близкого по совокупности существенных признаков аналога позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вакцины, изложенных в независимом пункте формулы изобретения.Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности “новизна”.Для проверки соответствия предлагаемого решения условию патентоспособности “изобретательский уровень” проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную чть независимого пункта формулы изобретения. Результаты поиска показали, что предлагаемое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого изобретения), а также не выявлено влияния предусматриваемых существенными признаками предлагаемого изобретения преобразований для достижения технического результата.Следовательно, предлагаемая вакцина соответствует условию патентоспособности “изобретательский уровень”.Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исполнения.Пример 1Исходный вирус для получения штамма "БИСС №113" выделен из органов репродуктивной системы курицы с признаками острой формы ССЯ-76 в 1999 году в Ульяновской области. Вакцинный штамм получен во ВНИИ защиты животных путем проведения последовательных пассажей на развивающихся УЭ 9 - 11-суточного возраста. Для получения вируса первого пассажа зараженные эмбрионы инкубировали в термостате в течение 120 ч при температуре 37,00,5С. Гибель эмбрионов в течение первых 24 ч после введения вируса считали неспецифичной. Через 120 ч инкубации все эмбрионы охлаждали при температуре 4-8С в течение 12-18 ч и вскрывали. ЭЭЖ из полости эмбриона отбирали пипеткой и собирали в стеклянные флаконы. Вируссодержащую жидкость подвергали низкоскоростному центрифугированию для освобождения от крупнодисперсных чтиц. Осветленную суспензию использовали для последующего пассирования.Полученный вирус был подвергнут всестороннему контролю в соответствии с руководством МЭБ по стандартным диагностическим методам и вакцинам (1996) и на уровне 4 пассажа заложен на хранение в качестве матровой расплодки. Вирус матровой расплодки с титром инфекционной активности 6,750,31 Ig ЭИД50/0,2 см3, представленный в виде вируссодержащей ЭЭЖ, хранят при температуре минус 40С.Полученному штамму вируса ССЯ-76 птиц присвоено авторское наименование "БИСС".Пример 2Для изготовления инактивированной эмульсионной вакцины используют производственный штамм "БИСС №113" вируса ССЯ-76, получаемый из ВГНКИ. Указанный штамм используют для получения матровой расплодки. Для этого 3 ампулы лиофилизированного вируса растворяют в 30 см3 стерильного 0,9% раствора хлорида натрия, содержащего 200 Ед/см3 стрептомицина.Приготовленным вирусом заражают 150 УЭ или эмбрионов SPF-кур 9 - 11-суточного возраста путем его введения в аллантоисную полость 0,2 см3. Зараженные эмбрионы инкубируют при температуре 37,40,5С и относительной влажности 60-70% в течение 96-120 ч. Каждые 24 ч эмбрионы овоскопируют. Через 96-120 ч после заражения и инкубации эмбрионы используют для получения вируса. Перед вскрытием эмбрионы охлаждают при 4-8С в течение 12-24 ч. После этого из них через прокол в хориоаллантоисной оболочке стерильной пипеткой отбирают вируссодержащую жидкость. Собранную жидкость центрифугируют при 1000 об/мин в течение 15 мин и сливают по 50-100 см3 в стерильные флаконы емкостью по 100-200 см3. В стерильных условиях из каждого флакона отбирают по 3-5 см3 жидкости для контроля стерильности и ГА-активности. Полученная матровая расплодка должна быть стерильной и иметь ГА-активность не ниже 1:4096. Матровую расплодку хранят в замороженном виде при температуре не выше минус 40С.Матровую расплодку используют для получения производственной расплодки вируса. Для этого флаконы с матровым вирусом размораживают в водяной бане при 18-20С, содержимое флаконов очищают хлороформом и центрифугируют при 2500 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость отбирают в стерильные флаконы. Активность вируса определяют в РГА и производят корректировку объема путем разведения 0,9% раствором хлорида натрия до активности 2048-4096 ГАЕ/0,2 см3. Подготовленный таким образом матровый вирус используют для получения производственной расплодки вируса.Полученным вирусом заражают партию УЭ или эмбрионы SPF-кур в количестве, обеспечивающем изготовление планируемого объема серии вакцины. Зараженные эмбрионы инкубируют при температуре 37,00,5C и относительной влажности 60-70% в течение 96-120 ч. Через 96-120 ч после заражения эмбрионы охлаждают при 4-8С в течение 12-24 ч, производят вскрытие зараженных эмбрионов и сбор вируссодержащего материала. Полученный вируссодержащий материал подвергают первичной очистке путем центрифугирования. Центрифугирование проводят в течение 7-10 мин при 1000 об/мин и температуре 2-6С. При этом аллантоисную жидкость освобождают от осколков скорлупы, клеток и эритроцитов. Очищенную вируссодержащую ЭЭЖ сливают в стеклянные 20 дм3 стерильные бутыли. Полученную ЭЭЖ подвергают инактивации аминоэтилэтиленимином (АЭЭИ). Для этого вируссодержащую ЭЭЖ нагревают в водяной бане до 37,00,5С и рН 7,4-7,8. При перемешивании в суспензию добавляют 10% раствор АЭЭИ до конечной концентрации 0,2-0,4%. Инактивацию ведут в течение 48 ч после добавления инактиванта при 37,00,5С с периодическим перемешиванием. По окончании инактивации бутыли с полученным антигеном охлаждают при 4-8С в течение 2 сут, периодически перемешивая суспензию. Затем из каждой бутыли отбирают пробу в количестве 20 см3 для определения титра в РГА, контроля, авирулентности, стерильности и рН. Инактивированный антиген должен быть стерильным и авирулентным, иметь ГА-титр не менее 1:8192 и рН в пределах 7,4-7,8. Антиген хранят при 4-8С. Полученный антиген подвергают дополнительной очистке от балластных примесей на проточной ультрацентрифуге и фильтровальной установке с элементом ЭПРС. После этого антигенный материал соединяют с масляным адъювантом в соотношении 3:7-2:3 по весу. Перед составлением вакцины проводят корректировку объема инактивированного антигена по титру гемагглютининов. ГА-активность инактивированного антигена в РГА должна быть не меньше 1:4096. Для изготовления эмульсионной вакцины можно использовать как отечественные, так и зарубежные масляные адъюванты. В данном случае используют масляный адъювант фирмы "Сеппик" (Франция) "Монтанид ИЗА-70".Изготовление инактивированной эмульсионной вакцины проводят следующим образом. В реактор со стерильным масляным адъювантом при включенной мешалке (250-300 об/мин) подают необходимый объем инактивированного материала со скоростью 2-3 дм3/мин (стадия предэмульсии). Затем предэмульсию пропускают через гомогенизатор в течение 3 ч, получая в результате стабильную эмульсию типа "вода-масло". Учитывая термолабильность вирусного антигена, процесс эмульгирования проводят при температуре 4-8С. При получении эмульсии контролируют некоторые ее характеристики: тип эмульсии, стабильность, вязкость и другие свойства. Готовую вакцину разливают во флаконы объемом 200-450 см3, которые герметично укупоривают и закатывают алюминиевыми колпачками. Полученную вакцину контролируют по следующим показателям: по внешнему виду и цвету, наличию посторонней примеси и дефектов флаконов, стабильности эмульсии, определению относительной вязкости, плотности инактивации вакцины и ее антигенной активности.По внешнему виду препарат представляет собой однородную эмульсию белого цвета. При хранении допускается отслоение масла в верхней чти флакона. При встряхивании однородность эмульсии восстанавливается.Полученная вакцина против ССЯ-76 птиц имеет оптимальный компонентный состав:Антигенный материал 30,0-40,0АЭЭИ (10% водный раствор) 0,2-0,4Масляный адъювант До 100,0Содержание антигена в предлагаемой вакцине в указанных выше пределах является его эффективным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата.Предлагаемая вакцина предназначена для профилактической иммунизации молодняка кур против ССЯ-76. Вакцинации подлежит клинически здоровая птица в возрасте 90-120 сут, но не позднее, чем за один месяц до начала яйцекладки. Вакцину в дозе 0,5 см3 вводят птице однократно подкожно в среднюю треть шеи, внутримышечно в область груди или в жировую складку хвоста. Вакцина вызывает иммунитет к инфекции не менее чем у 80% вакцинированных цыплят, индуцируя накопление в сыворотке крови антител к вирусу ССЯ-76 в титре 5 лог2 и выше в РТГА или более двух минимальных значений в ИФА. Продолжительность поствакцинального иммунитета составляет не менее 12 месяцев.Пример 3Проведены исследования по изучению антигенной активности предлагаемой вакцины против ССЯ-76 птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:Антигенный материализ штамма “БИСС №113”,репродуцированного в УЭ9 - 11-суточного возраста,с биологической активностью6,5 Ig ЭИД 50/0,2 см3 иГА-активностью 1:4096 30,0АЭЭИ (10% водный раствор) 0,2Масляный адъювант До 100,0Были изготовлены три опытных образца препарата на основе масляного адъюванта "Монтанид ИЗА-70". Инактивированный вирус ССЯ-76 перед компановкой вакцины разводили 1:2 стерильным ФБР. В качестве контроля использовали образец серийной инактивированной вакцины против ССЯ-76, приготовленной из штамма "В 8/78". Все вакцины вводили цыплятам опытных и контрольных групп (в каждой группе по 20 голов). Результаты исследований по определению антигенной активности представлены в табл. 2.Из данных табл. 2 видно, что все три образца инактивированной вакцины против ССЯ-76, приготовленной из штамма "БИСС №113", индуцировали у привитых цыплят образование антител к вирусу ССЯ-76 в высоких титрах. Вакцина из штамма "В 8/78" вызывала у иммунизированных цыплят образование антител к вирусу ССЯ-76 в титрах аналогичного уровня.Пример 4Проведены исследования по изучению напряженности и длительности поствакцинального иммунитета, создаваемого инактивированной вакциной против ССЯ-76 птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас%:Антигенный материализ штамма “БИСС №113”,репродуцированного в УЭ9 - 11-суточного возраста,с биологической активностью6,5 Ig ЭИД 50/0,2 см3 иГА-активностью 1:4096 40,0АЭЭИ (10% водный раствор) 0,4Масляный адъювант До 100,0Начиная с 30 по 120 сут после прививки птицы полученной вакциной, с периодичностью 1 раз в месяц оценивали напряженность гуморального иммунитета в РТГА. Полученные результаты представлены в табл. 3.Согласно представленным в табл. 3 данным следует, что в интервале от 1 до 6 месяцев вакцинированная птица обеих групп имела антитела к вирусу ССЯ-76 в высоких титрах. Существенных различий в уровне поствакцинального иммунитета, вызванного вакцинами из штаммов "БИСС №113" и "В 8/78", не было установлено. Полученные данные позволили сделать заключение, что однократная вакцинация цыплят инактивированным препаратом из штамма "БИСС №113" в дозе 0,5 см3 обеспечивала формирование напряженного уровня антител к вирусу ССЯ-76 в течение всего срока исследования.Пример 5Проведена сравнительная оценка антигенной активности инактивированной вакцины на основе штамма “В 8/78” и инактивированной вакцины против ССЯ-76 птиц, изготовленной на основе штамма "БИСС №113" так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:Антигенный материализ штамма “БИСС №113”,репродуцированного в УЭ9 - 11-суточного возраста,с биологической активностью6,5 Ig ЭИД 50/0,2 см3 иГА-активностью 1:4096 30,0АЭЭИ (10% водный раствор) 0,2Масляный адъювант До 100,0Вакцины готовили на основе масляного адъюванта "Монтанид ИЗА-70" в соотношении адъюванта с антигеном 7:3 по весу. Антиген предварительно разводили ФБР в соотношении 1:3.Активность цельного антигена в РГА была следующей:штамм "БИСС" - 21 лог2;штамм "В 8/78" (образец №9) - 19 лог2;штамм "В 8/78" (образец №11) - 19 лог2;штамм "В 8/78" (образец №16) - 19 лог2;штамм "В 8/78" (образец №17) - 19 лог2.Вакцины эмульгировали в течение 3 мин при 3000 об/мин.Вакцины проверяли на антигенную активность, прививая птиц в возрасте 100 сут внутримышечно в дозе 0,5 см3, а при проверке безвредности вакцины вводили в дозе 1,5 см3 и птиц выдерживали в течение 10-12 сут. Все вакцины не вызывали никаких отклонений у птицы как в поведении, так и в местах введения препаратов. Сыворотки крови отбирали через 7, 11, 30, 60 и 90 сут после вакцинации и исследовали в РТГА, а результаты выражали в лог2. Результаты исследований приведены в табл. 4.Согласно данным табл. 4 следует, что наиболее высокой антигенной активностью обладают вакцина из штамма "БИСС №113" и образцы №9 и 17 вакцины из штамма "В 8/78".Пример 6Проведены исследования по определению динамики формирования поствакцинальных антител после применения инактивированной эмульсионной вакцины против ССЯ-76 птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:Антигенный материализ штамма “БИСС №113”,репродуцированного в УЭ9 - 11 -суточного возраста,с биологической активностью6,5 Ig ЭИД 50/0,2 см3 иГА-активностью 1:4096 30,0АЭЭИ (10% водный раствор) 0,4Масляный адъювант До 100,0Результаты исследований приведены в табл. 5.Пример 7Проведены исследования по оценке антигенной активности инактивированной вакцины против ССЯ-76 птиц, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мас.%:Антигенный материализ штамма “БИСС №113”,репродуцированного в КЭ9 - 11-суточного возраста,с биологической активностью6,5 Ig ЭИД 50/0,2 см3 иГА-активностью 1:4096 30,0АЭЭИ (10% водный раствор) 0,2Масляный адъювант До 100,0Результаты исследований приведены в табл. 6.Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:- инактивированная вакцина против ССЯ-76 птиц, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;- при использовании предлагаемой вакцины против ССЯ-76 птиц достигнут технический результат, заключающийся в повышении антигенной и ГА-активности и стабильности препарата и расширении арсенала средств специфической профилактики ССЯ-76 птиц, обеспечивающих напряженный и длительный иммунитет у привитой птицы.Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности “промышленная применимость”.Источники информации1. Сюрин В.Н. и др. Вирусные болезни животных. - М.: ВНИТИБП, 1998, с. 846-870.2. Пат. Франции №2382500, С 12 К 5/00, А 61 К 39/32, 29.09.1978 г.3. Baxendale W., Lutticken D. et al. The results of field trials conducted with an inactivated vaccine against the Egg Drop Syndrome-76 (EDS-76). Avian Pathology, 1980, v.9, №1, р. 77-91.4. Пат. РФ №1809836, С 12 N 7/00, А 61 К 39/00, 15.04.1993 г.5. Пат. РФ №2097066, А 61 К 39/12, С12 N 7/00, А 61 К 39/235, 27.11.1997 г.6. Пат. РФ №2155030, А 61 К 9/127, 39/00, 39/235, 27.08.2000 г.7. Пат. РФ №2183968, А 61 К 39/12, 26.06.2002 г. (прототип).       ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Инактивированная вакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76) птиц, содержащая антигенный материал из возбудителя инфекции, репродуцированного в чувствительной биологической системе, инактивант и масляный адъювант, отличающаяся тем, что содержит антигенный материал из штамма вируса ССЯ-76 птиц, коллекция ВГНКИ “БИСС №113-ДЕП”, в эффективном количестве.2. Инактивированная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит антигенный материал из штамма “БИСС №113-ДЕП” вируса ССЯ-76 птиц, репродуцированного в 9-11-суточных утиных эмбрионах (УЭ).3. Инактивированная вакцина по п.1 или 2, отличающаяся тем, что она содержит антигенный материал из штамма “БИСС №113 - ДЕП” вируса ССЯ-76 птиц с биологической активностью, по меньшей мере, 6,0 Ig ЭИД 50/0,2 см3.4. Инактивированная вакцина по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что она содержит антигенный материал из штамма “БИСС №113 - ДЕП” вируса ССЯ-76 птиц с гемагглютинирующей активностью, по меньшей мере, 1:4096.5. Инактивированная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит антигенный материал из штамма “БИСС №113 - ДЕП” вируса ССЯ-76 птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF - кур.6. Инактивированная вакцина по п.1 или 5, отличающаяся тем, что она содержит антигенный материал из штамма “БИСС №113 - ДЕП” вируса ССЯ-76 птиц с биологической активностью, по меньшей мере, 6,0 Ig ЭИД 50/0,2 см3.7. Инактивированная вакцина по любому из пп.1, 5 и 6, отличающаяся тем, что она содержит антигенный материал из штамма “БИСС №113 - ДЕП” вируса ССЯ-76 птиц с гемагглютинирующей активностью, по меньшей мере, 1:4096.8. Инактивированная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что из инактивантов она содержит аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ).9. Инактивированная вакцина по п.8, отличающаяся тем, что она содержит АЭЭИ в виде 10%-ного водного раствора.10. Инактивированная вакцина по любому из пп.8 и 9, отличающаяся тем, что она содержит АЭЭИ в концентрации 0,2-0,4%.11. Инактивированная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что из масляных адъювантов она содержит масляный адъювант “Монтанид ИЗА-70”.12. Инактивированная вакцина по любому из пп.1-11, отличающаяся тем, что она содержит антигенный материал из штамма “БИСС №113 - ДЕП” вируса ССЯ-76 птиц, АЭЭИ и масляный адъювант в соотношении, мас.%:Антигенный материал 30,0-40,0АЭЭИ 0,2-0,4Масляный адъювант До 100,0www.freepatent.ru вакцина овак против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц - патент РФ 2097066 0,5oC. Через 120 ч эмбрионы охлаждают при температуре +4 +8oC в течение 24-36 ч и используют для сбора вируссодержащей экстраэмбриональной жидкости. Жидкость собирают во флаконы емкостью 200 500 см3. Из каждого флакона берут пробу по 0,8 см3 для проверки на стерильность, в объеме 0,2 см3 путем высева на питательные среды: МПА, МПБ, МППБ, под вазелиновым маслом и среду Сабуро (при наличии роста вируссодержащий материал уничтожают). После проверки на стерильность определяют инфекционную активность вируса методом титрования на 10-12 дневных утиных эмбрионах при температуре 370,5oC в течение 120 ч. Устанавливают инфекционную активность равную 106,0 ЭИД50/0,2 см3. Гемагглютинирующую активность определяют в РГА с 1,0% суспензией эритроцитов кур. Устанавливают ГА активность, равную 12 лог2. Для инактивации вируса в экстраэмбриональную вируссодержащую жидкость добавляют димерэтиленимин до конечной концентрации его в реакционной смеси 0,2% и инкубируют при температуре 370,5oC в течение 4-5 сут. Затем остаточный инактиватор нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия до конечной концентрации в реакционной смеси 0,03 М. Смесь выдерживают в течение 2 ч при температуре 20-22oC. Повторно контролируют гемагглютинирующую активность инактивированного вируса в РГА с 1% суспензией эритроцитов кур. При этом РГА-активность соответствует первоначальной и составляет 12 лог2. Проводят проверку полноты инактивации вируса на утиных эмбрионах 10 - 12-суточного возраста в течение 3 последовательных пассажей. При отсутствии специфической гибели эмбрионов и отрицательной РГА в экстраэмбриональной жидкости инактивированный вирус используют для приготовления стандартного вакцинного препарата. Для приготовления 1 л вакцины "ОВАК" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц берут 332 см3 инактивированного димерэтиленимином антигена из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93"-ДЕП к которому добавляют 664 см3 разбавителя-стабилизатора (фосфатно-буферный раствор) с pH 7,2 7,4 и перемешивают. К полученной суспензии инактивированного вируса стандартной активности добавляют 4 см3 5% взвеси двуокиси кремния и снова перемешивают до получения равномерной взвеси. После проверки полноты адсорбции в РГА вакцину расфасовывают в стерильные флаконы объемом 500 см3, плотно закрывают стерильными резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками. Пример 2. Вакцину "ОВАК" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц готовят аналогично примеру 1, используя для ее приготовления инактивированный димерэтиленимином антиген из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 107,0 ЭИД50/0,2 см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 14 лог2. Для приготовления 1 л вакцины берут 249 см3 инактивированного антигена к которому добавляют 746 см 3 разбавителя-стабилизатора раствор Хенкса и после перемешивания вносят 5 см3 5% взвеси двуокиси кремния. Пример 3. Вакцину "ОВАК" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц готовят аналогично примеру 1, используя для ее приготовления инактивированный димерэтиленимином антиген из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 108,0 ЭИД50/0,2 см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 16 лог2. Для приготовления 1 л вакцины берут 166 см3 инактивированного антигена к которому добавляют 828 см3 разбавителя-стабилизатора раствор Эрла и после перемешивания вносят 6 см3 6% суспензии гидроокиси алюминия. Готовая вакцина представляет собой бесцветную жидкость с белым легко взбивающимся осадком. Вакцина сохраняет свои биологические свойства в течение 12 мес при условии хранения в сухом, темном помещении при температуре -20oC. Пример 4. Формируют четыре группы цыплят 110-120-дневного возраста по 40 тыс. голов в каждой. Цыплят 1-3 групп прививают вакциной "ОВАК" против ССЯ-76 птиц из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП, изготовленной по примерам 1,2 и 3. Четвертую группу цыплят прививают инактивированной масляной вакциной против ССЯ-76 из штамма "В8/78", изготовленной МГП "Вирион". Вакцины вводят внутримышечно однократно в объеме 0,5 см3. Через 10, 13, 16, 23 и 29 дн и далее ежемесячно от цыплят каждой группы исследуют по 25 проб сыворотки крови на наличие поствакцинальных антител в РТГА. В течение месячного продуктивного периода у птиц 1 и 4 групп проводят учет яйценоскости. Сравнительная антигенная активность образцов вакцин представлена в табл.1. Результаты опытов свидетельствуют о более высокой антигенной активности вакцины "ОВАК" из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП. Из данных табл. 1 видно, что через 10 дн после иммунизации уровень антител в группах цыплят, привитых вакциной "Овак", достигал значения 7,2 и более лог2 с максимальным накоплением к 23 дню и сохранялся на уровне 5,23 лог2 в течение периода наблюдения (6 мес). В группе цыплят привитых вакциной против ССЯ-76 из штамма "В8-78" уровень антител через 10 дней после вакцинации был на 2,8 лог ниже. К 23 дню разница уменьшилась до 0,52 лог2 и через 6 месяцев сохранялся на уровне 5,00 лог2. Показатели яичной продуктивности подопытных групп птиц представлены в табл.2. Как видно из табл. 2, среднее количество яиц, полученных от кур, привитых вакциной против ССЯ-76 из штамма "В8/78", было на 76 тыс. штук меньше, чем в группе, иммунизированной вакциной "Овак" против ССЯ-76 из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП (по примеру 1). В процентном выражении разница показателей составляет 8,6% в пользу вакцины "Овак". Пример 5. Формируют две группы цыплят 110-120 дневного возраста. Первую группу цыплят (34 тыс. голов) прививают вакциной "Овак" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП, по примеру 2, внутримышечно, однократно в объеме 0,5 см3. Вторая группа цыплят (6 тыс. голов) непривитые, служит контролем. В период с 5 до 15 месячного возраста осуществляют ежемесячно учет яйценоскости кур несушек в обеих группах. Показатели яичной продуктивности привитой и непривитой птицы представлены в табл.3. Данные табл. 3 свидетельствуют о повышении яичной продуктивности кур, привитых вакциной "Овак" за период с 5 до 15-месячного возраста, по сравнению с непривитым поголовьем кур. Предлагаемая вакцина "ОВАК" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП по сравнению с имеющимися вакцинами обладает следующими преимуществами: имеет более высокую антигенную и иммуногенную активности; быстро формирует надежный иммунитет; полная инактивация вируса в вакцине позволяет исключить возможность распространения заболевания в птицеводческих хозяйствах при проведении профилактических прививок; используемый адъювант способствует сохранению высокой стабильности и иммуногенной активности вакцины. Применение вакцины "ОВАК" в птицехозяйствах показало достоверное увеличение яйценоскости на курицу-несушку за продуктивный период на 27, 2 яйца и уменьшение количества снесенных бесскорлупных яиц на 5,5% Использование вакцины "ОВАК" против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц из штамма ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП в ветеринарной практике позволит расширить арсенал высокоэффективных биопрепаратов против указанного заболевания птиц и снизить затраты на проведение профилакических мероприятий. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯВакцина против синдрома снижения яйценоскости-76 птиц, включающая инактивированный антиген из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц, солевой разбавитель-стабилизатор и адъювант, отличающаяся тем, что она содержит в качестве инактивированного антигена из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц инактивированный димерэтиленимином антиген из штамма вируса синдрома синжения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б-93" ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 106 108 ЭИД50/0,2см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 16 12 лог2, в качестве солевого разбавителя-стабилизатора фосфатно-буферный раствор с pH 7,2 7,4, либо раствор Хенкса, или раствор Эрла, в качестве адъюванта 5%-ную взвесь двуокиси кремния или 6%-ную суспензию гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов, мас. Инактивированный димерэтиленимином антиген из штамма вируса синдрома снижения яйценоскости-76 птиц ВГНКИ N 98 "Б 93" ДЕП с титром инфекционной активности до инактивации 106 108 ЭИД50/0,2см3 и с активностью в РГА до и после инактивации 16 12 лог2 16,6 33,2 Фосфатно-буферный раствор с pH 7,2 7,4, либо раствор Хенкса, или раствор Эрла 66,4 82,8 5%-ная Взвесь двуокиси кремния или 6%-ная суспензия гидроокси алюминия - 0,4 0,6аwww.freepatent.ru |
Синдром снижения яйценоскости- 76 (Egg drop syndrome – 76, литье яиц, аденовирусная болезнь птиц) — это вирусная болезнь кур-несушек, сопровождающаяся резким снижением яичной продуктивности, изменением формы, размягчением или отсутствием скорлупы и ухудшением качества инкубационных яиц.
 г.Самара, ул. Димитрова 131 [email protected] |
 |