Забыли пароль?
Регистрация

О компании
Доставка
Каталог товаров
Контакты

Задать вопрос
Как сделать заказ
Рекомендации
Партнёрам

Получить консультацию

ФС.3.3.1.0021.15 Вакцина чумная живая, таблетки для рассасывания. Вакцина чумная живая ev

17. Лечение и профилактика

Для лечения применяют стрептомицин и другие антибиотики. Формирующийся постинфекционный иммунитет, в основном, гуморальный, напряженный, длительный (пожизненный).

При неспецифической профилактике решающую роль играют мероприятия, исключающие завоз инфекции из других стран и предупреждающие возникновение заболевания на территории природных очагов. Существуют международные медико-санитарные правила по контролю за распространением инфекции. В очагах следят за составом и численностью грызунов, исследуют их экзопаразитов на инфицированность чумной палочкой. При выявлении эпизоотий проводится дератизация, дезинфекция.

УБИТЫЕ ЦЕЛЬНОКЛЕТОЧНЫЕ ВАКЦИНЫ. Вакцинопрофилактика чумы насчитывает более 100 лет. Первые вакцины были приготовлены из убитых различными способами бактерий чумы в конце XIX — начале XX в. Наиболее широкое распространение, особенно в Индии, получила инактивированная нагреванием и консервированная фенолом вакцина Хавкина. Она способствовала снижению заболеваемости и смертности от чумы при испытаниях в очагах эпидемий. На основании многолетнего опыта массовых прививок убитыми корпускулярными вакцинами в Манчжурии, на Яве и Мадагаскаре исследователи пришли к заключению, что люди приобретают относительный иммунитет к чуме, о чем свидетельствовали случаи заболевания среди привитых, хотя и реже, чем у невакцинированных пациентов. Опасаясь реверсии вирулентности живой противочумной вакцины EV, превосходящей по эпидемиологической эффективности убитые вакцины, и ссылаясь на ее высокую реактогенность, специалисты в США разработали противочумную вакцину USP, состоящую из убитых формальдегидом микробов вирулентного штамма Y. pestis 195Р. Эта вакцина была лицензирована и выпускалась с 1946 по 1998 г. Аналогичную USP противочумную вакцину из вышеназванного штамма производят в Австралии; она лицензирована для клинического применения только внутри страны. Вакцину вводят двукратно с интервалом 1-4 нед и затем осуществляют бустерную прививку через 6 мес. Жидкая противочумная инактивированная вакцина I.P., представляющая собой усовершенствованную вакцину Хавкина, производится в Индии. ЖИВЫЕ АТТЕНУИРОВАННЫЕ ВАКЦИНЫ. Массовое применение живых вакцин в 1920-30-е гг. в эндемичных по чуме очагах дало убедительные доказательства их безопасности и эффективности по сравнению с убитыми противочумными вакцинами. При этом живая противочумная вакцина в зависимости от условий применения и инфицирующей дозы в определенной степени защищала от легочной формы чумы. За прошедшие десятилетия живой противочумной вакциной были привиты миллионы людей без каких-либо серьезных осложнений. Из множества предложенных для применения чумных аттенуированных вакцинных штаммов наибольшим преимуществом обладал штамм Y. pestis EV, полученный французскими учеными Жираром и Робиком в результате ежемесячных пересевов на питательном агаре при температуре 18-20 °С в течение 5 лет. В 1936 г. вакцинный штамм EV был передан Жираром из Пастеровского института в г. Тананариве (о. Мадагаскар) советским ученым. С 1942 г. в СССР были организованы массовые прививки чумной живой вакциной ЕВ. В настоящее время коммерческую (лицензированную) противочумную живую сухую вакцину из штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ для чрескожного и аэрозольного применения производят в РФ в Ставропольском противочумном институте, а в 48-м ЦНИИ МО РФ (г. Киров) выпускается препарат и для при-менения внутрь. Аналогичную вакцину (кроме таблеток) производят в бывшем Алма-Атинском противочумном институте. Следует отметить, что коммерческую противочумную живую вакцину выпускают также в Индонезии из другого аттенуированного штамма Y. pestis — Харбин. В соответствии с современными достижениями биотехнологии, микробиологии, биохимии в РФ производство противочумной живой сухой вакцины на всех этапах технологического процесса, начиная от приготовления посевного материала и заканчивая лиофильной сушкой препарата и фасовкой готовой продукции, постоянно совершенствуется. Препарат представляет собой лиофилизированную живую культуру вакцинного штамма чумного микроба ЕВ линии НИИЭГ со стабилизатором. Вакцинацию проводят однократно подкожным, накожным, внутрикожным или ингаляционным способом. Для формирования иммунитета против легочной чумы предпочтительнее инга-ляционный способ введения вакцины. При чрескожной иммунизации чувствительных к чуме животных вакцинным штаммом ЕВ альвеолярные макрофаги, в отличие от перитонеальных, претерпевают изменения, не затрагивающие их бак-терицидную активность и не сопровождающиеся перераспределением их субпопу-ляций. В то же время аэрогенная иммунизация вызывает более интенсивную по сравнению с перитонеальными клетками активацию альвеолярных макрофагов, вследствие чего происходит перераспределение субпопуляций и перестраивается характер фагоцитоза — от незавершенного к завершенному. СУБЪЕДИНИЧНЫЕ (ХИМИЧЕСКИЕ) ВАКЦИНЫ. К препаратам I поколения чумных вакцин относятся убитые корпускулярные и живые аттенуированные вакцины; II поколение представлено химическими (субъединичными) вакцинами на основе протективных антигенов. В настоящее время в связи с прекращением производства в 1998 г. в США противочумной вакцины USP интенсивно проводятся исследования по созданию химической вакцины, в состав которой входят протективные антигены Y. pestis. Наиболее эффективной считают химическую противочумную вакцину, содержащую капсульный FI- и V-антиген, которая в экспериментах на лабораторных животных, в том числе на приматах, защищает их от бубонной и легочной чумы, вызванной как F, так и F-штаммами Y. pestis (в отличие от вакцины USP, обладающей защитным эффектом, в основном против чрескожного заражения), причем протективной активностью обладает в отдельности как капсульный FI-антиген, так и (в большей степени) V-антиген, в том числе V-антиген Y. pseudotuberculosis. Проведенные недавно клинические испытания на 145 добровольцах субъединич- ной чумной вакцины (rFI+rV) показали ее безопасность и иммуногенность. В РФ разрабатывают чумную химическую вакцину, состоящую из капсульного антигена FI Y. pestis и основного соматического антигена Y. pseudotuberculosis. Ее назначение — ревакцинация людей, изначально вакцинированных живой противочумной вакциной, которая создает полноценный грунд-иммунитет Отметили высокую протективную активность на беспородных мышах антигенного препарата субклеточных фракций Y. pestis и подтвердили активность субклеточных фракций в смеси с суммарной ДНК Y. pestis, обладающей ярко выраженной способностью активировать как неспецифическую, так и специфическую резистентность организма у человека и животных.

Для специфической профилактики используются живая аттенуированная вакцина из штамма EV, а также химическая вакцина. Вакцинация – по эпидпоказаниям, однократная, ревакцинация – через год. Длительность поствакцинального иммунитета –1 год

studfiles.net

РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИИ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКО-ДОЗ В ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ УПАКОВКЕ

скачать

Пароль для архива: AoS2TCi5ivcb5P5

ЕФРЕМЕНКО Анна Александровна

РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИИ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКО-ДОЗ В ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ УПАКОВКЕ

(АМПУЛЕ)

-биотехнология микробиология

Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, Д.А. Будыка

Ставрополь, 2005

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр.

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.......................................... 5

ВВЕДЕНИЕ....................................................................................................... 6

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.............................................................. 13

1.1 Современное состояние и перспективы совершенствования 13эффективности чумных вакцин...................................................................................

1.2 Оптимизация этапов биотехнологии производства вакцинычумной живой сухой..................................................................................................... 21

1.2.1 Некоторые вопросы управляемого культивированиябиомассы вакцинного штамма ЕВ........................................................................... 21

1.2.2 Пути совершенствования биологических показателей вак-цины чумной живой на этапах сведения, разлива илиофилизации бактериальной суспензии................................................................ 26

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ............................................... 33

2.1 Материалы........................................................................................................ 33

2.2 Методы исследования................................................................................... 37

Глава 3. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ

КАЧЕСТВА ПРЕПАРАТА ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙЖИВОЙ СУХОЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ОБЩЕЙКОНЦЕНТРАЦИИ МИКРОБОВ И ОБЪЕМАВАКЦИННОЙ СУСПЕНЗИИ В АМПУЛЕ............................................................ 44

Глава 4. БИОТЕХНОЛОГИЯ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ

СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ

ЧЕЛОВЕКО-ДОЗ В АМПУЛЕ........................................................................ 54

4.1 Приготовление посевной культуры, засев маточной культурыв АКМ-Ш, условия культивирования вакцинного штаммачумного микроба............................................................................................................. 54

4.2 Смыв бактериальной массы с поверхности агара споследующим приготовлением необходимой концентрациимикробных клеток, разлив, лиофилизация вакцины.............................................. 58

4.3 Некоторые вопросы стабилизации вакцинной суспензии впроизводстве вакцины ЕВ в зависимости от условийлиофилизации.................................................................................................................. 61

4.4 Оптимизация параметров вакцинной суспензии вбиотехнологии производства вакцины чумной живой сухойглубинным методом культивирования....................................................................... 66

Глава 5. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПАРАМЕТРОВ И ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ

ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКО-ДОЗ В

АМПУЛЕ И КОММЕРЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА..................................... 72

5.1 Сравнительная характеристика образцов вакцины чумнойживой сухой в зависимости от параметров вакциннойсуспензии по критериям жизнеспособности,термостабильности, иммуногенности........................................................................ 72

5.2 Изучение реактогенности различных образцов вакцинычумной живой сухой........................................................................................................ 77

5.3 Оценка экономической эффективности вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человеко-доз в ампуле 80

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.................................................................................................. 82

ВЫВОДЫ............................................................................................................. 91

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ

ЛИТЕРАТУРЫ............................................................................... 93

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

Ф1 -фракция 1 чумного микроба DCL -абсолютно смертельная доза для экспериментальных

зараженных животных LD50 -доза микроба, вызывающая гибель 50% экспериментально зараженных животных V -антиген чумного микроба ОСА -основной соматический антиген ЛПС -липополисахарид АКМ-Ш -аппарат культивирования микробов Шестеренко

ГИСК -государственный институт стандартизации и контроля им. Л.А.Тарасевича ЕД50-иммунизирующая доза, защищающая 50% зараженных животных ж.м.к. -живые микробные клетки

КОЕ -колониеобразующие единицы ЛБТК -лаборатория биолого-технологического контроля min -минимальное значение max -максимальное значение млрд/мл -миллиард/миллилитр

НД -нормативная документация об/мин -оборотов в минуту ОСО -отраслевой стандартный образец

рН -логарифм концентрации водородных ионов тыс. -тысяч

ФС и РП -фармакопейная статья и регламент производства

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Многолетний опыт использования вакцинации как средства специфической профилактики особо опасных инфекций свидетельствует о сохранении ее весомой роли (Исупов И.В., Бугоркова С.А., Кутырев В.В., 2004). В практике проведения противоэпидемической работы в нашей стране широко применяют живые вакцины. Один из таких препаратов представляет собой вакцину из штамма ЕВ чумного микроба. Совершенствование специфической профилактики чумы является одной из актуальных задач обеспечения эпидемического благополучия. (А.И. Коротяев, С.А. Бабичев, 2002). Эпидемический потенциал чумной инфекции, оставаясь в настоящее время довольно напряженным, обусловлен существованием в нашей стране и на сопредельных территориях очагов чумы с постоянно протекающими в них эпизоотиями (Сулейманов Б.М., 1995; Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., 2004). Исследования отечественных ученых показали, что наиболее эффективным препаратом противоэпидемического значения является вакцина чумная живая из штамма EV (Борисов Л.Б., 2002).

Наиболее важным вопросом, возникающим при приготовлении живых вакцин, является необходимость сохранения всех свойств микробов в течение длительного времени, то есть стабилизация качества препарата. Тактика совершенствования чумной вакцины осуществляется в направлении разработки и внедрения в производство дополнительных условий стабилизации числа живых микробных клеток в прививочной дозе коммерческой вакцины.

Одним из существенных и принципиально нерешенных вопросов остается значительное снижение количества живых микробных клеток в вакцинирующей дозе, особенно к концу срока годности препарата, что само по себе является свойством закономерным, поскольку, согласно большому литературному материалу и многолетнему опыту изучения свойств чумных вакцин, метод лиофильного высушивания не способен обеспечить полной и длительной стабилизации свойств биообъектов, в том числе и чумной вакцины.

Из факторов, влияющих на выживаемость микроорганизмов в процессе высушивания и дальнейшего хранения, наиболее важную роль играет состав защитной среды и окружающая температура. В настоящее время среды высушивания достаточно хорошо изучены, определен необходимый состав ингредиентов, включающий кристаллоидные, коллоидные вещества и антиокислители, но выбор их осуществляется в основном эмпирически, без достаточного учета современных знаний механизма защиты бактериальных клеток на различных этапах лиофилизации и хранения. Несмотря на то, что основные этапы производства коммерческого препарата строго регламентированы, некоторые количественные параметры вакцины колеблются в значительных пределах. Например, общее число микробных клеток в 1 мл вакцинной суспензии согласно регламентирующей документации составляет от 50 до 100 млрд.

Важным моментом биотехнологии производства чумной вакцины является оптимизация процентного содержания компонентов на единицу взвешенных в среде микробных клеток и отработка режимов лиофилизации, которые позволили бы достигать низкой потери массы при высушивании.

В контексте сказанного следует обратить внимание на разработку биотехнологии изготовления чумной вакцины со сниженным числом человеко-доз в ампуле. Указанная форма является удобной для проведения иммунизации сравнительно небольших по численности коллективов, когда ресуспендированный препарат не может длительно храниться и должен быть сразу же использован. Изменение параметров указанной вакцины касается не только густоты вакцинной суспензии, что отражается на количественном соотношении микробных клеток и стабилизатора, но и уменьшенного объема вакцины в ампуле.

Цель исследования:

разработка биотехнологии вакцины чумной живой сухой со сниженным содержанием человеко-доз в производственной упаковке, соответствующей качественным требованиям регламента производства для чумной вакцины (№1542-04) и имеющей экономический эффект при одновременной иммунизации небольших групп людей.

Основные задачи исследования:

1. Экспериментально обосновать оптимальное количество человеко-доз в ампуле с коммерческим препаратом с минимальным показателем поврежденных микробных клеток в нем в процессе хранения.

2. Стабилизировать показатели жизнеспособности и термостабильности бактерий в препарате вакцины чумной живой сухой за счет более оптимального соотношения действующих компонентов стабилизатора на единицу взвешенных в нем живых микробных клеток.

3. Научно обосновать достижение в условиях регламентированного режима лиофилизации состояния более глубокого анабиоза микробных клеток, характеризующегося показателем потери в массе при высушивании,не превышающем 1,5%.

4. Определить в эксперименте качественные преимущества вакцины чумной живой сухой с концентрацией микробных клеток в суспензии 1-1010 - 4-1010, разлитой в объеме 1 мл в ампуле, перед коммерческим препаратом.

5. Разработать и внедрить в производство вакцины чумной живой сухой на этапе сведения и разлива методологию получения препарата с меньшим числом подкожных (внутрикожных) человеко-доз в ампуле (20-50), отвечающей качественным требованиям нормативной документации.

Научная новизна работы.

Экспериментально обосновано, что вакцина со сниженной концентрацией микробов в ампуле вследствие более сбалансированного соотношения микробных клеток и защитной среды, обладает новыми качественными характеристиками, превосходящими стандартные коммерческие образцы (жизнеспособность, термостабильность).

Показано, что в условиях регламентированного режима лиофилизации повышается эффективность стабилизации свойств микробных клеток у препарата с меньшей концентрацией вакцинной суспензии и снижением ее объема в ампуле. Критерием более глубокого анабиоза рекомендован показатель потери в массе при высушивании, не превышающий 1,5%. При индивидуализации режима высушивания для данного препарата длительность сушки сокращается с 28 до 18 часов.

Впервые оптимизировано количество человеко-доз в ампуле с коммерческим препаратом, обладающим преимуществом в области практического применения, заключающемся в удобстве при иммунизации небольших коллективов (от 20 до 50 человек). Препарат наиболее эффективен при использовании в регионах с жарким климатом и специфическими условиями вакцинации, например, в немногочисленных, расположенных на значительном расстоянии друг от друга точках: стойбищах скотоводов, охотников и т. д., а также в относительно ограниченных коллективах: лабораториях, работающих с возбудителем чумы, командах судов, осуществляющих заграничное плавание, и др.

Впервые отработана и внедрена в биотехнологию производства вакцины чумной живой сухой и соответственно в нормативную документацию концентрация микробных клеток в вакцинной суспензии (1-4) • 1010 в объеме 1 мл в ампуле.

Теоретическая и практическая значимость диссертации.

Разработана биотехнология вакцины чумной живой сухой со сниженным содержанием человеко-доз в производственной упаковке, соответствующей требованиям нормативной документации. Проведенные исследования позволили дополнительно стандартизировать коммерческий препарат вакцины чумной живой сухой, предназначенной для проведения иммунизации в немногочисленных коллективах (20-50 человек), и обосновать экономический эффект ее использования.

Методология приготовления вакцины с меньшим количеством человеко-доз оптимизирована также к глубинному методу получения биомассы чумных микробов EV, в том числе на иммобилизованных магнитоуправляемых носителях.

Разработаны условия стабилизации вакцины с густотой вакцинной суспензии (1-4) • 1010 м.к. в объеме 1 мл в ампуле с регламентированным режимом лиофилизации, предполагающим возможность сокращения общего времени отторжения влаги в среднем на 10 часов.

Живая чумная вакцина, полученная по новой схеме, прошла контроль в лаборатории препаратов против чумы и других особо опасных инфекций ГИСК им. Л. А. Тарасевича, в соответствии с этим внесены изменения в нормативную документацию.

Практическая ценность работы подтверждена следующими документами:

Изменениями №1 к регламенту производства №1542-04 дополнительно предусмотрен выпуск вакцины с густотой вакцинной суспензии (1-4) • 1010 м. к. в объеме 1 мл в ампуле.

Разработана и находится на утверждении в Фармакологическом Комитете РФ Фармакопейная статья предприятия (ФСП) «Вакцина чумная живая сухая».

Утверждены директором Ставропольского НИПЧИ «Методические рекомендации по глубинному культивированию вакцинного штамма чумного микроба с использованием магнитоуправляемых иммобилизованных систем», одобренные Ученым Советом института 29.03.2004 г. (Протокол №3).

Диссертационная работа выполнена в рамках государственной темы НИР № ГР 01.2.00402924 «Стабилизация показателей живых микробных клеток в чумной вакцине за счет оптимизации некоторых количественных параметров на этапе приготовления коммерческого препарата».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Новые условия стабилизации числа живых чумных микробов в прививочной дозе вакцины ЕВ в условиях производства и хранения на этапах сведения, розлива и лиофилизации, что является приоритетом в вопросах совершенствования живых вакцинных препаратов против чумы.

2. Биотехнология производства вакцины чумной живой сухой, использующая более рациональное соотношение «микробная клетка-среда высушивания» при выпуске вакцины со сниженным числом доз в ампуле, обеспечивает повышение качества препарата, позволяет получить экономический эффект при вакцинации ограниченного контингента людей.

3. Разработанная схема лиофилизации живой чумной вакцины с параметрами (1-4) • 1010 м.к. в объеме 1 мл обеспечивает глубокий анабиоз микроорганизмов с показателем потери в массе при высушивании, не превышающем 1,5%, при снижении времени лиофилизации до 18 часов.

4. Полученный по разработанной биотехнологии препарат соответствует требованиям, предъявляемым к вакцине чумной живой сухой, и предназначен для планового практического применения, дополняя арсенал профилактических препаратов против чумы, используемых для массовых иммунизаций в особых условиях.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на научных конференциях СтавНИПЧИ 2003, 2004, 2005 гг, научно-практической конференции «Актуальные проблемы эпиднадзора за природно-очаговыми и особо опасными инфекциями в регионе Северного Кавказа» (Ставрополь, 2005), на заседании Ставропольского регионального отделения общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, 2005 г.; на VI Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ «Санитарная охрана территорий государств участников содружества независимых государств: проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях» (Волгоград, 2005).

Публикации.

Основное содержание диссертации отражено в 9 опубликованных научных работах (депонирована - 1, в научных сборниках - 8).

Структура и объём работы.

Диссертация изложена на 117 страницах и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 221 источник, в том числе 178 работ отечественных и 43 - зарубежных авторов. Материалы исследований иллюстрированы 16 таблицами и 6 рисунками.

free-disser.com

ФС.3.3.1.0022.15 Вакцина чумная живая | Pharmacopoeia.ru

Содержимое (Table of Contents)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Вакцина чумная живая ФС.3.3.1.0022.15

Взамен ГФ Х, ст. 713

ФС 42-3877-99

Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину чумную живую, лиофилизат для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций, представляющую собой живую культуру вакцинного штамма чумного микроба Yersinia pestis EV линии НИИЭГ, высушенную методом лиофилизации в стабилизирующей среде.

Вакцина предназначена для профилактики чумы и вызывает развитие специфического иммунитета продолжительностью до 1 года.

ПРОИЗВОДСТВО

Вакцинный штамм Y. pestis EV линии НИИЭГ должен обладать типичными морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами; содержать плазмиды pFra, пестициногенности (pPst) и кальций-зависимости (pCad) с молекулярными массами » 60 , » 6 и » 47 MDa соответственно; не должен вызывать гибель морских свинок и потерю их массы при введении в дозе 15 109 микробных клеток (м.к.). Иммуногенность штамма по величине ЕD50 при подкожном введении не должна превышать для морских свинок 103 м.к., для белых мышей – 104 м.к.

Перед приготовлением очередной серии вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ проводят его пассаж через организм морской свинки с последующим отбором типичных колоний, выросших на чашках Петри с агаром Хоттингера из посевов селезенки и регионарных лимфатических узлов.

Технология изготовления вакцины предусматривает получение посевных культур Y. pestis EV линии НИИЭГ I, II и III генераций; процесс накопления биомассы, выращенной для приготовления вакцинной взвеси с необходимой концентрацией; последующий розлив, замораживание, сублимационное высушивание, герметизацию и упаковку препарата. На стадиях приготовления посевных культур определяют рН, концентрацию микробных клеток и отсутствие посторонней микрофлоры.

В зависимости от технологии приготовления вакцины в процессе производства используются вспомогательные вещества, разрешенные для использования при производстве иммунобиологических лекарственных препаратов: сахароза, желатин, тиомочевина, декстрин, аскорбиновая кислота.

ИСПЫТАНИЯ

Описание

Пористая масса серовато-белого цвета.

Подлинность

Вакцина должна содержать чистую культуру вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ. Определение проводят иммунофлуоресцентным методом с помощью иммуноглобулинов чумных диагностических флуоресцирующих, в соответствии с инструкцией по применению. В мазках из препарата микробные клетки должны светиться по периферии ярко-зеленым цветом.

Время растворения

Должна полностью растворяться в течение 3 мин при добавлении 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида.

Восстановленный препарат – гомогенная суспензия серовато-белого цвета без посторонних примесей и хлопьев. Определение проводят визуально.

Время седиментационной устойчивости

Суспензия не должна расслаиваться в течение 5 мин. Определение проводят в соответствии с ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения».

Размер частиц

Суспензия должна свободно проходить в шприц через иглу № 0840. Определение проводят в соответствии с ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения».

рН

От 6,8 до 7,8. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия». Для испытания используют 5 образцов.

Потеря в массе при высушивании

Не более 4,0 %. Определение проводят гравиметрическим методом в соответствии с ОФС «Потеря в массе при высушивании». Для испытания используют 5 образцов.

Средняя масса и отклонение от средней массы

Коэффициент вариации массы вакцины в ампулах (флаконах) должен быть не более 5 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Однородность массы дозированных лекарственных форм».

Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов

Вакцина не должна содержать посторонних микроорганизмов и грибов. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность» методом прямого посева на тиогликолевую среду.

В ампулу (флакон) с вакциной вносят 2 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. По 1 мл каждого образца полученной взвеси засевают в пробирки, содержащие по 20 мл тиогликолевой среды. Одну пробирку из каждого образца инкубируют при температуре от 30 до 35 оС для выявления аэробных и анаэробных микроорганизмов, другую – при температуре от 20 до 25 оС для выявления грибов. Через 5 – 7 сут из каждой пробирки производят пересев по 0,5 мл в 2 пробирки, содержащие по 10 мл тиогликолевой среды, и инкубируют при указанных выше температурах. Через 14 сут выращивания со дня первичного посева из всех пробирок делают мазки, окрашивают их по Граму, просматривают под микроскопом при увеличении К7×40.

В случае обнаружения хотя бы в одном из 10 просмотренных полей зрения кокков или грамположительных палочек препарат считается контаминированным посторонней микрофлорой.

При выявлении в мазках грамотрицательных палочек, отличающихся по морфологии от чумного микроба, готовят мазки, которые окрашивают иммуноглобулинами чумными диагностическими флуоресцирующими в соответствии с инструкцией по применению и просматривают в каждом мазке не менее 10 полей с помощью люминесцентного микроскопа. Если не все бактерии, обнаруживаемые в вакцине, дают специфическое ярко-зеленое свечение по периферии клеток, препарат считают не выдержавшим испытание.

Специфическая безопасность

Вакцина должна быть безопасной. Испытание проводят на морской свинке массой (275 ± 25) г.

Содержимое ампулы (флакона) растворяют в 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, определяют концентрацию по методике, описанной в разделе «Специфическая активность (концентрация микробных клеток)», разводят 0,9 % раствором натрия хлорида до концентрации 15 · 109 м.к./мл и вводят подкожно в объеме 1 мл одной морской свинке во внутреннюю поверхность бедра.

На 6 сут морскую свинку взвешивают, подвергают эвтаназии, отмечают патологоанатомические изменения, обнаруживаемые при вскрытии. Печень, селезенку, легкие, регионарные лимфатические узлы, кровь и ткани из места введения высевают методом отпечатков на чашку Петри с агаром Хоттингера, рН (7,2 ± 0,1), с добавлением натрия сернистокислого 0,25 г на 1 л среды и на чашку Петри с агаром Хоттингера, рН (7,2 ± 0,1), с добавлением генцианвиолета 0,05 г на 1 л среды. Посевы инкубируют при температуре (27 ± 1) оС в течение 3 сут.

Вакцина не должна вызывать у морской свинки потерю массы к 6 сут после введения больше чем на 20 %, не должна вызывать видимых патологоанатомических изменений в легких – кровоизлияний, очагов воспаления, гранулем, абсцессов; в посевах крови и легких не должно быть роста чумного микроба. В месте введения допускается развитие кровоизлияния и инфильтрата подкожной клетчатки, переходящих в некроз. Во внутренних органах (селезенка и печень) допустимо развитие ограниченной узелковой реакции.

Специфическая активность

Концентрация микробных клеток. В препарате должно содержаться от 5 · 1010 до 1011 м.к. в 1 мл. Определение проводят в 3 образцах для каждой серии. Колебания результатов определений в отдельных образцах не должны превышать 5 % от средней арифметической величины.

Содержимое ампулы (флакона) растворяют в 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. В стандартную пробирку вносят 0,1 мл разведенного препарата и добавляют 0,9 % раствор натрия хлорида до достижения концентрации стандартного образца (СО) мутности (10 МЕ). Объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованный при разведении, учитывают при расчете концентрации микробных клеток (ОК) по формуле:

ОК = (0,1 + n) ·10,

где:

0,1 – объем растворенной вакцины, мл;

n – объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованный при разведении пробы, мл;

10 – постоянная величина.

Количество живых микробных клеток. Количество живых микробных клеток должно составлять не менее 25 % от общего количества микробных клеток. Колебания результатов определения в отдельных образцах не должны превышать 20 % от средней арифметической величины.

При определении количества живых микробных клеток в вакцине используют концевые химически чистые пипетки и пробирки с 0,9 % раствором натрия хлорида, которые должны быть охлаждены до температуры от 2 до 8 о С.

Для определения количества живых микробных клеток из приготовленных ранее образцов взвесей вакцины делают последовательные десятикратные разведения от 10-1 до 10-8, используя для каждого разведения отдельную пипетку вместимостью 1 мл. Из пробирок с разведениями 10-7 и 10-8 высевают пипеткой по 0,1 мл взвеси на 2 чашки Петри с питательной средой для выделения и культивирования чумного микроба или с агаром Хоттингера со стимулятором роста (кровь гемолизированная до 1 % концентрации) или натрий сернистокислый (0,25 г на 1 л среды).

Через 72 – 96 ч инкубации при температуре (27 ± 1) оС подсчитывают количество колоний для каждого образца, принимая за 100 % количество микробных клеток, высеянных, исходя из показателя общей концентрации микробных клеток для данного образца, определенной с помощью СО мутности (10 МЕ). За количество жизнеспособных микробных клеток для каждой серии принимают среднее арифметическое определений для 3 ампул (флаконов).

Исходя из количества жизнеспособных микробных клеток в ампуле (флаконе) с вакциной рассчитывают количество доз и объем растворителя каждой серии для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций.

Для достоверности полученных результатов параллельно используют стандартный образец вакцины чумной живой.

Иммуногенность. ЕD50 вакцины для морских свинок не должна превышать 104, для белых мышей – 4 ·104 живых микробных клеток. Испытание проводят на морских свинках массой (275 ± 25) г и на белых нелинейных мышах массой (19 ± 1) г. Вакцину разводят с таким расчетом, чтобы в 1 мл содержалось 109 живых м.к. Исходя из заранее определенного количества живых м.к., вакцину разводят для иммунизации морских свинок до концентраций 2 · 105; 4 · 104; 8 · 103 и 16 · 102 м.к./мл; белых мышей – до концентраций 5 · 105 ; 1 · 105 ; 2 · 104 и 4 ·103 м.к./мл. Каждую дозу препарата вводят однократно 6 животным. Морских свинок иммунизируют подкожно во внутреннюю поверхность левого бедра в объеме 0,5 мл; белых мышей – в объеме 0,2 мл дозами 8 · 102, 4 · 103, 2 · 104 и 1 ·105 живых м.к.

Для определения фактического содержания живых микробных клеток в иммунизирующих дозах взвесь, содержащую 8 ·103 м.к./мл, используемую при иммунизации морских свинок, или дозу 4 · 103 м.к./мл для иммунизации белых мышей, разводят до концентрации 103 м.к./мл. По 0,1 мл взвеси с концентрацией 103 м.к./мл (100 м.к.) высевают на 3 чашки Петри с одной из вышеперечисленных питательных сред и инкубируют при температуре (27 ± 1) оС в течение 48 ч. Количество выросших колоний на чашках учитывают при вычислении ЕD50 испытуемой серии.

Подкожное заражение морских свинок проводят во внутреннюю поверхность правого бедра на 21 сут, мышей – в ту же область на 7 или 21 сут после иммунизации. Заражающая доза для иммунизированных вакциной животных составляет 200 Dcl (Dosis certa letalis = LD100) вирулентного штамма чумного микроба, 1 Dcl которого не должна превышать 100 микробных клеток.

Подготовка заражающего штамма Y. pestis 231 должна быть указана в нормативной документации.

Для заражения неиммунизированных (контрольных) животных используют взвесь с концентрацией 50 м.к./мл в объеме 0,5 мл для морских свинок и 125 м.к./мл в объеме 0,2 мл для белых мышей, что соответствует 1 Dcl.

Для определения фактического содержания микробных клеток заражающего штамма по 0,1 мл взвеси культуры Y. pestis 231, содержащей 103 м.к./мл, высевают на 3 чашки Петри с агаром Хоттингера и равномерно распределяют по всей поверхности среды методом «обкатки» чашек. Посевы инкубируют при температуре (27 ± 1) ºС в течение 48 ч, после чего подсчитывают количество выросших колоний.

Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 20 сут. Все контрольные животные должны погибнуть от чумы в течение 10 сут. Погибших животных вскрывают, берут органы и ткани (у морских свинок берут пробы из места введения, регионарных паховых лимфатических узлов, печени, селезенки, легких, верхушки сердца; у белых мышей – из селезенки), высевая их методом отпечатков на чашки Петри с агаром Хоттингера с добавлением генцианвиолета и с агаром Хоттингера – с натрием сернистокислым. Чашки Петри инкубируют при температуре (27 ± 1) ºС. Учет результатов проводят через 24 – 48 ч.

Павшими от чумы считают только тех животных, из органов которых при высеве выделяется культура Y. pestis.

ЕD50 вычисляют по формуле:

lg ED50 = lg DN – S · (∑Li – 0,5),

где

lg DN – логарифм максимальной иммунизирующей (фактической) дозы;

S – логарифм кратности разведений;

Li – отношение количества животных, выживших при иммунизации данной дозой, к общему количеству животных, которым эта доза была введена;

∑Li – сумма значений Li, найденных для всех испытанных доз.

Если все контрольные животные выжили, или значение ЕD50 будет более допустимого, контроль повторяют на таком же количестве животных. Если при повторном испытании значение ЕD50 будет выше допустимого, препарат считают не выдержавшим испытание.

Термостабильность

Не менее 4 сут. Показатель термостабильности (срок, в течение которого в препарате сохраняется 50 % живых микробных клеток по отношению к первоначальному количеству ) определяют в 3 образцах после хранения вакцины при температуре (37 ± 1) оС в течение 14 сут.

Методика определения количества живых микробных клеток изложена в разделе «Специфическая активность». Показатель термостабильности (t) в сут рассчитывают по формуле:

pokazatel-termostabilnosti-t-v-sut-rasschityvayut-po-formule2

где:

lg A0 – логарифм первоначального количества живых м.к./мл;

lg An – логарифм количества живых м.к./мл через 14 сут хранения вакцины при температуре (37 ± 1) °C;

0,3 – постоянная величина;

14 – срок хранения вакцины при температуре (37 ± 1) °C, сут.

Упаковка и маркировка

В соответствии сОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».

Транспортирование и хранение

При температуре от 2 до 8 °С.

Скачать в PDF ФС.3.3.1.0022.15 Вакцина чумная живая

pharmacopoeia.ru

ФС.3.3.1.0021.15 Вакцина чумная живая, таблетки для рассасывания

Содержимое (Table of Contents)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Вакцина чумная живая, ФС.3.3.1.0021.15

таблетки для рассасывания Взамен ФС 42-3346-96

Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину чумную живую, таблетки для рассасывания, представляющую собой лиофилизированную живую культуру вакцинного штамма чумного микроба Yersinia pestis EV линии НИИЭГ. Вакцина предназначена для профилактики чумы и вызывает развитие специфического иммунитета длительностью до 1 года.

ПРОИЗВОДСТВО

Все этапы производства вакцины должны гарантировать соблюдение установленных надлежащих правил, а также качество лекарственного препарата, гарантирующее его безопасность для человека.

Вакцинный штамм Y. pestis EV линии НИИЭГ должен обладать типичными морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами; содержать плазмиды pFra, пестициногенности (pPst) и кальций зависимости (pCad) с молекулярными массами 60 , » 6 и » 47 MDа соответственно; не должен вызывать гибели морских свинок и потери их массы при введении им дозы 15∙109 микробных клеток (м.к.). Иммуногенность штамма по величине ЕD50 при подкожном введении не должна превышать для морских свинок 1∙103 м.к., для белых мышей – 1∙104 м.к.

Перед приготовлением очередной серии вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ проводят его пассаж через организм морской свинки с последующим отбором типичных колоний, выросших на чашках Петри из посевов селезенки или регионарных лимфатических узлов.

Технология изготовления вакцины предусматривает получение посевных культур Y. pestis EV линии НИИЭГ I, II и III генераций; процесса накопления биомассы, необходимой для приготовления микробной взвеси определенной концентрации; последующий розлив, замораживание, сублимационное высушивание; приготовление гранулята и таблеток; фасовку и упаковку препарата.

В зависимости от технологии приготовления вакцины в процессе производства используются вспомогательные вещества, разрешенные для использования в иммунобиологической промышленности: лактоза, декстрин, тиомочевина, аскорбиновая кислота, глюкоза, ментол, крахмал картофельный, какао-порошок, ванилин, кальция стеарат.

На стадиях приготовления посевных культур определяют рН, концентрацию микробных клеток и отсутствие посторонней микрофлоры.

ИСПЫТАНИЯ

Описание

Таблетка светло-коричневого цвета правильной круглой формы с цельными краями, ровной и плоской поверхностью. Имеет запах какао, ванилина и ментола. Определение проводят визуально.

Подлинность

Должна содержать чистую культуру вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ. Определение проводят иммунофлуоресцентным методом. Таблетку вакцины растирают в ступке, добавляют 49 мл 0,9 % раствора натрия хлорида и тщательно перемешивают. Из полученной суспензии готовят три мазка, которые окрашивают иммуноглобулинами чумными диагностическими флуоресцирующими и просматривают под фазовоконтрастным и люминесцентным микроскопами не менее 50 полей зрения в каждом. В мазках из препарата микробные клетки должны светиться по периферии ярко-зеленым цветом. Допускается наличие не более 1 неокрашенной микробной клетки в 50 полях зрения.

Распадаемость

Таблетка должна распадаться в течение 15 мин. Определение проводят в соответствии с ОФС «Распадаемость таблеток и капсул».

Средняя масса. От 0,6 до 1,0 г. Определение проводят в соответствии с ОФС «Однородность массы дозированных лекарственных форм».

рН растворенного препарата

От 6,8 до 7,4. Таблетку растворяют в 50 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Потеря в массе при высушивании

Не более 10,0 %. Определение проводят гравиметрическим методом в соответствии с ОФС «Потеря в массе при высушивании». На каждый из двух параллельных анализов используют навеску из 3 измельченных таблеток.

Микробиологическая чистота

Таблетка может содержать не более 1∙103 микробных клеток (м.к.) бактерий непатогенных микроорганизмов.

Таблетку берут стерильным пинцетом, помещают во флакон вместимостью 100 мл, содержащий 49 мл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида. Флакон закрывают стерильной пробкой, устанавливают на платформу шуттель-аппарата и тщательно перемешивают до полного растворения таблетки и по 0,5 мл засевают на 5 чашек Петри с агаром Хоттингера, рН (7,1 ± 0,1). Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) ºС в течение 5 сут, после чего подсчитывают число выросших колоний.

Количество живых микробных клеток (N) непатогенных микроорганизмов в таблетке рассчитывают по формуле:

kolichestvo-zhivyh-mikrobnyh-kletok-n-nepatogennyh-mikroorganizmov-v-tabletke-rasschityvayut-po-formule

где:

∑n – суммарное количество колоний, выросших на чашках Петри;

49 – объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованного длярастворения таблетки, мл;

m – количество чашек Петри, использованных для посева; шт;

0,5 – объем суспензии, высеваемой на 1 чашку, мл.

При обнаружении хотя бы в одной таблетке более 1∙103 живых м.к. испытание повторяют на удвоенном количестве таблеток. Если при повторном испытании число посторонних микроорганизмов в таблетке превышает 1х103 м.к., препарат считают не выдержавшим испытание.

Специфическая безопасность

Вакцина должна быть специфически безопасной. Испытание проводят на морской свинке массой (275 ± 25) г.

Таблетку вакцины растирают в ступке, добавляют 49 мл 0,9 % раствора натрия хлорида и тщательно перемешивают., Полученную суспензию разводят до концентрации 15∙109 м.к./мл и вводят подкожно 1 мл одной морской свинке в область внутренней поверхности бедра.

На 6-е сутки морскую свинку взвешивают, подвергают эвтаназии, отмечают патологоанатомические изменения, обнаруживаемые при вскрытии. Печень, селезенку, легкие, регионарные лимфатические узлы, кровь и ткани из места введения высевают методом отпечатков на чашку Петри с агаром Хоттингера, рН (7,2±0,1), с добавлением натрия сернистокислого в количестве 0,25 г на 1 л среды, и чашку Петри с агаром Хоттингера, рН (7,2±0,1), с добавлением генцианвиолета в количестве 0,05 г на 1 л среды. Посевы инкубируют при температуре (27 ± 1) оС в течение 3 сут.

Вакцина не должна вызывать у морской свинки потери массы к 6 сут после введения больше, чем на 20 %, не должна вызывать видимых патологоанатомических изменений в легких – кровоизлияний, очагов воспаления, гранулем, абсцессов; в посевах крови и легких не должно быть роста чумного микроба. В месте введения допускается развитие кровоизлияния и инфильтрата подкожной клетчатки, переходящих в некроз. Во внутренних органах (селезенка и печень) допустимо развитие ограниченной узелковой реакции.

Специфическая активность

Содержание живых микробных клеток. Таблетка должна содержать от 30∙109 до 50∙109 живых микробных клеток вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ.

При определении количества живых микробных клеток в вакцине используют концевые химически чистые пипетки, пробирки с 0,9 % раствором натрия хлорида должны быть охлаждены до температуры 2 до 8 о С.

Таблетку растирают в ступке, добавляют 49 мл 0,9 % раствора натрия хлорида и тщательно перемешивают. Полученную суспензию вакцины разводят в 0,9 % растворе натрия хлорида последовательно десятикратно от 10-1 до 10-7, используя для каждого разведения отдельную пипетку. Из разведения 10-7 высевают по 0,1 мл на 5 чашек Петри с агаром Хоттингера с добавлением стимулятора роста (кровь гемолизированная до 1 % концентрации или натрий сернистокислый (0,25 г на 1 л среды).

Посевы инкубируют в течение 3 сут при температуре (27 ± 1) ºС, затем подсчитывают общее количество колоний на 5 чашках Петри. Количество живых микробных клеток (N) в таблетке рассчитывают по формуле:

kolichestvo-zhivyh-mikrobnyh-kletok-n-v-tabletke-rasschityvayut-po-formule

где:

∑n – суммарное количество колоний, выросших на чашках;

108 – степень разведения;

49 – объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованного для растворения таблетки, мл;

m – количество чашек Петри, используемых для посева.

Иммуногенность. ЕD50 для морских свинок не должна превышать 1∙104, для белых мышей – 4∙104 живых микробных клеток.

Испытания проводят на морских свинках массой (275 ± 25) г и на белых нелинейных мышах массой (19 ± 1) г 3 таблетки вакцины чумной живой растирают в ступке и растворяют в 0,9 % растворе натрия хлорида. Объем растворителя определяют, исходя из заранее определенного количества живых клеток в таблетке, с таким расчетом, чтобы 1 мл вакцины содержал 1∙109 живых м.к. Далее определение проводят в соответствии с методикой, изложенной в ФС «Вакцина чумная живая».

Упаковка и маркировка

В соответствии сОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».

Хранение и транспортирование

При температуре от 2 до 8 °С.

Скачать в PDF ФС.3.3.1.0021.15 Вакцина чумная живая, таблетки для рассасывания

pharmacopoeia.ru

ФС.3.3.1.0021.15 Вакцина чумная живая, таблетки для рассасывания

Содержимое (Table of Contents)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Вакцина чумная живая, ФС.3.3.1.0021.15

таблетки для рассасывания Взамен ФС 42-3346-96

ПРОИЗВОДСТВО

Вакцинный штамм Y. pestis EV линии НИИЭГ должен обладать типичными морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами; содержать плазмиды pFra, пестициногенности (pPst) и кальций зависимости (pCad) с молекулярными массами 60 , » 6 и » 47 MDа соответственно; не должен вызывать гибели морских свинок и потери их массы при введении им дозы 15∙109 микробных клеток (м.к.). Иммуногенность штамма по величине ЕD50 при подкожном введении не должна превышать для морских свинок 1∙103 м.к., для белых мышей – 1∙104 м.к.

Перед приготовлением очередной серии вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ проводят его пассаж через организм морской свинки с последующим отбором типичных колоний, выросших на чашках Петри из посевов селезенки или регионарных лимфатических узлов.

ИСПЫТАНИЯ

Описание

Подлинность

Распадаемость

рН растворенного препарата

Потеря в массе при высушивании

Микробиологическая чистота

Таблетка может содержать не более 1∙103 микробных клеток (м.к.) бактерий непатогенных микроорганизмов.

Количество живых микробных клеток (N) непатогенных микроорганизмов в таблетке рассчитывают по формуле:

kolichestvo-zhivyh-mikrobnyh-kletok-n-nepatogennyh-mikroorganizmov-v-tabletke-rasschityvayut-po-formule

где:

∑n – суммарное количество колоний, выросших на чашках Петри;

49 – объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованного длярастворения таблетки, мл;

m – количество чашек Петри, использованных для посева; шт;

0,5 – объем суспензии, высеваемой на 1 чашку, мл.

Специфическая безопасность

Вакцина должна быть специфически безопасной. Испытание проводят на морской свинке массой (275 ± 25) г.

Вакцина не должна вызывать у морской свинки потери массы к 6 сут после введения больше, чем на 20 %, не должна вызывать видимых патологоанатомических изменений в легких — кровоизлияний, очагов воспаления, гранулем, абсцессов; в посевах крови и легких не должно быть роста чумного микроба. В месте введения допускается развитие кровоизлияния и инфильтрата подкожной клетчатки, переходящих в некроз. Во внутренних органах (селезенка и печень) допустимо развитие ограниченной узелковой реакции.