 |
|
|
|||||||||
|
способ получения вакцины бцж-м для щадящей первичной иммунизации. Вакцина бцж микробиологияИз истории создания бцж.БЦЖ (BCG - Bacillus Calmette-Guérin) – вакцина из живых ослабленных туберкулезных микобактерий бычьего типа, используемая в качестве метода специфической профилактики туберкулеза. Вакцинный штамм БЦЖ был получен в 1919 г. французскими учеными А. Кальметтом и К.Гереном. В 1921 г. они впервые дали вакцину БЦЖ новорожденному ребенку. В 1923 г. Гигиенический комитет Лиги Наций принял решение о ее широком применении во всех странах мира. Леон Шарль Альбер Кальметт родился в 1863 г. в семье юриста. В 1883 г. окончил Медицинскую морскую школу, получил звание помощника судового врача. Он объездил Индокитай, побывал в Китае, участвовал как военный врач в сражениях. Работая в Индокитае, Кальметт был поражен множеством заразных болезней, против которых его врачебные знания были недостаточны. В 1885 г. Кальметт приехал во Францию и защитил диссертацию по тропическим болезням. Затем он отправился в экспедицию в Африку, где свирепствовали малярия, холера, желтая лихорадка. Он сам заболел малярией, приступы которой не оставляли его в течение года. В 1887 г. Кальметт возвратился во Францию и служил в морском госпитале. В 1890 г. он приехал в Париж для прохождения курса микробиологии, который вели Э. Ру и И.И. Мечников. В 1891 г. Луи Пастер, опираясь на опыт Кальметта в колониях, предложил ему организовать лабораторию для производства антирабической и оспенной вакцин в Индокитае. В Сайгоне Кальметт организовал филиал Пастеровского института. Здесь он наладил производство оспенной вакцины из материала, полученного от местных животных. Применение Кальметтом глицерина для консервирования зараженного вирусом бешенства кроличьего мозга сделало возможным регулярную присылку препаратов из Франции в Сайгон, что обеспечивало производство вакцины против бешенства. Здесь он развернул исследования по изучению холеры, дизентерии; впервые применил противочумную серотерапию. Решив испытать возможность серотерапии при укусах змей, он добыл яд, ослабил его нагреванием и стал иммунизировать животных. Из этих опытов выросла разработанная Кальметтом уже во Франции серотерапия отравления змеиным ядом. При участии Кальметта были организованы филиалы Института Пастера в Северной (Тунис, Алжир, Марокко), Западной (Сенегал, Конго) и Экваториальной Африке, на Мадагаскаре. В 1895 г. Кальметт возглавил Пастеровский институт в Лилле, а также кафедру бактериологии на медицинском факультете. Для нужд населения были открыты диагностические и бактериологические лаборатории; стали производиться сыворотки – противостолбнячная и против змеиного яда. Здесь, в Лилле, Кальметт вплотную столкнулся с распространенной в индустриальных регионах Франции чахоткой, и эта проблема заняла главное место среди его научных интересов. Жан-Мари Камилл Герен (1872-1961) родился в Пуатье в бедной семье. Его отец умер в 1882 г. от туберкулеза, и мать вторично вышла замуж – за ветеринара. Возможно, поэтому в 1891 г. Герен поступил в Ecole Vеtеrinaire de Maisons-Alfort (Альфорский ветеринарный институт). Его учителем был Эдмон Нокар – французский эпизоотолог и директор института, разработавший метод выращивания бактерий туберкулеза на глицериновых средах. Когда А. Кальметту потребовался ветеринар для сотрудничества в изучении инфекционных болезней животных, он пригласил Герена. Приехав в Лилль в 1897 г., Герен стал заведовать лабораторией вакцин; их совместная с Кальметтом работа продолжалась 36 лет. В 1928 г. Герен был награжден орденом Почетного легиона и приглашен руководить лабораторией БЦЖ в Парижском Пастеровском институте, который бесплатно распространял вакцину, активно знакомил с методами ее производства и контроля национальные лаборатории других стран. С 1900 г. и до конца жизни основное внимание Кальметта было сосредоточено на борьбе с туберкулезом. «За время моего пребывания в Лилле проблема научной и социальной борьбы против туберкулеза стала для меня поистине навязчивой идеей. Я лучше, чем кто-либо другой, мог измерить всю глубину бедности рабочих, всю разрушительную силу туберкулеза, свирепствовавшего в их среде» – писал он. Сочетая научные исследования с общественной и социально-гигиенической работой, Кальметт в 1901 г. основал в г.Лилле первый противотуберкулезный диспансер, пропагандировал идею борьбы с туберкулезом путем создания сети специализированных диспансеров. Он организовал «Северную лигу против с туберкулезом», располагавшую средствами, на которые были организованы диспансеры в городах Франции; был избран вице-президентом Французского национального комитета борьбы с туберкулезом и т.д. С 1900 г. Кальметт задумывается над значением естественного и приобретенного иммунитета к туберкулезу. Специфическую резистентность можно создать иммунизацией. Опыты показали непригодность для этой цели убитых бактерий, их экстрактов, туберкулина. Нужна была вакцина из живых, но аттенуированных (т.е. ослабленных) бактерий. Надо было создать такой штамм, который, во-первых, будет устойчив во внешней среде (иначе вакцину невозможно хранить), а во-вторых, способен вызывать заболевание ровно в той степени, которая позволит организму выработать иммунитет, но не нанесет ему при этом существенного вреда. Такой штамм и был создан Кальметтом и Гереном в результате упорной систематической работы – 230 непрерывных пассажей туберкулезного штамма на картофеле с желчью. В 1908 г. Кальметт и Герен засеяли на картофельно-глицериновую среду с желчью (использовалось открытое Кальметтом свойство бычьей желчи снижать вирулентность) очень вирулентную культуру микобактерий бычьего типа и через каждые 2 недели пересевали ее. Направленно изменяя условия среды, они добились изменения свойств микобактерий и наследуемого закрепления их новых свойств. Более чем через 13 лет они получили живую культуру, безвредную для рогатого скота, морских свинок, кроликов и обезьян, но обладающую хорошими иммунизирующими свойствами. В 1921 г. Кальметт и Герен совместно с педиатром Вайль-Алле впервые сделали прививку новорожденному ребенку живой вакциной из штамма БЦЖ. Бенжамен Вайль-Алле был первым, кто рискнул использовать живую вакцину БЦЖ, и сделал прививку новорожденной девочке, туберкулезная мать которой умерла при родах, оставив на руки туберкулезной же бабушке. Общая доза введенной перорально на 3, 5 и 7-й день жизни вакцины составила 240 млн. бактерий. Поскольку в течение 6 месяцев девочка чувствовала себя хорошо, метод пероральной вакцинации БЦЖ стал применяться для всех новорожденных в парижской больнице. К 1924 г. во Франции были вакцинированы более 300 новорожденных, матери которых болели туберкулезом. Метод вакцинации БЦЖ был по-разному принят учеными, практиками и населением. Энтузиазм соотечественников по поводу открытия Кальметта выражался в том, что его называли «спасителем младенцев посредством БЦЖ». Эксперименты в Институте Пастера и в зарубежных странах, а также наблюдения в практике свидетельствовали о практической безвредности вакцинации БЦЖ. Имелись, однако, и противники идей Кальметта, которые допускали, но не могли доказать возможность реверсии – возврата вирулентности штамма БЦЖ. Кальметт прислушивался к каждому возражению, лично отвечал на него, следил за состоянием каждого вакцинированного ребенка. С 1928 г. безвредность и эффективность вакцинации БЦЖ были подтверждены рядом международных комиссий. К 1934 г. во Франции было более 800 тыс. вакцинированных БЦЖ детей (еще 450 тыс. — в 46 других странах), и смертность от туберкулеза в этих контингентах была значительно ниже, чем у невакцинированных детей. Печатается по: Тогунова А.И. Жизнь и деятельность Альбера Кальметта // Вестник АМН СССР. – 1964. – №8. – С.69-74. studfiles.net Способ получения вакцины бцж имурон для иммунотерапии рака мочевого пузыря
Изобретение относится к медицинской микробиологии. Микробную массу культуры БЦЖ-1 фильтруют и разводят стабилизатором в два этапа. После первого разведения до концентрации 50 - 60 мг БЦЖ в 1 мл полученную взвесь центрифугируют при факторе разделения 250 в течение 5 мин, после чего проводят разведение до конечной концентрации 25 или 30 мг БЦЖ в 1 мл. Вакцину разливают по 1 мл в ампулы и лиофилизируют. Изобретение позволяет получать стандартную лечебную вакцину с концентрацией 25 или 30 мг БЦЖ в 1 мл с более высокими показателями жизнеспособности, гомогенности, дисперсности и растворимости. 2 табл. Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к способам получения вакцины, предназначенной для профилактики рецидивов поверхностного (Ta, T1) рака мочевого пузыря после оперативного (трансуретральная резекция) удаления опухолей, а также для лечения рака in situ и поверхностных опухолей мочевого пузыря размером менее 1 см, оперативное удаление которых невозможно. Известен способ получения вакцины БЦЖ, применяемой для специфической профилактики туберкулеза, заключающийся в том, что микробную пленку культуры клеток БЦЖ-1, выращенную на твердой картофельной среде, а затем в жидких синтетических средах, снимают, фильтруют, растирают в шуттель-аппарате, после чего разводят стабилизатором - 1,5% раствором глутамината натрия до содержания 1 мг вакцины БЦЖ в 1 мл. Разведенную вакцину разливают в ампулы и лиофилизируют под вакуумом ("Справочник по применению бактериальных и вирусных препаратов" под редакцией Дзагурова С.Д. и Резепова Ф.Ф. - М.: Медицина, 1975, с. 179). Недостатком известного способа является то, что данная вакцина предназначена для специфической профилактики туберкулеза и одна ампула препарата содержит 1 мг вакцины БЦЖ в 1 мл. Для иммунопрофилактики и иммунотерапии поверхностных форм рака мочевого пузыря используется внутрипузырное введение 100-150 мг вакцины БЦЖ. Для инстилляции больному необходимого количества вакцины БЦЖ нужно вскрыть 100-150 ампул, что приводит к нестандартности дозы, а также значительному выбросу живой БЦЖ в окружающую среду (препарат под вакуумом). Целью изобретения является создание вакцины БЦЖ для иммунотерапии рака мочевого пузыря с более высокой концентрацией культуры клеток в 1 мл и обладающей высокой жизнеспособностью, гомогенностью, дисперсностью и растворимостью. Сущность изобретения состоит в том, что в способе получения вакцины БЦЖ для иммунотерапии рака мочевого пузыря, согласно которому микробную массу культуры БЦЖ-1 фильтруют, растирают в шуттель-аппарате, разводят стабилизатором и лиофилизируют в ампулах, разведение проводят в два этапа, при этом после первого разведения до концентрации 50 - 60 мг БЦЖ в 1 мл полученную взвесь центрифугируют при факторе разделения 250 в течение 5 минут, после чего проводят разведение до конечной концентрации 25 или 30 мг БЦЖ в 1 мл. Использование изобретения позволяет получить следующий технический результат. Вакцина, впервые полученная предлагаемым способом, предназначена для иммунотерапии рака мочевого пузыря. Предложенный способ позволяет получить стандартную лечебную дозу препарата с концентрацией 25-30 мг БЦЖ в 1 мл, обладающего более высокими показателями жизнеспособности, гомогенности, дисперсности и растворимости (табл. 1). Это достигается за счет дополнительного введения центрифугирования и проведения разведения в два этапа. Способ осуществляется следующем образом. Вакцина представляет собой живые микробактерии вакцинного штамма БЦЖ-1, лиофилизированные в 1,5% растворе глутамината натрия. Живые микробактерии штамма БЦЖ-1, размножаясь внутриклеточно, приводят к неспецифической стимуляции клеточного иммунного ответа. Для получения вакцины используют штамм БЦЖ-1, который должен отвечать следующим требованиям: 1. Состоять из жизнеспособных микробактерий штамма БЦЖ-1. 2. Не содержать вирулентных микробактерий. 3. Не содержать посторонней микрофлоры. 4. Достоверно увеличивать количество Т- и В-лимфоцитов на 7-е и 14-е сутки у беспородных мышей при подкожном введении 0,01 мг БЦЖ. 5. Стимулировать гиперчувствительность замедленного типа на 5-е сутки на эритроциты барана у беспородных мышей при подкожном введении БЦЖ-1 в дозе 0,2 мг. 6. Стимулировать активность перитонеальных макрофагов у беспородных мышей на 7-е сутки при подкожном введении БЦЖ в дозе 0,01 мг (Медуницин Н.В. Вакцинология. - М., 1999 г.; Лукшт Н.В. Стандартизация параметров качества вакцины БЦЖ в тестах in vitro и in vivo. Автореферат. - М., 1980 г.). Высев из ампул со штаммом БЦЖ-1, полученным из ГИСК им. Л.А. Тарасовича, осуществляют на картофельную среду Павловского. На 20-25 сутки выращивания в термостате при температуре (38 РИСУНКИ Рисунок 1, Рисунок 2PD4A - Изменение наименования обладателя патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение (73) Новое наименование патентообладателя:Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф.Гамалеи РАМН (RU) Адрес для переписки:123098, Москва, ул.Гамалеи, 18, НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН Извещение опубликовано: 10.02.2010 БИ: 04/2010 www.findpatent.ru способ получения вакцины бцж-м для щадящей первичной иммунизации - патент РФ 2170588 1)oC культуру БЦЖ-1 пересевают на жидкую среду Вакенгут, Козловской и Лещинской (ВКЛ) - матриксы N 1. Выросшую на 6-10 сутки на поверхности жидкой среды культуру БЦЖ-1 переносят ракеткой на поверхность свежей питательной среды ВКЛ - матриксы N 2. Матриксы N 2 на 6-8 сутки роста используют для засева пленочным методом среды ВКЛ в производственных колбах, емкостью 0,5 л. Вакцину изготавливают из культуры БЦЖ-1 11-ти суточного возраста, отбирая культуру с сухими морщинистыми пленками, покрывающими всю поверхность среды. Сглаженные, влажные и растущие отдельными островками пленки не пригодны для изготовления вакцины. Тщательно отобранную культуру БЦЖ-1 (12-15 колб) фильтруют в один аппарат для фильтрации. Микробные тела отделяют от питательной среды, промывают средой высушивания и охлаждают в холодильнике в течение 30 минут. Во время изготовления вакцина должна быть защищена от действия света. (А.И. Тогунова. Иммунизация живой вакциной против туберкулеза. - М.: Медгиз, 1960 г.). Микробную массу растирают в бутыли с металлическими бусами в шуттель-аппарате при температуре от 10 до 18oC в течение 20 минут при частоте 75 об. /мин до получения однородной массы. Далее микробную массу разводят стабилизатором до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл. Эту взвесь асептично переносят в стеклянные флаконы объемом 250 мл и центрифугируют при 2000 об./мин в течение 15-20 минут. Надосадочную взвесь из флаконов асептично отсасывают и разводят средой высушивания (1,5% раствором глутамината натрия) до содержания 0,5 мг БЦЖ в 1 мл. Точность разведения проверяют по фотоэлектроколориметру. Вакцину разливают по 0,2 мл в ампулы и лиофилизируют. Пример N 1. Для получения концентрации 0,5 мг БЦЖ в 1 мл культуру штамма БЦЖ-1 высевают на плотную картофельную среду Павловского, выращивают в термостате 24 дня при температуре (381)oC, пересевают на жидкую среду ВКЛ - 3 матрикса N 1. Выросшую на 7 сутки на поверхности жидкой среды культуру БЦЖ-1 переносят ракеткой на поверхность свежей питательной среды ВКЛ - 6 матриксов N 2. Матриксы N 2 на 7 сутки роста используют для засева пленочным методом среды ВКЛ в 13 производственных колбах емкостью 0,5 л - таким образом производится накопление биомассы. Тщательно отобранную культуру БЦЖ-1 (12 колб) фильтруют, промывают средой высушивания и охлаждают в холодильнике в течение 30 минут. Микробную массу растирают в бутыли с металлическими бусами в шуттель-аппарате до получения однородной массы при температуре 10oC в течение 20 минут при частоте 75 об. /мин. Далее микробную массу разводят стабилизатором до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл, центрифугируют при 2000 об. /мин в течение 15 минут, разводят средой высушивания до содержания 0,5 мг БЦЖ в 1 мл, разливают по 0,2 мл в ампулы и лиофилизируют (табл. 1). Пример N 2. Вакцинацию проводили зашифрованными парными сериями препарата. 50% родившихся детей прививают вакциной БЦЖ-М (0,025 мг), а другие 50% - вакциной БЦЖ (0,05 мг). Серии вакцин приготовляют из одной маточной взвеси культуры БЦЖ с дифференцированной дозировкой (парные серии). В сроки 1, 3, 12 месяцев и 2-4 года изучают местную прививочную реакцию и через 1-1,5 года - чувствительность к туберкулину (табл. 2, 3). Таким образом, как по результатам учета местной прививочной реакции, так и туберкулиновых проб отмечают, что уменьшенная в два раза доза препарата создает тот же уровень защиты от туберкулеза, как и полная доза, при менее выраженной реактогенности. Анализ частоты послепрививочных осложнений при вакцинации в зависимости от числа жизнеспособных особей в препарате, а следовательно в прививочной дозе, свидетельствует об уменьшении в 3,3 раза числа осложнений в виде регионарных лимфаденитов при уменьшении антигенной нагрузки препарата. Использование вакцины БЦЖ (0,025 мг) позволяет ежегодно увеличить на 7-8% охват этой прививкой новорожденных, так как с целью профилактики поствакцинальных регионарных лимфаденитов детям группы повышенного риска с отягощенным постнатальным периодом (недоношенность, перинатальная энцефалопатия, гнойно-септическая инфекция) проводят прививку вакциной БЦЖ (0,025 мг). Таким образом, вакцина БЦЖ с уменьшенной антигенной нагрузкой создает тот же уровень защиты от туберкулеза, как и вакцина БЦЖ; использование вакцины БЦЖ (0,025 мг) позволяет ежегодно увеличивать охват этой прививкой новорожденных при сниженной в 3,3 раза частоте поствакцинальных осложнений. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСпособ получения вакцины БЦЖ для щадящей первичной иммунизации, включающий фильтрацию микробной массы культуры БЦЖ-1, промывание средой высушивания, растирание в шуттель-аппарате до получения однородной массы, разведение стабилизатором и лиофилизацию в ампулах под вакуумом, отличающийся тем, что разведение микробной массы стабилизатором после растирания в шуттель-аппарате проводят до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл, которую центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 - 20 мин, после чего проводят повторное разведение надосадочной взвеси стабилизатором до конечной концентрации 0,5 мг БЦЖ в 1 мл.www.freepatent.ru Способ получения вакцины бцж-м для щадящей первичной иммунизации
Изобретение относится к медицине, касается способа получения вакцины БЦЖ-М для щадящей первичной иммунизации. Сущность изобретения: микробную массу культуры БЦЖ-1, выращенную на твердой картофельной среде, а затем на жидких синтетических средах, снимают, фильтруют, промывают средой высушивания, растирают в шуттель-аппарате до получения однородной массы, разводят стабилизатором до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл, которую центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 - 20 мин, после чего проводят повторно разведение надосадочной взвеси стабилизатором до конечной концентрации 0,5 мг БЦЖ в 1 мл. Вакцину разливают в ампулы и лиофилизируют. Технический результат заключается в повышении жизнеспособности вакцины в одной прививочной дозе. 3 табл. Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к способам получения вакцины с уменьшенной антигенной нагрузкой, предназначенной для щадящей специфической профилактики туберкулеза. Для уменьшения поствакцинальных осложнений при применении живой вакцины следует добиваться наибольшего разрыва между показателями эффективности и реактогенности. Для вакцины БЦЖ это прежде всего уровень содержащихся в ней жизнеспособных микробных тел, гомогенность, дисперсность, которые определяют ее реактогенность и связанную с ней частоту поствакцинальных осложнений. (Л. А. Митинская, Л.И.Котова, А.В.Козлова и др. Профилактика осложнений вакцины БЦЖ у новорожденных. Проблемы туберкулеза. - М.: Медицина, 1986 г.). Известен способ получения вакцины БЦЖ, применяемой для специфической профилактики туберкулеза, заключающийся в том, что микробную пленку культуры клеток БЦЖ-1, выращенную на твердой картофельной среде, а затем на жидких синтетических средах, снимают, фильтруют, растирают в шуттель-аппарате, после чего разводят стабилизатором - 1,5% раствором глутамината натрия до содержания 1 мг вакцины БЦЖ в 1 мл. Разведенную вакцину разливают в ампулы и лиофилизируют под вакуумом. (Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов / Под редакцией С.Д.Дзагурова и Ф.Ф.Резепова, издательство. - М.: Медицина, 1975 г., стр. 170). Недостатком известного способа является то, что данная вакцина предназначена для специфической профилактики туберкулеза и одна ампула препарата содержит 1 мг вакцины БЦЖ в 1 мл, что составляет 20 доз, каждая по 0,05 мг препарата в 0,1 мл. Показатель жизнеспособности вакцины БЦЖ находится в пределах 10-30 млн/мг, одна прививочная доза содержит от 500000 до 1500000 жизнеспособных клеток. Это не позволяет использовать ее для щадящей первичной иммунизации детей группы повышенного риска с отягощенным постнатальным периодом (недоношенность, перинатальная энцефалопатия, гнойно-септическая инфекция). Целью изобретения является создание вакцины для щадящей первичной иммунизации с уменьшенной антигенной нагрузкой, содержащей 0,5 мг БЦЖ в 1 мл и обладающей высокой жизнеспособностью, гомогенностью, дисперсностью и растворимостью. Сущность изобретения состоит в том, что в способе получения вакцины БЦЖ для щадящей первичной иммунизации, включающем фильтрацию микробной массы культуры БЦЖ-1, промывание средой высушивания, растирание в шуттель-аппарате до получения однородной массы, разведение стабилизатором и лиофилизацию в ампулах под вакуумом, разведение микробной массы стабилизатором после растирания в шуттель-аппарате проводят до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл, которую центрифугируют при 2000 об./мин в течение 15-20 мин, после чего проводят повторное разведение надосадочной взвеси стабилизатором до конечной концентрации 0,5 мг БЦЖ в 1 мл. Использование изобретения позволяет получить следующий технический результат. Вакцина, впервые полученная предлагаемым способом, предназначена для щадящей первичной иммунизации. Она содержит 0,5 мг БЦЖ в 1 мл, что составляет 20 доз, каждая по 0,025 мг препарата в 0,1 мл, обладает более высокими показателями жизнеспособности, гомогенности, дисперсности и растворимости. Показатель жизнеспособности данной вакцины БЦЖ находится в пределах 20-30 млн/мг, одна прививочная доза содержит от 500000 до 750000 жизнеспособных клеток, что обеспечивает высокий уровень иммунологической активности препарата при меньшей его реактогенности и позволяет снизить частоту поствакцинальных осложнений. Технический результат достигается за счет введения центрифугирования и проведения разведения в два этапа - до и после центрифугирования. Способ осуществляется следующим образом. Вакцина БЦЖ для щадящей первичной иммунизации (БЦЖ-М) представляет собой живые микробактерии вакцинного штамма БЦЖ-1, лиофилизированные в 1,5% растворе глутамината натрия. Живые микробактерии штамма БЦЖ-1, размножаясь в организме привитого, приводят к развитию длительного иммунитета к туберкулезу. Для получения вакцины БЦЖ-М используют штамм БЦЖ-1, который должен отвечать следующим требованиям: 1. Состоять из жизнеспособных микробактерий штамма БЦЖ-1. 2. Не содержать вирулентных микробактерий. 3. Не содержать посторонней микрофлоры. 4. Обеспечивать выпуск вакцины БЦЖ-М с высокой протективной активностью. 5. Образовывать у 90-95% вакцинированных БЦЖ-М детей на месте прививки рубчик размером 2-10 мм в диаметре. 6. Вызывать длительную (3-5 лет) чувствительность к туберкулину и минимальное число неблагоприятных реакций у привитых (не более 0,06% лимфаденитов после вакцинации). Высев из ампул со штаммом БЦЖ-1, полученным из ГИСК им. Л.А. Тарасовича, осуществляют на картофельную среду Павловского. На 20-25 сутки выращивания в термостате при (38 1)oC культуру БЦЖ-1 пересевают на жидкую среду Вакенгут, Козловской и Лещинской (ВКЛ) - матриксы N 1. Выросшую на 6-10 сутки на поверхности жидкой среды культуру БЦЖ-1 переносят ракеткой на поверхность свежей питательной среды ВКЛ - матриксы N 2. Матриксы N 2 на 6-8 сутки роста используют для засева пленочным методом среды ВКЛ в производственных колбах, емкостью 0,5 л. Вакцину изготавливают из культуры БЦЖ-1 11-ти суточного возраста, отбирая культуру с сухими морщинистыми пленками, покрывающими всю поверхность среды. Сглаженные, влажные и растущие отдельными островками пленки не пригодны для изготовления вакцины. Тщательно отобранную культуру БЦЖ-1 (12-15 колб) фильтруют в один аппарат для фильтрации. Микробные тела отделяют от питательной среды, промывают средой высушивания и охлаждают в холодильнике в течение 30 минут. Во время изготовления вакцина должна быть защищена от действия света. (А.И. Тогунова. Иммунизация живой вакциной против туберкулеза. - М.: Медгиз, 1960 г.). Микробную массу растирают в бутыли с металлическими бусами в шуттель-аппарате при температуре от 10 до 18oC в течение 20 минут при частоте 75 об. /мин до получения однородной массы. Далее микробную массу разводят стабилизатором до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл. Эту взвесь асептично переносят в стеклянные флаконы объемом 250 мл и центрифугируют при 2000 об./мин в течение 15-20 минут. Надосадочную взвесь из флаконов асептично отсасывают и разводят средой высушивания (1,5% раствором глутамината натрия) до содержания 0,5 мг БЦЖ в 1 мл. Точность разведения проверяют по фотоэлектроколориметру. Вакцину разливают по 0,2 мл в ампулы и лиофилизируют. Пример N 1. Для получения концентрации 0,5 мг БЦЖ в 1 мл культуру штамма БЦЖ-1 высевают на плотную картофельную среду Павловского, выращивают в термостате 24 дня при температуре (381)oC, пересевают на жидкую среду ВКЛ - 3 матрикса N 1. Выросшую на 7 сутки на поверхности жидкой среды культуру БЦЖ-1 переносят ракеткой на поверхность свежей питательной среды ВКЛ - 6 матриксов N 2. Матриксы N 2 на 7 сутки роста используют для засева пленочным методом среды ВКЛ в 13 производственных колбах емкостью 0,5 л - таким образом производится накопление биомассы. Тщательно отобранную культуру БЦЖ-1 (12 колб) фильтруют, промывают средой высушивания и охлаждают в холодильнике в течение 30 минут. Микробную массу растирают в бутыли с металлическими бусами в шуттель-аппарате до получения однородной массы при температуре 10oC в течение 20 минут при частоте 75 об. /мин. Далее микробную массу разводят стабилизатором до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл, центрифугируют при 2000 об. /мин в течение 15 минут, разводят средой высушивания до содержания 0,5 мг БЦЖ в 1 мл, разливают по 0,2 мл в ампулы и лиофилизируют (табл. 1). Пример N 2. Вакцинацию проводили зашифрованными парными сериями препарата. 50% родившихся детей прививают вакциной БЦЖ-М (0,025 мг), а другие 50% - вакциной БЦЖ (0,05 мг). Серии вакцин приготовляют из одной маточной взвеси культуры БЦЖ с дифференцированной дозировкой (парные серии). В сроки 1, 3, 12 месяцев и 2-4 года изучают местную прививочную реакцию и через 1-1,5 года - чувствительность к туберкулину (табл. 2, 3). Таким образом, как по результатам учета местной прививочной реакции, так и туберкулиновых проб отмечают, что уменьшенная в два раза доза препарата создает тот же уровень защиты от туберкулеза, как и полная доза, при менее выраженной реактогенности. Анализ частоты послепрививочных осложнений при вакцинации в зависимости от числа жизнеспособных особей в препарате, а следовательно в прививочной дозе, свидетельствует об уменьшении в 3,3 раза числа осложнений в виде регионарных лимфаденитов при уменьшении антигенной нагрузки препарата. Использование вакцины БЦЖ (0,025 мг) позволяет ежегодно увеличить на 7-8% охват этой прививкой новорожденных, так как с целью профилактики поствакцинальных регионарных лимфаденитов детям группы повышенного риска с отягощенным постнатальным периодом (недоношенность, перинатальная энцефалопатия, гнойно-септическая инфекция) проводят прививку вакциной БЦЖ (0,025 мг). Таким образом, вакцина БЦЖ с уменьшенной антигенной нагрузкой создает тот же уровень защиты от туберкулеза, как и вакцина БЦЖ; использование вакцины БЦЖ (0,025 мг) позволяет ежегодно увеличивать охват этой прививкой новорожденных при сниженной в 3,3 раза частоте поствакцинальных осложнений.Формула изобретения Способ получения вакцины БЦЖ для щадящей первичной иммунизации, включающий фильтрацию микробной массы культуры БЦЖ-1, промывание средой высушивания, растирание в шуттель-аппарате до получения однородной массы, разведение стабилизатором и лиофилизацию в ампулах под вакуумом, отличающийся тем, что разведение микробной массы стабилизатором после растирания в шуттель-аппарате проводят до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл, которую центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 - 20 мин, после чего проводят повторное разведение надосадочной взвеси стабилизатором до конечной концентрации 0,5 мг БЦЖ в 1 мл.РИСУНКИ Рисунок 1, Рисунок 2PD4A - Изменение наименования обладателя патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение (73) Новое наименование патентообладателя:Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф.Гамалеи РАМН (RU) Адрес для переписки:123098, Москва, ул.Гамалеи, 18, НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН Извещение опубликовано: 10.02.2010 БИ: 04/2010 www.findpatent.ru |
 г.Самара, ул. Димитрова 131 [email protected] |
 |