Вакцина ВГБКМ ассоциированная сухая для кроликов, 1 шт. (Профилактика вирусной геморрагической болезни и миксоматоза)

ИНСТРУКЦИЯ

по применению вакцины против миксоматоза и ВГБК кроликов ассоциированной сухой

СОСТАВ И ФОРМА ВЫПУСКА

Вакцину ассоциированную против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов изготавливают из штамма В-82 вируса миксомы кроликов и штамма В-87 вируса геморрагической болезни кроликов. Вакцина представляет собой пористую сухую массу от бледно-розового до светло-коричневого цвета. Вакцину расфасовывают по 0,5, 1, 2 мл в стерильные ампулы вместимостью 2, 3, 5, 6 мл, 4, 6 мл во флаконы емкостью 10 и 20 мл, содержащие 5-120 иммунизирующих доз. Флаконы закрывают пробками и закатывают алюминиевыми колпачками, а ампулы запаивают. На флакон (ампулу) с вакциной наклеивают этикетку или наносят несмываемой краской маркировку с указанием: краткого наименования организации – изготовителя, краткого названия биопрепарата (вакцина против миксоматоза и ВГБК сухая), номера серии, номера контроля, даты изготовления, количества доз и срока годности. Флаконы (ампулой) с вакциной упаковывают в картонные коробки с перегородками, обеспечивающими неподвижность и целостность флаконов и (ампул). На каждую коробку наклеивают этикетку с указанием ведомства и наименования предприятия-изготовителя, его товарного знака, наименования биопрепарата, номера серии, номера контроля, даты изготовления (месяц, год), срока годности, количества флаконов (ампул) в коробке, количества доз во флаконе (ампуле), условий хранения, обозначения настоящих ТУ и надписи «Для животных». В каждую коробку вкладывают наставление по применению вакцины.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

Вакцина безвредна для кроликов при внутримышечном, подкожном или внутрикожном введении. Применение вакцины согласно наставлению обеспечивает формирование напряженного иммунитета с 3-го дня после прививки, продолжительностью не менее 12-месяцев.

ДОЗЫ И СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

Вакцину применяют внутримышечно, подкожно, внутрикожно для иммунизации здоровых кроликов в благополучных, угрожаемых и неблагополучных по миксоматозу и ВГБК пунктах. В благополучных и угрожаемых пунктах кроликов иммунизируют однократно, начиная с 1,5-месячного возраста. Крольчих вакцинируют в любой период беременности. В неблагополучных пунктах по миксоматозу и ВГБК клинически здоровых кроликов и крольчат с 45-дневного возраста подвергают вакцинации. Молодняк через 3 месяца ревакцинируют. Больных животных вакцинировать запрещается. Для внутримышечного и подкожного введения вакцину во флаконах (ампулах) растворяют из расчета на 1 дозу 0,5 мл растворителя и вводят 0,5 мл в область бедра. Для внутрикожной инъекции вакцину во флаконах (ампулах) растворяют из расчета на 1 дозу 0,2 мл растворителя и вводят 0,2 мл в подхвостовое зеркало или ухо. Перед вакцинацией шприцы и иглы стерилизуют кипячением в течение 15-20 минут. Место введения вакцины дезинфицируют 70% спиртом. Каждого кролика прививают отдельной иглой. За привитым животным ведут наблюдение в течение 20 суток. Для внутрикожных прививок рекомендуется пользоваться безигольным инъектором. Техническое обслуживание инъектора проводят согласно правилам, изложенным в паспорте. Перед началом работы головку инъектора в сборе, плунжер, мандрены и запасные сопла подвергают стерилизации кипячением в дистиллированной воде в течение 15-20 минут или обрабатывают 70% спиртом. После сборки прокачку ннъектора и 2-3 пробных «выстрела» осуществляют в ватный тампон, смоченный 70% спиртом. После каждой инъекции вакцины сопло безигольного инъектора обрабатывают погружением его на 1-3 секунды в 70 процентный спирт. Повторно кроликов прививают каждые 9 месяцев.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ

Вакцина пригодна для применения в течение 18 месяцев с даты изготовления при условии хранения ее в сухом и темном месте при температуре 2-8  С. Флаконы (ампулы) с вакциной, содержащие плесень, постороннюю примесь, не разбившиеся при встряхивании хлопья, а также с нарушением укупорки и целостности бракуют. Выбракованную сухую вакцину, а также разведенную, но неиспользованную в течение 4 часов, обеззараживают кипячением в течение 20 минут.

Первая Аптека

13. 12.2022 Костно-мышечная система

Что такое костный возраст? Костный возраст — это условный возраст, которому соответствует уровень развития костей ребенка. Его можно установить при помощи рентгеновского исследования. Существуют специальные рентгенологические таблицы, объединяющие нормальные показатели костного возраста детей и подростков. В них учитываются вес и длина тела ребенка, …

Читать далее »

13.12.2022 Без рубрики

Что такое гиперестезия кожи, и какой она бывает? Гиперчувствительность кожи или гиперестезия — патологическое состояние кожных покровов, при котором даже незначительные внешние воздействия на них вызывают развитие очень сильной реакции. Такая патология чаще всего становится следствием нарушения работы нервной системы. Гиперестезия кожи может …

Читать далее »

13.12.2022 Без рубрики

Алкогольная интоксикация — это отравление ядом, имя которому алкоголь. Если рассматривать алкогольное опьянение с позиций биохимии, то интоксикация имеет место уже тогда, когда содержание спирта в крови превышает 0,3–0,4 ‰. Но на практике принято ориентироваться не на результаты анализов, а на объективное состояние …

Читать далее »

12.12.2022 Дерматология

Аллергический дерматит лечение Что такое аллергический дерматит? Аллергический дерматит — это воспалительное заболевание кожи, вызванное влиянием определенных факторов окружающей среды, проявляющих свойства аллергенов. Особенностью данного вида дерматита является замедленное появление клинических симптомов. Они возникают только на 5-6 день после контакта кожных покровов с раздражителем, а иногда этот период затягивается на …

Читать далее »

12.12.2022 Сердечно-сосудистая система

Артериальная гипертензия лечение Артериальная гипертензия и ее формы Артериальная гипертензия представляет собой заболевание, сопровождающееся стойким повышением артериального давления (АД). Согласно статистике, около 30—40% населения планеты страдает от подобного недуга, что делает гипертензию самой распространенной болезнью сердечно-сосудистой системы. В норме систолическое давление не должно …

Читать далее »

12.12.2022 ЖКТ

Анальная трещина лечение Что представляет собой анальная трещина? Анальная трещина — это дефект слизистой анального канала. Данным заболеванием чаще болеют женщины. Излюбленной локализацией, которая определяется у подавляющего большинства пациентов, является задняя стенка анального канала (соответственно 6 часам). Объясняется это тем, что данное место …

Читать далее »

12.12.2022 Костно-мышечная система

Артрит коленного сустава Почему развивается артрит коленного сустава? Артрит коленного сустава — это воспалительное заболевание, поражающее коленный сустав. Принято выделять первичный артрит, когда инфекция попадает в полость сустава из окружающей среды, например, при травме, и вторичный, когда инфекция заносится в сустав с током …

Читать далее »

12.12.2022 Сердечно-сосудистая система

Атроз суставов Артроз и его формы Заболевание суставов, характеризующееся дегенеративными и дистрофическими изменениями в них, называется артрозом. В основном патологический процесс затрагивает межсуставные хрящи и иногда прилегающие к ним участки мягких тканей. Артриту в большей мере свойственно воспаление сустава, а данному заболеванию – …

Читать далее »

12.12.2022 Костно-мышечная система

Артроз коленного сустава Что такое гонартроз? Артроз коленного сустава (остеоартроз коленного сустава, гонартроз) — дегенеративно-дистрофическое заболевание с элементами воспаления и прогрессирующим поражением всех составляющих сустав структур: хряща, подхрящевых участков кости, связок, синовиальной оболочки, капсулы и околосуставных мышц. По статистическим данным гонартрозом страдает около …

Читать далее »

12.12.2022 Дерматология

Атопический дерматит лечение Атопический дерматит и его классификация Атопический дерматит — это воспалительное кожное заболевание, чаще всего связанное с воздействием какого-либо аллергена на организм. Обычно заболевание начинается еще в детском возрасте и протекает в хронической форме, периодически обостряясь. В зависимости от возраста больного …

Читать далее »

MDARD разрешает выпуск новой вакцины для защиты домашних кроликов от RHDV2

Вакцина защищает от смертельного вируса геморрагической болезни кроликов типа 2

Для немедленного выпуска: 20 октября 2021 г. и Государственный ветеринарный врач Rural Development (MDARD) д-р Нора Вайнленд санкционировала использование новой вакцины против вируса геморрагической болезни кроликов типа 2 (RHDV2), которую должен вводить лицензированный ветеринар штата Мичиган. Внедрение этой вакцины дополнительно защищает домашних кроликов от этой смертельной болезни.

RHDV2 — чрезвычайно заразная, смертельная болезнь кроликов и зайцев. Хотя RHDV2 не поражает людей или другие виды животных, практически все кролики и зайцы, заразившиеся этой болезнью, умрут. В настоящее время в Мичигане не зарегистрировано случаев RHDV2; , однако случаи были подтверждены в других штатах.

Новая вакцина против RHDV2 была разработана компанией Medgene Labs из Южной Дакоты. Продукт получил одобрение Министерства сельского хозяйства США на экстренное использование для широкого использования в Соединенных Штатах. Вакцина представляет собой инактивированную (убитую) рекомбинантную субъединичную вакцину, которую вводят подкожно в двух дозах с интервалом в 21 день. Полный иммунитет развивается через 14 дней после второй дозы.

Вакцина доступна и должна вводиться только лицензированными ветеринарами в штате Мичиган.

Если вы ветеринар и заинтересованы в получении вакцины, свяжитесь с Medgene Labs по телефону 605-697-2600. Для получения дополнительной информации о вакцине, включая список часто задаваемых вопросов, посетите веб-сайт Medgene Labs.

Даже при наличии этой вакцины RHDV2 владельцы кроликов должны соблюдать правила биобезопасности — как до вакцинации животного, так и после нее. Меры биобезопасности помогают защитить любое животное от вредных заболеваний, сохраняя его здоровье.

Рекомендуемые меры биобезопасности включают:

• Избегание покупки и/или усыновления кроликов из районов с RHDV2.
• Изоляция вновь приобретенных кроликов от других кроликов в течение не менее 30 дней .
• Регулярная очистка и дезинфекция всех предметов/поверхностей, к которым прикасался кролик, особенно если кролик болен и предмет может быть передан другому кролику. Отбеливатель эффективен против RHDV2, но обязательно следуйте инструкциям на этикетке. Кроме того, если что-то нельзя продезинфицировать, выбросьте это.
• Не делиться предметами между разными группами кроликов.
• Мытье рук до и после контакта с кроликом.
• Снимать обувь после входа в помещение и хранить ее в месте, недоступном для домашнего кролика.
• Держите домашних кроликов подальше от диких кроликов. Не выпускайте домашних кроликов на улицу.
• Борьба с мухами и грызунами, поскольку они могут быть переносчиками вируса.
• Выбор вместо для кормления домашнего кролика уличным кормом, так как он может быть заражен.
• Немедленная изоляция всех больных кроликов и обращение к ветеринару.

Для получения дополнительной информации о RHDV2 см. информационные бюллетени, разработанные Министерством сельского хозяйства США и Министерством природных ресурсов штата Мичиган.

Защитная эффективность инактивированной вакцины против вируса геморрагической болезни кроликов типа 2, полученной из местного изолята в Египте

Введение

Геморрагическая болезнь кроликов (RHD) представляет собой высоковирулентное вирусное заболевание Oryctolagus cuniculus, угрожающее популяции кроликов в Египте и во всем мире. Этиологическим агентом является вирус геморрагической болезни кроликов (RHDV), одноцепочечный вирус рибонуклеиновой кислоты (РНК) с положительным смыслом, принадлежащий к роду Lagovirus, семейству Caliciviridae. ^{1 )} Вирус был впервые диагностирован с помощью теста гемагглютинации (ГА) с использованием эритроцитов человека типа «О», но этот тест не является надежным для диагностики вируса, поскольку изоляты вируса не гемагглютинируют. ² Вирус нельзя культивировать в клеточных культурах, поэтому обнаружение и характеристика вируса проводились путем инокуляции восприимчивых кроликов и полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР). ^{3 )} Субдомен P2 белка VP60 (области от C до E) является иммунодоминантной областью калицивируса, и изменения в этой области ответственны за антигенную изменчивость. ⁴ На основании филогенетического анализа гена VP60 патогенных штаммов RHDV они были разделены на три группы: «классический RHDV» с геногруппами G1-G5, выделенными из 1984, антигенный вариант RHDVa/G6 идентифицирован в 1996 г., а RHDV2 идентифицирован в 2010 г. ⁵ В Египте вирус был завезен в 1991 г. в провинцию Шаркия, а затем распространился в нескольких мухафазах, что привело к большим экономическим потерям. ⁶ Вариантные штаммы RHDVa были выявлены в 2006 г. и с 2008 г. заменили классический штамм RHDV в производстве вакцин. ⁸ Инфекция RHDV2 имеет переменную смертность в диапазоне от 5 до 70% со средней смертностью 20% у экспериментально инфицированных кроликов; гибель может наступить у взрослых и лактирующих крольчат с 15-дневного возраста. ⁹ Однако недавние исследования продемонстрировали значительное увеличение патогенности RHDV2 в течение нескольких лет. ¹⁰ Текущая политика инфекционного контроля RHD зависит главным образом от вакцинации кроликов одобренными коммерчески доступными вакцинами против RHD в Египте, например, двухвалентной вакциной Servac RHDV и Curnipravac. ⁷ Несмотря на доступность вакцин против RHDV, в последние годы было зарегистрировано много вспышек, связанных с отсутствием перекрестного иммунитета между RHDVa и RHDV2. Впоследствии Всемирная организация по охране здоровья животных (МЭБ) в 2018 г., ⁵ рекомендовал вакцинировать кроликов вакцинами, содержащими оба антигенных типа (RHDVa и RHDV2) или штаммом, гомологичным штамму, выявленному во время вспышки. Это исследование было проведено для выделения и полной характеристики вновь появляющегося RHDV2 от подозрительных случаев, а также для оценки защитной эффективности приготовленной инактивированной вакцины, содержащей RHDV2 с адъювантом Montanide ISA 206 или гелем гидроксида алюминия.

Материалы и методы

Экспериментальные кролики

Двести сорок три серонегативных новозеландских белых кролика, самцы, весом 1,5-2,5 кг, были приобретены в 45-дневном возрасте в обычной кроличьей лаборатории в провинции Калубия. Их выращивали и содержали в клетках из нержавеющей стали со свободным доступом к воде и пище и держали под наблюдением в течение 24-часового периода акклиматизации. Кролики требовались для выделения вируса, определения летальной дозы ₅₀ (LD ₅₀ ) и оценки вакцины.

Эталонный вирус

Был использован местный штамм RHDV2, выделенный и охарактеризованный из инфицированных стад в Египте и переданный в генный банк как (RHDV\Vet-Abotaleb) под номером доступа MN276176. ^{8 )} Он был любезно предоставлен Отделом банка эталонных штаммов Центральной лаборатории ветеринарных биологических препаратов и использован в качестве положительного контроля для обнаружения вируса с помощью обычного анализа ОТ-ПЦР.

Сбор и подготовка проб

Всего было взято 11 проб печени (опрошенные пробы с каждой зараженной фермы) от свежемертвых кроликов, выращенных в провинции Эль-Калубия в 2019 г.. Это было сделано в соответствии с OIE, 2018. ⁵ Исследуемые образцы вирусов были названы от R1 до R11.

Выделение и характеристика возникающих RHDV2

Реакция гемагглютинации на предметных стеклах и микропланшетах

HA-тест выполнен в соответствии с OIE, 2018. ⁵

Молекулярная идентификация RHDV с помощью стандартной одноэтапной ОТ-ПЦР

Вирусную РНК экстрагировали с использованием набора для быстрой экстракции QIA (Qiagen Inc. Valencia CA) в соответствии с инструкциями производителя. Для амплификации HVR E-F гена VP60 применяли методику ОТ-ПЦР с использованием набора для одностадийной ОТ-ПЦР Superscript (Великобритания), прямого праймера (P33): 5’CCA CCA CCA ACA CTTCAG GT’3 и обратного праймера (P34 ): 5’CAG GTT GAA CAC GAG TGT GC ‘3. Следили за термическим профилем: этап КТ при 50°С в течение 30 мин, начальная денатурация при 9°С.5ºC в течение 15 минут, затем 40 циклов при 95ºC в течение 1 минуты, 56ºC в течение 1 минуты, 72ºC в течение 2 минут и заключительный этап удлинения при 72ºC в течение 10 минут на термоциклере (Biometra, Германия) в соответствии с Fahmy et al. ¹¹ Продукты ПЦР загружали в 1,5% агарозный гель (для молекулярной биологии) для электрофореза и визуализировали с помощью ультрафиолетового просвечивания с окрашиванием бромистым этидием (0,5 мкг/мл), чтобы показать амплификацию при 538 п.н.

Инокуляция вируса восприимчивому кролику

Десять образцов печени, положительных на RHD методом ПЦР, были инокулированы 20 серонегативным восприимчивым кроликам (один образец на двух кроликов) в возрасте 3 месяцев и весом от 1,5 до 2 кг. Два кролика содержались в качестве неинфицированных контролей. Смертность (%) регистрировали с активностью НА для каждого изолята. ¹²

Секвенирование и филогенетический анализ

На основании титра НА и результатов ОТ-ПЦР были отобраны два положительных образца для секвенирования и генетической характеристики. Амплифицированные фрагменты ДНК двух выбранных выделенных образцов очищали с использованием набора для быстрой гель-экстракции QIA (Qiagen, Валенсия, Калифорния) в соответствии с инструкциями производителя. Затем было проведено секвенирование с использованием набора для циклического секвенирования Big Dye Terminator V3.1 (Perkin-Elmer, Foster city, CA) в соответствии с инструкциями производителя, специфичных для VP60 праймеров 9.0059 11 для ОТ-ПЦР и генетического анализатора Applied Biosystems ABI 3500 (Life Technologies, Калифорния, США). Образцы были опубликованы в банке генов (A/Qalubia/2019 и B/Qalubia/2019) под инвентарным номером (MT07629 и MT067630). Нуклеотидные и аминокислотные последовательности двух изолятов были сопоставлены с последовательностями штаммов RHDV, соответствующих разным группам (G1-G6, RHDV2), полученными из Национального центра биотехнологической информации. Выравнивание проводили с использованием программы CLUSTAL-W и модуля Meg Align программного обеспечения DNASTAR (версия 7.2 гена Laser; DNASTAR, Мэдисон, Висконсин, США). Филогенетическое дерево было построено с использованием MEGA версии 7 (www.megasoftware.net) методом дерева максимального правдоподобия с умеренной силой и 1000 бутстрепными повторами. Процент идентичности парных нуклеотидов и аминокислот рассчитывали с использованием программного обеспечения DNA star (DNA Star, Madison, WI).

Определение LD ₅₀

Пятьдесят восприимчивых кроликов использовали для расчета LD ₅₀ . Этот тест был проведен в соответствии с OIE, 2018. ⁵

Приготовление вакцины-кандидата

Вирус

Местный египетский штамм RHDV2, обозначенный как (A/RHDV2/Qalubia/Egypt/2019), номер доступа MT07629, титр 10 ^8,2 LD ₅₀ /мл, титр HA равен 2 ¹³ Единица HA была используется для приготовления вакцины, контрольного теста и гомологичного антигена с конечной концентрацией 8 HA/мл в тесте ингибирования гемагглютинации (HI).

Подготовка вакцины-кандидата

Вакцина против RHDV2 была приготовлена ​​в соответствии с OIE, 2018. ⁵ Вкратце, супернатант от одного изолята RHDV2 был взят и инактивирован формалином в конечной концентрации 2% от общего объема в течение 48 часов. Оценку инактивации вируса проводили путем инъекции пяти кроликам инактивированной суспензии и содержания двух кроликов в качестве контроля. Если у привитых кроликов в последующем не было клинических признаков заболевания или падежа; инактивированную суспензию считали готовой к эмульгированию с вакцинным адъювантом. В суспензию добавляли 2% гель гидроксида алюминия (чтобы занимать 25% объема вакцины) или масло Montanide ISA 206 (чтобы занимать 50% объема препарата). Рекомендуемая доза вакцины (0,5 мл/животное) содержала 2 ¹⁰ HAU на дозу вакцины инокулировали подкожно (п/к). ^{5 , 13}

Оценка двух приготовленных вакцин, содержащих вирус геморрагической болезни кроликов 2 с адъювантом с гелем гидроксида алюминия или Montanide ISA

В общей сложности 162 восприимчивых кролика были использованы для тестов на стерильность, безопасность и эффективность, которые проводились в соответствии с МЭБ, 2018 г. ⁵

Сто пятьдесят кроликов поровну разделили на три группы. Первая группа (1 ^st group) вакцинировали п/к 0,5 мл вакцины с адъювантом инактивированного геля гидроксида алюминия; вторую группу (группа 2 ^и ) вакцинировали подкожно инактивированной масляной адъювантной вакциной в той же дозе, а третью группу (группу 3 ^и ) составляли контрольную невакцинированную группу. Индивидуальные образцы крови собирали у 10 кроликов каждой группы еженедельно, между первой и четвертой неделями после вакцинации, и определяли антитела HI RHDV2 в каждом собранном образце сыворотки с помощью теста HI. Десять кроликов из каждой группы заражали внутримышечно в дозе 1 мл/кролик 100 LD ₅₀ местного RHDV2 через каждую неделю после вакцинации. Наблюдения за клиническими признаками и смертью проводили в течение 14 дней после заражения. Образцы сыворотки выживших кроликов собирали через 1 и 2 недели после заражения для теста HI.

Защита (%) = число выживших/общее количество зараженных кроликов X 100 считается добросовестным соблюдением биоэтических стандартов.

Статистический анализ

Значимые различия между группами определяли по критерию Манна-Уитни с использованием программного обеспечения Minitab, за значимость принимали p<0,05.

Результаты

Предметное стекло и микропланшет Тест на ГА

Тест на ГА на микротитрационном планшете показал, что 10 из 11 протестированных образцов вируса были положительными на ГА, а значения титра варьировались от 8 до 13 log ₂ , как показано в таблице 1.

Таблица 1

Титры HA приготовленных образцов вируса до и после пассирования восприимчивых кроликов.

Молекулярная идентификация RHDV

Все собранные образцы вируса, положительные или отрицательные на HA, были подтверждены на присутствие вируса RHDV с помощью анализа ОТ-ПЦР на основе гена VP60. Десять образцов вируса из 11 были положительными при ОТ-ПЦР на RHVD (рис. 1).

Рис. 1
Анализ ПЦР с электрофорезом в агарозном геле, показывающий амплификацию фрагмента 538 п. н. гена VP60. Дорожка 1: отрицательный контроль. Дорожки 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12: образцы R11, R10, R9, R8, R7, R6, R5, R4, R2, R1 (положительные). Дорожка 10: образец R3 (отрицательный). Дорожка 13: положительный контроль. Дорожка М: ДНК-маркер длиной 250 п.н. (Thermo fisher Scientific Inc.).

Прививка вируса восприимчивому кролику

Экспериментально привитые кролики при первом пассаже вирусных образцов имели такую ​​же клиническую картину и посмертные (ПМ) поражения, как при естественной инфекции RHDV; летальные исходы наступали через 3-5 дней после заражения. Контрольных незараженных кроликов оставляли живыми, без каких-либо симптомов. Было подтверждено, что суспензия печени, полученная от инокулированных кроликов, содержит RHDV с помощью теста HA на микротитрационных планшетах. Десять из 11 вирусных образцов после первого пассажа на восприимчивых кроликах были положительными с титрами HA в диапазоне от 9-13 log _2, , как показано в таблице 1.

Секвенирование и филогенетический анализ

Филогенетический анализ гена VP60 показал, что два изолята (R5 и R6) были сгруппированы в группу штаммов RHDV2 по сравнению со штаммами RHDV2, доступными в банке генов .

Процент идентичности аминокислот двух изолятов составил 95,9-97,9% по сравнению с имеющимися штаммами RHDV2 в генном банке. С другой стороны, эти изоляты показали процент идентичности аминокислот между собой 99,2 %, как показано на рисунке 2.

Рис. 2
Филогенетическое дерево RHDV на основе неполных нуклеотидных последовательностей гена VP60. Изоляты из этого исследования обозначены красными кружками.

Оценка двух приготовленных вакцин, содержащих вирус геморрагической болезни кроликов 2 с адъювантом в виде геля гидроксида алюминия или Montanide ISA 206

Оценка инактивации вируса

Все кролики, которым вводили обработанный формалином вирус, остались живы без каких-либо клинических признаков. Титр инактивированного вируса 2 ¹¹ HAU по тесту HA на микропланшетах.

Стерильность и безопасность

Тест на стерильность показал, что приготовленные гомологичные вакцины были свободны от бактериального и грибкового загрязнения. Что касается теста на безопасность, приготовленные вакцины признаны безопасными. Клинические симптомы не появлялись у серонегативных восприимчивых кроликов после п/к инокуляции двойной полевой дозой.

Эффективность

Реакция торможения гемагглютинации

Средние титры антител против RHDV в поствакцинальных образцах сыворотки кроликов показали средние титры антител HI за 2 9Группа 0059 и (Montanide ISA 206) немного выше, чем для группы 1 ^st (адъювантный гель гидроксида алюминия), через одну неделю после вакцинации (ДПВ). Средний титр HI-антител постепенно увеличивался, пока не достиг своего пика на четвертом ДПВ (9,1 и 9,5 log ₂ для групп 1 и 2 ^и соответственно). Эти результаты показали, что вакцина с масляным адъювантом вызывала более ранний и более высокий гуморальный иммунитет, чем вакцина с гелем гидроксида алюминия. Были значимые различия при первой и второй ДПВ (p˂0,05), но не было значимых различий при третьей и четвертой ДПВ. Титры антител против RHDV у кроликов, выживших при четвертом ДПВ, отслеживали, начиная с первой и второй недель после заражения. HI-тест показал более раннюю индукцию антител против RHDV у кроликов, вакцинированных инактивированной масляной вакциной, и более высокий гуморальный иммунный ответ против инфекции RHDV2 по сравнению с инактивированной гелевой вакциной, как показано в таблице 2.

Таблица 2

Средний титр антител HI против RHVD, продуцируемых сыворотками экспериментальных кроликов.

Защита

Было обнаружено, что масляная вакцина Montanide RHDV2 обеспечивает лучшую защиту (%) иммунизированным кроликам, чем вакцина RHDV2 на основе геля гидроксида алюминия. Все кролики в группе 3 ^rd умерли, и у них появились клинические признаки и поражения PM RHD, начиная со 2 дня после заражения, с различной степенью тяжести, как показано в таблице 3.

Таблица 3

Защита (%) вакцинированных групп кроликов еженедельно после вакцинации.

Обсуждение

RHDV представляет собой калицивирус, вызывающий RHD, характеризующийся некротическим гепатитом с высокой летальностью у кроликов. ¹⁴ Вакцинация считается наиболее эффективным методом снижения заболеваемости и смертности, связанных с эпидемиями. ⁷ Несмотря на меры контроля, вирусу все же удалось широко распространиться за короткий период времени после появления новых штаммов RHDV2 в Египте в 2018 г. ⁸ Затем очень важно обновить текущую ситуацию, чтобы решить эту проблему и разработать новую стратегию борьбы с этой болезнью. В этом исследовании RHDV был диагностирован на 11 инфицированных фермах провинции Калубия в течение 2019 года. Было проведено выделение и характеристика RHDV2 из инфицированных образцов и приготовление инактивированной гомологичной RHDV2-вакцины. Сначала образцы печени тестировали с помощью ГА-теста при 4°С. ⁵ Десять из 11 образцов были положительными с титрами HA от 2 9от 0059 8 до 2 ¹³ , что подтверждает, что изоляты RHDV агглютинируют эритроциты человека типа «О», как сообщалось Le Gall-Reculé et al. ¹⁵ Тест на HA не может полагаться на диагностику или типирование полевых изолятов RHDV в соответствии с Abd El-Moaty et al. ¹⁶ Таким образом, применение ОТ-ПЦР оказалось более чувствительным, специфичным и быстрым для диагностики и субтипирования РГБС. Для обнаружения RHDV-специфичной нуклеиновой кислоты ¹¹ была применена ОТ-ПЦР на основе VP60, и было обнаружено, что 10 из 11 вирусных образцов были положительными. Положительные образцы вируса ПЦР вводили экспериментальным кроликам для размножения и выделения; после этого к образцам первого пассажа применяли тест HA. Десять образцов были положительными с титрами HA в диапазоне от 2, ⁹ до 2 ¹³ . Основываясь на филогенетическом анализе гена VP60, штаммы RHDV, выделенные в этом исследовании, объединены с египетским штаммом RHDV2, ранее идентифицированным Hameida et al. ⁸ Текущие изоляты (A/Qalubia/2019 и B/Qalubia/2019) показали 99,2% идентичность между собой, в то время как они показали вариабельность 2,1-2,5% по отношению к первому египетскому штамму RHDV2, выделенному в 2018 г. как нуклеотидной, так и аминокислотной последовательности. Эти результаты согласуются с генетическим разнообразием, о котором ранее сообщали Hemeida et al, ^{8 )} , которые обнаружили вариации нуклеотидов среди изолятов RHDV2 в диапазоне 1,3-7,3%. Эти различия между египетским RHDV2 указывают на то, что этот вирус быстро развивался и мутировал с момента его идентификации.

Между RHDVa и RHDV2 отсутствует иммунитет к перекрестной защите. Поэтому OIE 2018 ⁵ рекомендовал использовать гомологичную вакцину, содержащую штамм, который был идентифицирован во время вспышки. В настоящем исследовании инактивированные гомологи вакцины против RHDV2 были приготовлены с использованием масла Montanide ISA 206 или гелевых адъювантов гидроксида алюминия. Вывод подтвердил, что две приготовленные вакцины были стерильны и безопасны в соответствии с рекомендациями МЭБ, 2018 г. ⁵ Оценка эффективности инактивированной вакцины в основном основана на контрольном заражении вакциной и методах серологического ответа на вакцинацию у хозяина-мишени вакцины. Индивидуальные образцы крови собирали еженедельно во всех группах и измеряли антитела RHDV HI с использованием теста HI. ^{5 )} Полученные результаты показали индукцию более высокого серологического ответа у кроликов, привитых вакциной RHD с адъювантом Montanide ISA 206, в соответствии с уровнями антител RHDV HI в их сыворотке (6.7, 8.7, 9.2 и 9,5 log ₂ ) по сравнению со средним титром антител HI в сыворотке иммунизированных кроликов вакциной с адъювантом из геля гидроксида алюминия, который достигал 6, 7,7, 8,9 и 9,1 log ₂ в первый, второй, третий и четвертый ДПВ соответственно. Параллельно была представлена ​​достоверная разница между группами 1 ^st и 2 ^nd при первом и втором ДПВ. Так, более ранний и лучший иммунный ответ был продемонстрирован в вакцине с адъювантом масла Montanide ISA от первого ДПВ до конца эксперимента. Эти результаты согласуются с Hansen et al, ¹⁷ , который сказал, что адсорбция антигена на адъювантах, содержащих алюминий, может значительно уменьшить количество элюируемого антигена из солей алюминия, что приводит к слабому ответу антител. Зараженные кролики, вакцинированные вакциной с масляным адъювантом, имели более высокий иммунный ответ в группе зараженных кроликов, инокулированных вакциной в виде геля гидроксида алюминия. Через 7, 14, 21 и 28 дней после вакцинации 10 кроликов из каждой группы заражали внутримышечно в дозе 1 мл на кролика, содержащей 100 LD ₅₀ гомологичного вируса RHDV2. Защита (%) составила 60% и 70% для групп 1 ^st и 2 ^nd соответственно при первом ДПВ; эти результаты согласуются с Hogenesch, ¹⁸ , который сообщил, что гель гидроксида алюминия зависит от эффекта депо для стимуляции иммунного ответа; потребовалось более одной недели, чтобы выработать защитный иммунитет против сильно мутировавшего RHDV-2. Защита была увеличена до 100% в вакцине с масляным адъювантом, в то время как вакцина с гелем гидроксида алюминия вводилась 90% защиты от RHDV2 при третьем и четвертом ДПВ, что было идентично зафиксированному Шевченко, 1994. ¹⁹ Приготовленные вакцины были сильнодействующими по МЭБ, 2018 ⁵ которые сказали, что вакцина должна давать не менее 90% процент защиты должен быть действительным. Эти результаты согласуются с данными Amal et al., ²⁰ , которые зафиксировали, что у кроликов развилась полная защита от инфекции RHDV через 3 недели после введения одной дозы инактивированной вакцины против RHDV.

Поэтому рекомендуется постоянный мониторинг и молекулярная характеристика штаммов RHDV, присутствующих в Египте, для обновления вакцинного штамма и предотвращения неудач вакцинации. Состав вакцины должен содержать Montanide ISA 206 в качестве адъюванта вместо геля гидроксида алюминия.

Ссылки

Dalton KP, Abrantes J, Lopes AM, Niceza I, Álvarez AL, Esteves PJ, Parra F. Полная последовательность генома двух изолятов варианта b вируса геморрагической болезни кроликов, обнаруженных на Пиренейском полуострове. Арх Вирол.2015;160(3):877- 81.

Базид А.Х., АбоЭльхаир М.М., Абдель-Разик А.Г., Салим Р., Султан Х.А., Хусейн Х.А. Молекулярная характеристика гемагглютинирующего и негемагглютинирующего вируса геморрагической болезни кроликов из Египта. Алекс. J Vet Sci.2015;45(1):1-5.

Исмаил М.М., Мохамед М.Х., Эль-Сабаг М.М., Аль-Хаммади М.А. Появление новых вирулентных штаммов вируса геморрагической болезни кроликов в Саудовской Аравии. Trop Anim Health Prod. 2017;49(2):295-301.

Wang X, Xu F, Liu J, Gao B, Liu Y, Zhai Y и др. Атомная модель вируса геморрагической болезни кроликов методом криоэлектронной микроскопии и кристаллографии. ПЛОС Патог.2013;9(1):e1003132. doi:10.1371/journal.ppat.1003132.

МЭБ. Всемирная организация по охране здоровья животных. Вирусная геморрагическая болезнь кроликов. Ru: Руководство по диагностическим тестам и вакцинам для наземных животных (млекопитающих, птиц, пчел). Париж: МЭБ; 2018. стр.: 1389-1406. Доступно по адресу: https://www.oie.int/.

Ганем И.А., Исмаил А.Н. Возникновение геморрагической болезни кроликов в провинции Шаркия. Zagazig Vet J.1992;20:491-502.

Салман О.Г. Дальнейшие исследования геморрагической вирусной болезни кроликов в Египте. [Ф. Д. Диссертация]. Каир: Каирский университет; 2007.

Хемида Р.Э., Халиэль С.А., Аль-Эбшахи Э.М., Аботалеб М.М. Сравнительное исследование выделенного вируса геморрагической септицемии кроликов и доступного вакцинного штамма. Inter J Vet Sci.2020;9(2):189-95.

Ле Галль-Рекюль Г., Цвингельштейн Ф., Буше С., Ле Норманд Б., Плассиар Г., Портежуа И. и др. Обнаружение нового варианта вируса геморрагической болезни кроликов во Франции. Ветеринар Рек. 2011;168 (5):137-8.

Капуччи Л., Кавадини П., Скьявитто М., Ломбарди Г., Лавацца А. Повышенная патогенность вируса геморрагической болезни кроликов типа 2 (RHDV2). Ветеринарная рек. 2017; 180(17): 426. doi: 10.1136/vr.104132

Фахми Х. А., Арафа А., Махмуд А.Х. Молекулярная диагностика вируса геморрагической болезни кроликов (ВГБК). Египет J Comp Path & Clinic Path. 2010 г.; 23 (1): 85-101.

Ferreira PG, Costa-e-Silva A, Monteiro E, Oliveira MJ, Aguas AP. Транзиторное снижение содержания гетерофилов в крови и устойчивое поражение печени, вызванное калицивирусной инфекцией молодых кроликов, естественно устойчивых к кроличьей геморрагической болезни. Res Vet Sci 2004;76(1):83-94.

Эль-Джаки Дж.К., Мусса И.М., Омран М.С., Ахмед Б.М., Эльгамаль М.А., Хемег Х.А. и др. Новая бивалентная кандидатная вакцина против пастереллеза-RHD с адъювантом Montanide ISA70 защищает кроликов от летального заражения. Саудовская J Biol Sci.2019;27(3):996-1001.

Камарда А., Пульезе Н., Кавадини П., Цирчелла Э., Капуччи Л., Кароли А., Легретто М., Маллиа Э., Лавацца А. Обнаружение нового вируса геморрагической болезни кроликов типа 2 (RHDV2) на Сицилии у кролика (Oryctolagus cuniculus ) и итальянский заяц (Lepus corsicanus). Res Vet Sci.2014;97(3):642-5.

Ле Галль-Рекуле Г., Лавацца А., Маршандо С., Бертаньоли С., Цвингельштейн Ф., Кавадини П. и др. Появление нового лаговируса, связанного с вирусом геморрагической болезни кроликов. Ветеринарная рез.2013;44:81.

Абд Эль-Моати Д.А., Эль-Багури Г.Ф., Эль-Зиди С.А., Салман О.Г. Египетские негемагглютинирующие изоляты вируса геморрагической болезни кроликов могут изменяться до вариабельного профиля HA. Benha Vet Med J.2014;26(2):71-83.

Хансен Б., Соколовска А., ХогенЭш Х., Хем С.Л. Взаимосвязь между силой адсорбции антигена на алюминийсодержащем адъюванте и иммунным ответом. Вакцина.2007;25(36):6618-24.

Hogenesch H. Механизм иммунопотенцирования и безопасность алюминиевых адъювантов. Фронт Иммунол.2013;3:406.

Шевченко АА. Основные свойства новой лиофилизированной и инактивированной вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов. Russ Agric Sci.1994;6:24-8.

Амаль И.М., Дауд А.М., Эль-Бурдини Ф. Получение инактивированной вакцины против вируса инфекционного бронхита с использованием нового масляного адъюванта. Vet Med J. 2005;53(2):329-39.

Примечания автора

** Автор для корреспонденции: [email protected]

⁽ Магистр вирусологии. Ассистент-исследователь Центральной лаборатории экспертизы ветеринарных биологических препаратов.

⁽⁽ BVetMed. Кандидат вирусологических наук. Научный сотрудник Центральной лаборатории оценки ветеринарных биологических препаратов.

* Автор для корреспонденции: [email protected]

Декларация о конфликте интересов

Авторы, чьи имена перечислены выше, подтверждают, что они не связаны и не участвуют в какой-либо организации или организации с какой-либо финансовой заинтересованностью (например, гонорары; образовательные гранты; участие в бюро выступлений; членство, трудоустройство, консультации, владение акциями или иное участие в акционерном капитале; заключение экспертов или договоренности о лицензировании патентов) или нефинансовый интерес (например, личные или профессиональные отношения, принадлежность, знания или убеждения) в предмете или материалах, обсуждаемых в этой рукописи.