 |
|
|
|||||||||
|
57. Выявление различных групп антибиотиков в молочном сырье. Определение в молоке антибиотиковСпособы определения антибиотиков в молоке: какой выбрать?О вреде наличия антибиотиков в молоке спорить не приходится. Тема, как говорится, более чем актуальная. Во-первых, это опасно для потребителя – а значит, контролировать обязует государство. Во-вторых, антибиотики негативно влияют на технологический процесс: при их наличии невозможно получить продукцию требуемого стандартами качества. Не будем забывать и о скандалах, связанных с обнаружением этих нежелательных гостей в молочной продукции: финансовые убытки и потеря репутации – последствия, согласитесь, более чем серьезные. Поэтому анализируем способы проверки, оцениваем преимущества и недостатки, выбираем лучшее и контролируем! Как попадают в продукциюАнтибиотики широко используются в ветеринарии: как правило, ими лечат или предупреждают мастит, респираторные инфекции и инфекционные заболевания у крупного рогатого скота. Также в субтерапевтических количествах антибиотики используются как кормовые добавки для стимуляции роста животных. А их остатки впоследствии могут попадать в пищевые продукты животного происхождения. Чем опасны для потребителяНаличие антибиотиков в молоке может вызывать аллергические реакции. А самое опасное – регулярное потребление такой продукции вырабатывает устойчивость (резистентность) человеческого организма к антибиотикам. Каким образом вредят производствуАнтибиотики ингибируют рост закваски и делают невозможным получение качественных молочно-кислых продуктов и сыров: ваш йогурт не сможет достичь нужной консистенции, что приведет к отклонению от стандартов качества продукта. При этом в продукции активнее развивается патогенная микрофлора. Законодательное регулированиеСуществует законодательно утвержденный перечень контролируемых антибиотиков и их минимально допустимых концентраций. Требования государства в этом вопросе в разных странах могут существенно отличаться. Так, например, в Европе допустимый уровень (EU MRL – maximum residual limit) антибиотиков тетрациклиновой группы – 100 мкг/кг (ppb). А в России – всего 10 мкг/кг. Превышение данных уровней является незаконным.
Способы обнаруженияСуществует множество способов обнаружения антибиотиков в молоке. Среди них:
У каждого из этих методов есть свои преимущества и недостатки. При их сравнении, как правило, используют такие показатели:
Наибольшее распространение на фермерских хозяйствах, пунктах приема молока и молокоперерабатывающих заводах получили экспресс-тесты и ингибиторные микробиологические тесты. Основная причина – они сочетают в себе относительную простоту, приемлемое время анализа и невысокую стоимость. Ниже рассмотрим эти виды тестов, определим их положительные и отрицательные стороны и узнаем, могут ли они заменить друг друга. Экспресс-тестыЭкспресс-тесты используют специфические антитела для связывания антигена (антибиотика). В результате происходит изменение окраски на полоске, что обозначает положительный или отрицательный результат. Особенность данных тестов: они способны определять только одну или всего несколько групп антибиотиков одновременно. Наибольшее распространение в Украине получили тесты:
Преимущества экспресс-тестовОсновное преимущество экспресс-тестов – высокая скорость анализа: время, необходимое на проведение теста, составляет от 2 до 10 минут. Кроме того, все большую популярность в последнее время получают тесты без необходимости инкубации (не требуют дополнительного оборудования), что позволяет легко использовать их вне лаборатории. Недостатки экспресс-тестовТем не менее, проведение одновременного анализа одного образца молока на все основные группы антибиотиков – такие как бета-лактамы, тетрациклины, макролиды, сульфаниламиды, аминогликозиды и др. – требует использования нескольких экспресс-тестов. А значит, стоимость анализа значительно повышается. Ингибиторные микробиологические тестыПринцип работы данных тестов достаточно прост. Молоко помещают в заранее подготовленные виалы теста и инкубируют при оптимальной температуре в 64⁰С в течении определенного времени (чаще всего 3 часа, поэтому эти тесты иногда называют трехчасовыми). Виалы теста содержат питательную среду с чувствительным штаммом бактерий (споры Bacillus strearothermophius calidolactis) и индикатор кислотности, который изменяет окрас среды при изменении рН. Именно по изменению окраса и определяют наличие (или отсутствие) антибиотиков в молоке:
Преимущества ингибиторных тестовВ отличии от экспресс-тестов, которые могут обнаруживать только одну или несколько групп антибиотиков с помощью одного теста, микробиологические тесты позволяют обнаружить широкий спектр антибиотиков – бета-лактамы, тетрациклины, сульфаниламиды, макролиды, азалиды, аминогликозиды, хинолы, амфениколы, – а также другие ингибирующие вещества. Поэтому эти тесты часто используются в качестве референтных на молокоперерабатывающих предприятиях. Недостатки ингибиторных тестовЕдинственным недостатком этих тестов является длительное время тестирования. При этом стоимость одного ингибиторного теста ниже в сравнении с экспресс-тестами, что недостатком, конечно же, не назовешь. Основные показатели тестов: сравните и выберите сами
Как видим, экспресс-тесты и микробиологические (ингибиторные) тесты для обнаружения остаточных количеств антибиотиков в молоке не заменяют, а лишь дополняют друг друга и обеспечивают максимальную безопасность молочной продукции для потребителей и уверенность для производителей. В следующих статьях мы более детально расскажем о способах проверки молока на наличие антибиотиков. Следите за обновлениями в блоге. Тарас Нетеса, ведущий специалист группы пищевых технологий ООО «ХИМЛАБОРРЕАКТИВ» www.hlr.ua 57. Выявление различных групп антибиотиков в молочном сырье.Настоящий стандарт устанавливает инструментальный экспресс-метод определения наличия антибиотиков: пенициллина, тетрациклиновой группы, левомицетина (хлорамфеникола), стрептомицина, сульфаниламидов в сыром и термически обработанном молоке. Минимальные пределы обнаружения антибиотиков в молоке при помощи настоящего метода:
Метод основан на связывании остаточных количеств антибиотиков, находящихся в испытуемом образце молока, с антителами, вызывающими окрашиваемую иммунохроматическую реакцию с последующим определением интенсивности окраски продуктов биохимической реакции визуальным методом или измерением инструментально при помощи считывающего устройства, позволяющего методом оптического отражения определить степень интенсивности окраски относительно включенного в тестовую полоску контрольного количества антибиотика (минимального предела обнаружения), и выведением на дисплей идентификационных данных о типе определяемого антибиотика и о его наличии или отсутствии в течение 2-8 минут с сохранением идентификационных данных микропроцессором прибора и на приложенной флеш-карте. Обработку результатов измерений сначала производят визуально, а затем для подтверждения результата инструментально, т.е. с использованием считывающего устройства или оборудования, совмещающего в себе функции инкубатора и считывающего устройства. 58. Определение общей бактериальной обсемененности молока.Бактериальную обсемененность молока определяют с помощью редуктазной или резазуриновой пробы. Редуктазную пробу применяют для определения степени обсеменения молока микрофлорой. Сущность ее основана на установлении биохимической активности микробов, продуцирующих фермент редуктазу, которая способна обесцвечивать некоторые краски, в частности метиленовую синь. Этой способностью обладают также лейкоциты, аскорбиновая кислота и некоторые другие вещества, содержащиеся в молоке. В основу метода положено определение времени, необходимого для обесцвечивания метиленовой сини. Преимущество редуктазной пробы в сравнении с прямым бактериологическим методом состоит в быстроте получения результате (примерно через 5,5 ч). Однако не все микроорганизмы обладают редуцирующей активностью. В большей степени это свойство имеют молочнокислые стрептококки, кишечные палочки, маслянокислые и гнилостные бактерии, несколько меньше - сальмонеллы и стафилококки, а возбудители мастита стрептококковой этиологии лишены этой способности. Поэтому молоко может содержать большое количество стрептококков, вызывающих мастит, а по редуктазной пробе оно будет отнесено к первому классу. Кроме того, эта проба дает завышенные результаты летом и почти бесполезна зимой. Другими словами, молоко II и III класса после двухсуточного охлаждения при 4-5 С по редуктазной пробе дает показатели I класса. Следовательно, редуктазная проба с метиленовой синью дает весьма неточное представление о степени бактериальной обсемененности молока и его санитарном качестве. Поэтому показатели редуктазной пробы необходимо учитывать в комплексе с другими результатами исследований. Для постановки редуктазной пробы в пробирку 20 мл молока добавляют 1 мл рабочего раствора метиленовой сини и плотно закрывают пробкой. После перемешивания пробирку помещают в водяную баню при температуре 37-40 С, наблюдая за временем обесцвечивания метиленовой сини через 20 мин, 2 и 5,5 ч. Для приготовления рабочего раствора берут 5 мл насыщенного спиртового раствора метиленовой сини и добавляют 195 мл дистиллированной воды. Молоко относят к I классу, если обесцвечивание метиленовой сини происходит через 5,5 ч. В молоке II класса обесцвечивание происходит за 2-5,5 ч. Молоко III класса обесцвечивается в период от 20 мин до 2 ч. Время наступления обесцвечивания содержимого пробирки указывает на приблизительное количество в исследуемом молоке микроорганизмов, продуцирующих фермент редуктазу. Резазуриновая проба. Преимущество резазурина состоит в том, что он обладает более высоким окислительно-восстановительным потенциалом, что ускоряет исследование. На показатели резазуриновой пробы температура молока не оказывает заметного влияния. Весьма важно, что этой пробой выявляется молоко коров, больных субклиническим маститом различной этиологии. Существенный недостаток резазуриновой пробы - это светочувствительность индикатора резазурина. Для устранения данного недостатка И.С. Загаевский (1971) предложил раствор резазурина готовить в сочетании с формальдегидом. При этом в 100 мл дистиллированной воды растворяют 0,05 г резазурина и добавляют 0,5 мл формальдегида. Для исследований к 10 мл молока добавляют с помощью автомата-клювика 1 мл индикатора и после перемешивания помещают на час в водяную баню при температуре 44 С. Реакцию учитывают с момента, когда температура в контрольной пробирке достигнет 43 С. Для контроля делают пробу с кипяченым молоком. Учет реакции проводят через час. Если в течении часа не изменился первоначальный серо-голубой цвет смеси, то молоко относят к I классу; фиолетовый цвет соответствует II и розовый - III классу. Преимущество резазуриновой пробы в указанной модификации состоит в том, что она ускоряет время проведения анализа почти в 5 раз, более чувствительная к выявлению примесей маститного молока в сравнении с редуктазной пробой, не требует периодического наблюдения и более демонстративна при учете результата анализа. studfiles.net Антибиотики в молоке недопустимы! или «НЕТ!» антибиотикам в молокеПроблема загрязнения молока ингибирующими веществами приобретает с каждым годом все большее значение. Особую опасность для людей и серьезную проблему для молочной промышленности представляет наличие остаточных количеств антибиотиков, поскольку они могут нарушить производственный процесс, ингибируя заквасочную микрофлору. Это приводит к серьезным финансовым потерям. Но наиболее опасны последствия попадания остатков антибиотиков в организм человека. При добавлении антимикробных веществ в корм коров, а также при внутривыменном введении, препараты в течение некоторого времени находятся в организме, а затем выводятся, в том числе с молоком. Наличие антибиотиков в сыром молоке ведет к изменению микрофлоры и ферментов молока, которые участвуют в процессах получения сыров и кисломолочных напитков; не позволяет дать правильную оценку ферментативным процессам в молоке и эффективности его пастеризации; приводит к значительному росту колиформ в готовом продукте. Кроме того, наличие антибиотиков может затруднять бактериологические исследования качества молока и молочных продуктов. Систематическое поступление антимикробных веществ в организм человека с продуктами питания крайне вредно, поскольку они могут оказывать нежелательные эффекты (аллергические реакции, дисбактериозы), подавлять активность некоторых ферментов, изменять микрофлору кишечника, способствовать распространению устойчивых форм микроорганизмов и развивать резистентность к лекарственным препаратам. С учетом специфики воздействия антибиотиков как на здоровье людей и животных, так и на технологические свойства сырого молока необходимо ограничивать применение ряда антибиотиков, особенно в немедицинских целях. Существуют методы определения наличия антибиотиков в молоке. Создаются новые усовершенствованные методики, более легкие в использовании, более быстро дающие результат, с максимально приближенной к требуемым нормам чувствительностью и определяющие наличие разных видов антибиотиков отдельно и в совокупности. Одной из компаний на белорусском рынке, предлагающих такие методики, является ООО «Грандстандарт». Предприятие представлено в Беларуси уже более 12 лет. Визитной карточкой компании стал тест TwinsensorВТ производства Unisensor (Бельгия). Это экспресс-метод для одновременного определения наличия β-лактамов и тетрациклинов в молоке и молочных продуктах. Тест относится к иммуноферментным методам определения наличия антибиотиков и основан на реакции комплексообразования антибиотиков, находящихся в молоке, со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующей хроматографией оставшихся свободными меченых рецепторов. На сегодняшний день тест Twinsensor — самый дешевый в республике из высокочувствительных тестов на антибиотики. Он внесен в госреестр РБ. Сертификат № 6906 до 28.10.2015 года. Долгожданной новинкой на белорусском рынке является тест «4sensor» того же бельгийского производителя. Он создан специально для молочных предприятий! Это экспресс-метод для одновременного определения наличия β-лактама, тетрациклина, стрептомицина и хлорамфеникола в пробе молока. Преимущества «4sensor» — универсальность, быстрота, надежность, высокая чувствительность. Для проведения исследования для тест-наборов «4sensor» подходит инкубатор, используемый для тест-наборов TwinsensorВТ. Эти тесты уже оценил крупный производитель молока и молочных продуктов в России — компания «Вимм-Билль-Данн». Таким образом, тесты TwinsensorВТ и «4sensor» — быстрые и легкие в использовании методы, с помощью которых можно подтвердить соответствие сырого молока и молочных продуктов действующим нормативным правовым актам. Оба метода cтандартизованы в России на национальном уровне и включены в ГОСТ Р 53774–2010 «Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков», после чего рекомендованы к использованию в качестве доказательной базы № 88-ФЗ и Единых требований. ГОСТ Р 53774–2010 вступает в силу с 1 июля 2012 года. Тест TwinsensorВТ — самый дешевый в Беларуси! Всегда в наличии! Тест TwinsensorВТ — экспрессметод для одновременного определения наличия βлактамов и тетрациклинов в молоке и молочных продуктах. Тест «4sensor» — экспресс-метод для одновременного определения наличия βлактама, тетрациклина, стрептомицина и хлорамфеникола в пробе молока. TwinsensorВТ и «4sensor» стандартизованы в России на национальном уровне и включены в ГОСТ Р 53774–2010. ООО «Грандстандарт» — это:
Приглашаем производителей и поставщиков к сотрудничеству по продвижению продукции на взаимовыгодных и доверительных отношениях на территории Республики Беларусь!
ООО "Анкар-Стандарт" 220113, г.Минск, ул. Мележа 5/1, оф. 438. (+37517)237-51-34(35) (+37529)33-66-000 produkt.by Обнаружение антибиотиков и сульфаниламидов в молокеВернуться к оглавлению ОБНАРУЖЕНИЕ АНТИБИОТИКОВ И СУЛЬФАНИЛАМИДОВ В МОЛОКЕ Антибиотики и сульфаниламиды в молоке можно обнаружить химическими и микробиологическими методами,а также с помощью красящих веществ. Необходимо систематически проверять молоко на наличие антибиотиков, так как они в определенной концентрации приводят к нарушению технологического процесса переработки молока.Методы, позволяющие обнаружить в молоке антибиотики, являются стандартными и не требуют больших расходов.Химические методы применяются редко, потому что они позволяют только учитывать наличие антибиотиков или сульфаниламидов. При специфических исследованиях (газовая хроматография или масс-спектрометрия) осуществляется идентификация характерных компонентов антибиотиков или сульфаниламидов, а также устанавливаются их количества по определенным максимумам поглощения УФ-лучей (например, тетрациклин). Метод электрофореза применяется для определения антибиотиков в сочетании с микробиологическими методами.Микробиологические методы основаны на использовании бактерий, обладающих чувствительностью к антибиотикам или сульфаниламидам, в качестве индикаторов и на их способности размножаться в молоке. При задержке роста этих бактерий (задержка роста определяется непосредственно или косвенно по метаболической активности бактерий) делается заключение о наличии лекарств.Проба задержки роста — это проба, основанная на диффузии веществ в агар. Наличие остаточных веществ определяют по образованию участков торможения роста бактерий (чашечный агаро-диффузионный метод с использованием цилиндров, лунок на поверхности агара или дисков из фильтровальной бумаги). Тест-микробами служат стрептококки, микрококки и спорообразующие аэробы.При использовании окислительных и восстановительных методов остатки антибиотиков и сульфаниламидов определяют по их влиянию на метаболическую активность тест-микробов. В пробах молока, содержащих тест-микробы, наблюдается окисление и сдвиг рН. В качестве индикатора для измерения показателя рН используют лакмусовый раствор или раствор бромкрезола пурпурного. Можно определить наличие образующейся молочной кислоты и ферментативным путем. В пробе йогурта в качестве дополнительного критерия оценивается еще и слой осадка.Из восстановительных методов применяют пробы с метиленовой синью или с трифенил-тетразолхлоридом непосредственно в исследуемом молоке, или диффузионный метод с использованием агара, который содержит окислительно-восстановительный индикатор и тест-микробы.При нормальном росте тест-микробов в молоке, не содержащем остатков лекарственных веществ, наблюдается изменение цвета вследствие снижения окислительно-вос становительного потенциала. Описанный Краак и Толле восстановительный метод с бриллиантовым черным индикатором является простым для выполнения и достаточно чувствительным. При восстановительном методе с использованием чашек Петри с агаром остатки антибиотиков диффундируют в агар из смоченных исследуемым молоком листочков фильтровальной бумаги (дисков) или агар перемешивается с исследуемым молоком.С помощью йогурт-теста можно определить концентрацию пенициллина в количестве 0,05 ME в 1 мл, а чувствительность восстановительного теста с использованием бриллиантового черного индикатора составляет 0,004—0,006 ME пенициллина в 1 мл молока (табл. 17). ТАБЛИЦА 17Точность определения некоторых антибиотиков при восстановительном методе с бриллиантовым черным индикатором и в йогурт-тесте
Точность этих методов зависит от индивидуальной чувствительности тест-штаммов. Так как тест-микробы характеризуются некоторой изменчивостью, то их необходимо регулярно испытывать на чувствительность.Специфический метод определения пенициллина основан на добавке пенициллиназы к исследуемым пробам, что приводит к инактивации имеющегося пенициллина. Если в пробе, куда добавлена пенициллиназа, по сравнению с пробой без ее добавки, получен отрицательный результат на содержание примеси, то можно сделать заключение о содержании пенициллина в молоке. Полусинтетический пенициллин расщепляется в присутствии пенициллиназы только при нагревании до температуры 85°С в течение минимум 5 мин.Бриллиантовый черный индикатор по отношению к сульфаниламидам недостаточно чувствителен. Его следует использовать только при высокой концентрации сульфаниламидов в молоке, которая не наблюдается при парентеральном введении, а возникает, и то на короткое время, в результате внутрисоскового введения препарата.При обследовании молока на присутствие ингибиторов учет сульфаниламидов, как правило, не обязателен, так как их вводят в вымя лишь при острых маститах. Однако в том случае, если надо определить наличие сульфаниламидов в молоке, применяют более чувствительные тест-микробы и специальный агар.При микробиологических методах обнаружения в молоке остаточных веществ положительную реакцию могут давать, кроме антибиотиков и сульфаниламидов, и другие соединения: дезинфицирующие средства, продукты жизнедеятельности микроорганизмов и консервирующие вещества.При наличии в молоке дезинфицирующих средств даже в такой концентрации, которая является минимальной для обнаружения с использованием восстановительного метода с бриллиантовым черным, изменяется его запах и вкус.Появление в молоке дезинфицирующих средств возможно только при неправильном или небрежном их применении.Обычно в пробах молока с показателем рН ниже 5,4 и числом микроорганизмов до 2-107 в 1 мл обнаруживаются ингибиторы.Минимальные концентрации ингибиторов в молоке при его консервировании формальдегидом составляют 1 мкл и при консервировании перекисью водорода — 0,02% в 1 мл.В ФРГ при систематическом исследовании молока антибиотики были обнаружены менее чем в 1 % проб. В США после введения систематического контроля улучшилось качество молока: количество проб, в которых были обнаружены антибиотики, снизилось с 7 до 0,54%. В Швейцарии антибиотики содержались примерно в 2% проб поставляемого молока. Вернуться к оглавлению Ссылка на этот сайт (vetfac.narod.ru), и на автора обязательна. Если вы не нашли здесь того, что искали, вы можете заказать реферат или контрольную работу на этом сайте. Все работы выполняются опытным преподавателем микробиологии и не копируются с сайтов рефератов. Все подробности можно узнать, пройдя по этой ссылке. vetfac.narod.ru |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
 г.Самара, ул. Димитрова 131 [email protected] |
 |