 |
|
|
|||||||||
|
5. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам9. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам (антибиотикограммы) обычно применяют: • Метод диффузии в агар. На агаризованную питательную среду засевают исследуемый микроб, а затем вносят антибиотики. Обычно препараты вносят или в специальные лунки в агаре, или на поверхности посева раскладывают диски с антибиотиками («метод дисков»). Учет результатов проводят через сутки по наличию или отсутствию роста микробов вокруг лунок (дисков).Метод дисков - качественный и позволяет оценить, чувствителен или устойчив микроб к препарату. • Методы определения минимальных ингибирующих и бактерицидных концентраций, т. е. минимального уровня антибиотика, который позволяет предотвратить видимый рост микробов в питательной среде или полностью ее стерилизует. Это количественные методы, которые позволяют рассчитать дозу препарата, так как концентрация антибиотика в крови должна быть значительно выше минимальной ингибирующей концентрации для возбудителя инфекции. Введение адекватных доз препарата необходимо для эффективного лечения и профилактики формирования устойчивых микробов. Есть ускоренные способы, с применением автоматических анализаторов. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков. Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар или среду АГВ в чашке Петри. Среда АГВ: сухой питательный рыбный бульон, агар-агар, натрий фосфат двузамещенный. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с инструкцией. На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чувствительности к антибиотикам. Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов. Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность микроорганизмов методом серийных разведений. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений. Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106-107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика. Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по специальной готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов. К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата. Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз. Определение антибиотика в крови, моче и других жидкостях организма человека. В штатив устанавливают два ряда пробирок. В одном из них готовят разведения эталонного антибиотика, в другом - исследуемой жидкости. Затем в каждую пробирку вносят взвесь тест-бактерий, приготовленную в среде Гисса с глюкозой. При определении в исследуемой жидкости пенициллина, тетрациклинов, эритромицина в качестве тест-бактерий используют стандартный штамм S. aureus, а при определении стрептомицина - Е. coli. После инкубирования посевов при 37 °С в течение 18-20 ч отмечают результаты опыта по помутнению среды и ее окрашиванию индикатором вследствие расщепления глюкозы тест-бактериями. Концентрация антибиотика определяется умножением наибольшего разведения исследуемой жидкости, задерживающей рост тест-бактерий, на минимальную концентрацию эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий. Например, если максимальное разведение исследуемой жидкости, задерживающее рост тест-бактерий, равно 1:1024, а минимальная концентрация эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий, 0,313 мкг/мл, то произведение 1024х0,313=320 мкг/мл составляет концентрацию антибиотика в 1 мл. Определение способности S. aureus продуцировать бета-лактамазу. В колбу с 0,5 мл суточной бульонной культуры стандартного штамма стафилококка, чувствительного к пенициллину, вносят 20 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С питательного агара, перемешивают и выливают в чашку Петри. После застывания агара в центр чашки на поверхность среды помещают диск, содержащий пенициллин. По радиусам диска петлей засевают исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта. О способности исследуемых бактерий продуцировать бета-лактамазу судят по наличию роста стандартного штамма стафилококка вокруг той или другой исследуемой культуры (вокруг диска). studfiles.net 5. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикамОпределение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам методом серийных разведений (количественный метод). Данный метод определения антибиотикочувствительности является количественным и позволяет определить минимальную бактериостатическую и минимальную бактерицидную концентрации. Серийный метод титрования может быть выполнен в разных объемах среды (от 1 до 10 мл). Эксперименты выполняются в условиях асептики при использовании стерильных пипеток для каждого ингредиента реакции. Титрование можно проводить в плотных и жидких средах. При титровании в жидких средах в ряд пробирок наливают питательную среду в строго определенном объеме. Количество пробирок определяется количеством разведений препарата, которое необходимо взять в опыт. В 1-ю пробирку вносят определенное количество раствора антибиотика, перемешивают, затем определенный объем смеси из 1-й пробирки переносят во 2-ю, перемешивают и переносят то же количество смеси из 2-й в 3-ю и т. д. Из последней пробирки, содержащей антибиотик, такой же объем смеси выливают, чтобы во всех пробирках объем жидкости был одинаков. Пробирка, не содержащая антибиотика, является контрольной. После этого во все пробирки, содержащие серийно разведенный антибиотик, и в контрольную пробирку вносят одинаковое количество взвеси тест-культуры. Штатив с пробирками встряхивают и ставят в термостат при 37°С на 18—20 ч. Кратность разведения антибиотика обычно выбирают равной двум, для этого в каждую пробирку наливают, например, по 1 мл бульона, в 1-ю пробирку вносят 1 мл раствора антибиотика и переносят из пробирки в' пробирку по 1 мл смеси. При этом точность определения активности препарата составляет ±50%. Взвесь клеток исследуемой культуры готовят на изотоническом растворе хлорида натрия при обязательном сравнении со стандартами мутности. При титровании антибактериальных антибиотиков микробная нагрузка обычно составляет 2,5 × 105 микробных клеток на 1 мл раствора антибиотиков в питательном бульоне. Для этого готовят взвесь тест-культуры по стандарту 10 ед. мутности, что составляет 1 млрд. микробных тел в 1 мл. Взвесь разводят изотоническим раствором до концентрации 2,5×106 клеток в 1 мл и вносят в пробирки с серийно разведенным антибиотиком по 0,1 мл на 1 мл питательного бульона. При использовании в качестве тест-культуры дрожжей микробная нагрузка составляет 4×106 клеток в 1 мл. Метод серийных разведений в плотных средах отличается тем преимуществом, что микробы-загрязнители при этом легко выявляются и по существу не изменяют общих результатов титрования, тогда как на жидких средах весь опыт может оказаться безрезультатным из-за попадания в пробирки хотя бы единичных клеток посторонних устойчивых микроорганизмов. Этот метод используют также при работе с микроорганизмами, которые не растут на обычных жидких средах, например, микобактерии туберкулеза, которые выращивают на среде, содержащей свернутую сыворотку. Вначале готовят ряд серийных разведений антибиотика, а затем вносят по 1 мл каждого разведения в пробирку, содержащую 4 мл расплавленной и охлажденной до 45—50°С агаризованной среды. Затем пробирки скашивают до застывания агара, а на поверхность плотной среды петлей засевают взвесь тест-культуры. Для выявления бактерицидного действия препарата делают высев на МПА из всех пробирок, где визуально не отмечен рост микроорганизма. Для стойких антимикробных веществ, которые адсорбируются на микробных клетках и препятствуют их росту даже в свежей питательной среде, применяют соответствующие нейтрализаторы. Определение чувствительности микроорганизмов методом дисков (качественный метод). Диско-диффузионный метод используется для оценки эффективности антибиотиков в клинических условиях. Питательную среду (Мюллера-Хинтона, АГВ) разливают в чашки, помещенные на строго горизонтальной поверхности, заполнив их на одинаковую высоту 4 мм (25 мл среды для чашек с внутренним диаметром 9 см). Клинический материал или культуру микроорганизмов, выделенную от больного, засевают на поверхность питательного агара сплошным газоном. После посева крышку чашки приоткрывают не более чем на 15 мин и дают поверхности среды подсохнуть. Затем стерильным пинцетом следует положить на поверхность агара бумажные диски, пропитанные раствором определенного антибиотика, и слегка придавить. Расстояние между дисками и краем чашки должно быть не менее 15 мм. Чашки инкубируют около 18 ч при 37°С в перевернутом положении. При наличии чувствительной к антибиотику флоры вокруг соответствующих дисков отмечается зона угнетения роста микроорганизмов. Диаметр зоны измеряют с точностью до 1 мм, определяя чувствительность (высокая, средняя, низкая). Рисунок 11. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом. Ускоренный метод определения чувствительности микроорганизма к антибиотику В чашку Петри наливают 15 мл питательного агара. После застывания агара на него наносят смесь 4 мл такого же агара, 1 мл взвеси тест-культуры (приготовленной по стандарту 1 млрд микробных клеток в 1 мл) и 1 мл 0,2% водного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола (рН 7,2—7,3). Вместо культуры можно использовать клинический материал. Затем на застывший агар ярко-синего цвета наносят диски, пропитанные антибиотиками, и чашки ставят в термостат при 37°С. Через 2-4 ч учитывают результаты по диаметру синих зон отсутствия роста. Резистентные к антибиотику микроорганизмы восстанавливают краситель, обесцвечивая его или трансформируя в желтый цвет. Данный краситель задерживает рост стафилококков, поэтому при работе с этим микроорганизмом раствор индикатора наливают на поверхность чашки в количестве 2—3 мл уже после выдерживания чашки с дисками в термостате. Избыток индикатора сливают через 5—7 мин и учитывают результаты. Элипсометрическийи метод (Е-тест) занимает промежуточное положение между методом бумажных дисков и методом серийных разведений, являясь качественно-количественным методом. В нем используется узкая полоска полимера, пропитанная разными концентрациями антибиотика (от минимальных до максимальных), которая наносится на поверхность плотной питательной среды, предварительно засеянной испытуемой культурой. Задержка роста культуры вокруг полоски наблюдается в той зоне, где концентрация антибиотика выше МИК. На поверхности полоски нанесены типографским способом величины концентрации антибиотика в каждом участке. Если культура обладает чувствительностью к антибиотику, то зона задержки роста имеет каплевидную (элипсовидную) форму. За величину минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика принимают отрезок полоски, к которому вплотную подходит рост микроба. Рисунок 12. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов. studfiles.net Реферат на тему "Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам"
Содержание: 1)Диско - диффузные методы. 2)Методы разведения. 3) Интерпретация результатов определения чувствительности. Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2 группы: диффузионные и методы разведения.
1)При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности (обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по McFarland) и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35о-37оС в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах (рис. 1). Рисунок 1. Определение чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом. 2)Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (рис. 2). В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).
Рисунок 2. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов. Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод. 3)Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон) или в агар. Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35о-37оС проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 3).
Рисунок 3. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде. Интерпретация результатов определения чувствительности На основании получаемых количественных данных (диаметра зоны подавления роста антибиотика или значения МПК) микроорганизмы подразделяют на чувствительные, умеренно резистентные и резистентные (рис. 4). Для разграничения этих трех категорий чувствительности (или резистентности) между собой используют так называемые пограничные концентрации (breakpoint) антибиотика (или пограничные значения диаметра зоны подавления роста микроорганизма). Рисунок 4. Интерпретация результатов определения чувствительности бактерий в соответствии со значениями МПК. Пограничные концентрации не являются неизменными величинами. Они могут пересматриваться, в зависимости от изменения чувствительности популяции микроорганизмов. Разработкой и пересмотром критериев интерпретации занимаются ведущие специалисты (химиотерапевты и микробиологи), входящие в специальные комитеты. Одним из них является Национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам США (National Committee for Clinical Laboratory Standards - NCCLS). В настоящее время стандарты NCCLS признаны в мире и используются как международные для оценки результатов определения чувствительности бактерий при многоцентровых микробиологических и клинических исследованиях. Существуют два подхода к интерпретации результатов определения чувствительности: микробиологический и клинический. Микробиологическая интерпретация основана на анализе распределения значений концентраций антибиотика, подавляющих жизнеспособность бактерий. Клиническая интерпретация основана на оценке эффективности антибактериальной терапии. Чувствительные микроорганизмы (susceptible) Клинически к чувствительным относят бактерии (с учетом параметров, полученных in vitro), если при лечении стандартными дозами антибиотика инфекций, вызываемых этими микроорганизмами, наблюдают хороший терапевтический эффект. При отсутствии достоверной клинической информации подразделение на категории чувствительности базируется на совместном учете данных, полученных in vitro, и фармакокинетики, т.е. на концентрациях антибиотика, достижимых в месте инфекции (или в сыворотке крови). Резистентные микроорганизмы (resistant) К резистентным (устойчивым) относят бактерии, когда при лечении инфекции, вызванной этими микроорганизмами, нет эффекта от терапии даже при использовании максимальных доз антибиотика. Такие микроорганизмы имеют механизмы резистентности. Микроорганизмы c промежуточной резистентностью (intermediate) Клинически промежуточную резистентность у бактерий подразумевают в случае, если инфекция, вызванные такими штаммами, может иметь различный терапевтический исход. Однако лечение может быть успешным, если антибиотик используется в дозировке, превышающей стандартную, или инфекция локализуется в месте, где антибактериальный препарат накапливается в высоких концентрациях. С микробиологической точки зрения к бактериям с промежуточной резистентностью относят субпопуляцию, находящуюся в соответствии со значениями МПК или диаметра зон, между чувствительными и резистентными микроорганизмами. Иногда штаммы с промежуточной резистентностью и резистентные бактерии объединяют в одну категорию резистентных микроорганизмов. Необходимо отметить, что клиническая интерпретация чувствительности бактерий к антибиотикам является условной, поскольку исход терапии не всегда зависит только от активности антибактериального препарата против возбудителя. Клиницистам известны случаи, когда при резистентности микроорганизмов, по данным исследования in vitro, получали хороший клинический эффект. И наоборот, при чувствительности возбудителя может наблюдаться неэффективность терапии.В определенных клинических ситуациях, когда недостаточно результатов исследования чувствительности обычными методами, определяют минимальную бактерицидную концентрацию. Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) - наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая при исследовании in vitro вызывает гибель 99,9% микроорганизмов от исходного уровня в течение определенного периода времени.
Значение МБК используют при терапии антибиотиками, обладающими бактериостатическим действием, или при отсутствии эффекта от антибактериальной терапии у особой категории больных. Частными случаями для определения МБК могут быть, например, бактериальный эндокардит, остеомиелит или генерализованные инфекции у пациентов с иммунодефицитными состояниями. В заключение хотелось бы отметить, что на сегодняшний день не существует методов, которые позволили бы с абсолютной достоверностью прогнозировать клинический эффект антибиотиков при лечении инфекционных болезней. Однако, данные результатов определения чувствительности могут служить хорошим ориентиром клиницистам для выбора и коррекции антибактериальной терапии. Таблица 1. Критерии интерпретации чувствительности бактерий
Список использованной литературы в реферате: 1)Руководство к практическим занятиям по частной микробиологиипод ред.Романова В.А. 2)Медицинская микробиология под ред.Воробьёва А.А. 3)http://www.antibiotic.ru/rus/all/articles/absens.shtml 4)http://meduniver.com/Medical/Microbiology/206.html studfiles.net Методы определения чувствительности микробов к антибиотикамДля определения чувствительности микробов к антибиотикам существует ряд методов, среди которых наиболее распространены: метод последовательных разведений в жидкой питательной среде или питательном агаре, метод диффузии в агар (метод дисков, насыщенных антибиотиками) и ряд ускоренных методов. Определение чувствительности микробов к антибиотикам in vitro проводится в условиях, значительно отличающихся от тех, в которых препарат действует в организме. На его результаты большое воздействие оказывают такие факторы, как состав и рН питательной среды, величина посевной дозы, возраст культуры, условия культивирования и др. При использовании метода диффузии в агар на результаты исследований влияют толщина слоя питательной среды, ее влажность, скорость диффузии антибиотиков, скорость роста исследуемых микроорганизмов и др. Метод диффузий в агар (метод бумажных дисков) наиболее прост и широко используется, однако является лишь качественным. Метод последовательных разведений антибиотика в питательной среде в стандартных условиях опыта является более надежным и точным количественным методом. Метод серийных разведений Показанием к определению чувствительности методом серийных разведений является необходимость получения количественных данных (преимущественно при тяжелом течении процессов) для проведения регулируемой антибиотикотерапии (разработка режимов введения). Установление степени чувствительности к ряду антибактериальных препаратов микроба, вызывающего инфекционный процесс, влияет на выбор антибиотика (отказ от препаратов, характеризующихся относительно высокой токсичностью при умеренной чувствительности к ним возбудителя), его дозировку (концентрация антибиотика в крови в 2 — 3 раза должна превышать его МПК в отношении возбудителя) и режим введения. Количественное определение чувствительности необходимо также для определения бактерицидности избранного препарата (как гарантии быстрого терапевтического эффекта и безрецидивного течения) в отношении данного возбудителя. Существуют две модификации метода — определение чувствительного микробов к антибиотикам на жидкой и на плотной питательных средах. Метод дает возможность определить минимальную подавляющую рост концентрацию антибиотика (МПК) для выделенного штамма возбудителя. Он заключается в приготовлении ряда последовательных разведений антибиотиков в питательной среде с внесением во все разведения исследуемой культуры по подавлению роста микроба определенной концентрацией антибиотика в питательной среде судят о степени чувствительности микроорганизма. «Рациональная антибиотикотерапия»,С.М.Навашин, И.П.Фомина Неудачи антибиотикотерапии могут быть обусловлены также неправильным выбором доз и методов введения препарата, поздним началом лечения, применением антибиотиков в заниженных дозах при комбинированной терапии, недостаточной продолжительностью лечения и т. д. Не всегда принимается также во внимание возможность инактивации антибиотиков ферментными системами организма, связывания белками крови и тканей, некротическими массами и др. Неудовлетворительные результаты лечения при… К ускоренным методам определения чувствительности относится метод, с помощью которого обнаруживается образование инволюционных форм бактерий под действием антибиотика при фазово-контрастной микроскопии. Инволюционные формы микроорганизмов образуются в присутствии бактериостатических концентраций антибиотика. В отсутствие его при действии суббактериостатических концентраций, а также при устойчивости изучаемого штамма к препарату вырастают нормальные микроколонии. Морфологические изменения исследуемых культур под действием антибиотика… В случае чувствительности к действию антибиотика штамма возбудителя не происходит сбраживания глюкозы при культивировании на среде, содержащей глюкозу, феноловый красный (в качестве индикатора) и определенные концентрации антибиотика. При этом среда окрашивается в фиолетовый цвет вследствие ее подщелачивания. Изменение красного цвета среды на желтый свидетельствует о расщеплении глюкозы с образованием кислоты в результате роста штамма, устойчивого… В Англии до настоящего времени применяют предложенный Flemming метод канавки. Для определения чувствительности микробов к антибиотикам этим методом в чашке с агаром вырезают полоску для получения канавки, а затем засевают штрихом перпендикулярно к канавке испытуемые штаммы микробов. Канавка заполняется растопленным и охлажденным до 35—60°С агаром, содержащим определенные концентрации антибиотика. Благодаря диффузии антибиотика в питательную среду… Отсутствие зоны задержки роста микроба вокруг диска свидетельствует о том, что испытуемый штамм нечувствителен к данному антибиотику; при зоне диаметром до 10 мм штамм расценивается как малочувствительный. Единичные колонии или тонкая пленка роста внутри зоны задержки роста не учитываются. Размер зон может меняться в зависимости от толщины слоя агара, густоты микробного газона, состава среды. Однако… Для сокращения объема испытания следует использовать наборы дисков с учетом вида выделенного возбудителя и локализации инфекции (смотрите таблицу ниже). Основные наборы дисков с антибиотиками, рекомендуемые для определения чувствительности в зависимости от вида выделенной культуры и патологического материала Антибиотик, содержащийся в диске Предварительное испытание чувствительности микрофлоры патологического материала Испытание чувствительности чистой культуры гной моча мокрота Staphylococcus… Для контроля точности и стандартности проведения исследований в каждом опыте необходимо использовать тест-культуры с известной чувствительностью к антибиотикам. ВОЗ рекомендует для этой цели три культуры Американской коллекции типовых культур: Escherichia coli (АТСС 25922), Staphylococcus aureus (АТСС 25923), Pseudomonas aeruginosa (АТСС 27853). При определении чувствительности выделенных возбудителей необходимо проводить контрольный анализ с измерением зон задержки роста… Приготовление чашек Расплавленную агаризованную среду (бульон на переваре Хоттингера с содержанием 120—140 мг% аминного азота — 1000 мл; агар-агар «тафуинский» —15 г, натрия фосфат двузамещенный — 3 г, рН после стерилизации 7,0—7,2) разливают по 20 мл в стерильные чашки Петри диаметром 100 мм, расположенные на горизонтальной поверхности. Перед заражением поверхность застывшей среды подсушивают в течение… Из двух способов определения чувствительности микробов к антибиотикам (в жидкой и плотной среде) более точным является метод серий разведений в жидкой среде. Результаты, полученные при определении чувствительности в твердой питательной среде, менее постоянны. Метод разведений в агаре не следует применять для оценки чувствительности микробов, дающих тонкий, разреженный рост (стрептококки, пневмококки) или широко распространяющихся по поверхности… В зависимости от величины посевной дозы значение МПК антибиотика может колебаться: при увеличении дозы чувствительность снижается за счет возрастания количества образуемой стафилококками пенициллиназы в среде. Пробирки инкубируют при 37° С в течение 18—24 ч. Результаты учитывают, определяя наличие или отсутствие роста микроба в среде, содержащей различные разведения антибиотика. Последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон)… www.medvyvod.ru |
 г.Самара, ул. Димитрова 131 [email protected] |
 |